EGFR基因重组T7噬菌体疫苗抗Lewis肺癌的实验研究

本研究中制备了表达表皮生长因子受体(EGFR)部分肽段的基因重组T7噬菌体疫苗,并开展了诱导小鼠产生内源性抗EGFR抗体的实验性抗肿瘤作用研究。由T7噬菌体展示系统将7个经筛选的异种属(人源、鸡源)EGFR膜外区片段展示在其壳体次要头蛋白(P10B)上,用所制备的基因重组噬茵体疫苗免疫小鼠,免疫4W后皮下接种Lewis肺癌细胞,10d后分离瘤体并称重,观察各实验组的抗肿瘤效果。Western Blot检测重组的融合壳蛋白均有EGFR抗原性:高表达EGFR的A431 细胞与免疫3W的小鼠抗血清结合并被荧光二抗标记,流式细胞仪检测法确认有抗EGFR抗体产生;各实验组肿瘤均重统计结果显示,P-CL1-670组、P-cp1-130组、P-cp2-136组、P-cp3-145组、 P-cp4-142组与空白噬菌体组差异性显著。说明表达EGFR的基因重组噬菌体疫苗诱导产生的内源性抗体．在一定程度上抑制了EGFR阳性肿瘤的生长．为诱导型内源性抗EGFR抗体的肿瘤靶向治疗研究开辟了新的途径。

表皮生长因子受体为靶向重组T7噬菌体抗肿瘤疫苗的构建

目的:构建表皮生长因子受体(EGFR)为靶向的重组T7噬菌体抗肿瘤疫苗。方法:通过RT-PCR克隆EGFR基因膜外DNA片段,经测序鉴定正确,亚克隆3个不同的DNA片段插入T7噬菌体载体,构建重组T7噬菌体。用PCR、SDS-PAGE和Western印迹法鉴定构建的重组T7噬菌体。结果:目的DNA片段以融合蛋白形式表达,展示于噬菌体壳蛋白,Western印迹显示实验组重组T7噬菌体呈阳性信号。结论:构建的重组T7噬菌体融合表达了外源目的多肽,并保持了原有的功能活性。

T7噬菌体表达巨细胞病毒PP65蛋白抗原的初步研究

目的利用噬菌体展示技术构建巨细胞病毒基质蛋白PP65的抗原,初步评价其抗原性。方法PP65的基因片段经酶切后,与T7噬菌体的基因组相应酶切位点结合,借助包装蛋白组装成为完整的噬菌体。PP65目的蛋白以融合蛋白的形式表达在T7噬菌体的头蛋白部位,每个噬菌体颗粒表面可表达5～15个拷贝。噬菌体可以在宿主细胞中快速繁殖,并且能够迅速裂解宿主细胞,使目的蛋白的富集达到很高的效率。人巨细胞病毒基质蛋白PP65可以激发机体强烈的免疫反应,运用T7噬菌体载体展示系统表达PP65的部分肽段,扩增噬菌体,以SDS-PAGE电泳和western-blot鉴定所表达的抗原特性。结果获得了重组T7-PP65噬菌体,通过鉴定,噬菌体表达在其头蛋白上的PP65抗原可以被天然PP65的单克隆抗体所识别。结论噬菌体展示技术可以有效地进行病毒蛋白抗原的表达,为抗原筛选和疫苗的研制提供科学依据。将PP65表达在T7噬菌体表面,可以研究其免疫原性及评估其作为疫苗的可能性。

表皮生长因子受体为靶向重组T7噬菌体抗肿瘤疫苗的构建及免疫活性

利用RT-PCR技术从人A431细胞中克隆表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)基因N端序列,经测序鉴定正确。将膜外序列不同功能及模拟抗原呈递较佳的亚克隆DNA片段插入T7噬菌体表达载体,从而构建了重组T7噬菌体抗肿瘤疫苗并用于动物免疫注射,用斑点印迹(dotblot)和MTT法分别检测到特异性抗体和细胞毒性T淋巴细胞反应。结果显示,以噬菌体颗粒为载体的疫苗可以诱导体液免疫反应和细胞免疫反应。

微环境对牙周膜干细胞分化的抑制和诱导作用

牙周膜干细胞(PDLSC)在牙周组织缺损修复和维持牙周动态平衡中起关键性的作用,是牙周组织再生修复治疗的基础细胞。在不同微环境作用下,PDLSC的增殖分化特性呈现出较大的差别。牙周膜干细胞龛和炎症等微环境对PDLSC的分化有抑制作用,然而,牙本质微环境及发育期根尖微环境能促进PDLSC的分化。研究不同的微环境对PDLSC功能的影响,一方面有助于深入研究PDLSC的生物学功能,另一方面为PDLSC应用于牙周疾病的再生治疗提供理论依据。本文就不同的微环境对PDLSC分化的抑制和诱导作用研究进展作一综述,并展望PDLSC在牙周缺损再生治疗中的应用前景。

造血干细胞移植联合 CAR-T 细胞治疗的研究进展

造血干细胞移植是将自体或者异体的造血干细胞移植给受者,使受者重建造血和免疫功能的治疗手法,广泛应用于血 液病、遗传性疾病和肿瘤治疗。CAR-T 是一种新型的细胞免疫疗法,将患者体内的 T 淋巴细胞分离,在体外进行基因改造, 再回输到患者体内,特异性杀伤肿瘤。两种治疗方法是对放疗和化疗的重要补充和创新,将两者结合用于疾病治疗是医学领 域新的研究课题,本文介绍造血干细胞移植联合 CAR-T 细胞治疗癌症的研究进展。

简述新时代民族语译制工作的重要性

我国少数民族语言使用现状较为复杂,语言决定了民族观众的认知心理,语言接受决定了其对汉语影视作品的理解程度,也影响了汉语影视作品在民族地区的传播效果。面对新媒体时代的现状,国家从民族语译制方面加大了对少数民族语言的推广与保护,不仅使更多少数民族群众能看上、看懂优秀影视作品,也有利于民族语言的传承,在一定程度上延缓了濒危语言的流失速度。

无血清培养人胚胎干细胞的体系研究与进展

背景:人胚胎干细胞有永久自我更新和向外、中和内胚层分化的能力,具有重要的基础研究价值和临床应用前景,可应用于再生医学、药物毒性筛选、早期胚胎发育、细胞移植治疗和基因治疗等领域,但是在限定条件下的大规模细胞培养、控制和定向分化技术的发展仍然具有实质性的挑战。在治疗应用方面,许多研究者试图建立可在无异源限定性和规模化培养体系中维持细胞多能性的培养方法。目的:综述近几年报道的人胚胎干细胞的无血清培养体系研究进展,重点是在发展适于治疗用途的无血清和无异源培养体系进程中,面临的挑战和进步。方法:应用计算机检索CNKI和Pub Med学术数据库中2008至2015年关于人胚胎干细胞无血清培养的文章,排除观点重复和陈旧的文章,最后对58篇文章进行归纳汇总。结果与结论:研究者已经在使用人源性饲养层细胞、无饲养层基质及限定性成分培养基上做了许多尝试,旨在选择合适的基质和培养基,使异源性成分达到最小化或者不使用,以求获得临床级别的细胞株。但是目前的细胞制品距离临床应用还有很大的距离,仍有很多问题需要解决,比如细胞制品的规范化、标准化、个性化定制等。相信随着干细胞研究和行业的规范,胚胎干细胞产品将会在临床得到广泛应用。

无血清培养CHO细胞的研究进展

CHO细胞是生产单克隆抗体、疫苗和重组蛋白等生物制品最重要的表达系统,无血清培养基相比天然培养基、合成培养基具有无可比拟的优势,因此开发和应用适于CHO细胞培养的无血清培养基,具有重要的科研和临床意义。本文综述了无血清培养CHO细胞的研究进展。

FTGS轨道电路离线测试平台开发

针对广州地铁1、2、8号线轨道电路故障板件维修难、检测难的问题,本文对轨道电路的内部结构和外部接口进行了分析,提出了一种离线测试平台的设计方案,并通过信号模拟的方式,将该设计运用到实际维修中,提高了维修效率。

轨道电路大修后接收电压降低原因分析

针对FTGS-917型轨道电路轨旁设备大修后,由于原并联谐振点发生偏移,导致的轨道电路接收电压降低,以及在室内板件轮换后,因板件可调元件参数发生了变化,导致输出电压降低等问题,进行了深度分析,以便于为该类型的轨道电路维修工作提供相关技术指导,同时也为其他地铁线路维修时出现相似情况做理论参考。

旋转式生物反应器培养细胞因子诱导的杀伤细胞研究

目的采用旋转式生物反应器(rotating wall-vessel bioreactor,RWV)与传统的T-Flask培养瓶培养人外周血细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞,比较CIK细胞的增殖能力、细胞因子分泌情况、细胞杀伤力.方法提取健康志愿者的外周血,分离出外周单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),体外诱导成CIK细胞,分别接种到T-Flask培养瓶及RWV中培养.采用台酚蓝染色法检测细胞活率并绘制其生长曲线;ELISA法检测各组CIK细胞的IL-2,IFN-γ,TNF-α分泌情况;乳酸脱氢酶测定法检测CIK细胞对靶细胞的杀伤力.结果与传统的T-Flask培养瓶培养CIK细胞比较,RWV培养CIK细胞增殖数量明显多且生长力旺盛;使用RWV培养CIK细胞能使其分泌更多的IL-2,IFN-γ,TNF-α细胞因子;RWV组培养的CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤力更强.结论RWV培养CIK细胞更能提高其增殖能力、细胞因子分泌能力及肿瘤杀伤活力,同时可解决传统细胞培养数量少、稳定性差、易污染、工作量大及周期长等问题,有效地降低临床治疗成本.

低氧对造血干细胞的影响

造血干细胞是一类具有自我更新能力和能够产生高度分化的功能细胞。有关造血干细胞的研究受到学者的广泛关注。其中,造血干细胞的增殖与分化一直是研究的重点,低氧对造血干细胞的增殖、分化具有重要的调节作用。本文综述了近年来国内外报道的低氧对造血干细胞的增殖、周期调控及相关机制。

3D支架在造血干细胞体外扩增中的应用

造血干细胞具有自我更新和多向分化的潜能,能够发育为血液系统和免疫系统。3D支架能模拟体内骨髓微环境,现就3D支架在造血干细胞体外培养体系中的研究进展予以综述。

3D支架材料在造血干细胞培养中的应用

造血干细胞具有长期自我更新和多向分化的潜能,被广泛应用于治疗血液疾病和自身免疫性疾病。造血干细胞的三维细胞培养技术在细胞扩增和干性维持上优势明显,具有重要的临床意义。3D支架材料的选择和应用是三维技术的关键之一。本文对3D培养的支架材料以及其在造血干细胞中的应用做一综述。

人间充质干细胞的无异源培养体系研究进展

人间充质干细胞具有自我更新和多向分化的潜能,越来越多的应用于细胞再生医学领域。临床应用细胞制剂的制备,需要在GMP指导下对人间充质干细胞进行体外扩增。传统的方法人间充质干细胞扩增方法含FBS,但由于存在批次间质量差异、异源污染和免疫排斥风险,无异源培养方法显得尤为必要。多种替代FBS的人源性血液成分已经在研究之中,如血清、血浆和血小板衍生物等。化学成分限定性培养基是标准化的最终目标,目前已有商业化的培养基上市。无异源培养基是临床细胞分离和扩增的前提,可保证临床细胞治疗应用的安全性和有效性,是该领域走向产业化的必然趋势。本文对人间充质干细胞的无异源培养体系研究进展做一综述。

民族语译制为促进民族间的社会进步发挥作用

少数民族语言是民族文化中祖先智慧的结晶,是民族文化的灵魂.民族语译制工作从精神文化层面促进了民族间的沟通交流,提升了民族之间的道德文化建设,加强了少数民族地区的人才培养,推动了民族语言创新以增强沟通活力.同时民族语译制工作贴近少数民族群众的日常生活,有利于少数民族地区文化事业的进步、社会生活观念的更新、经济的发展,为促进民族之间的社会进步发挥了积极的作用,增强了民族情感的认同,实现了民族语言的保护和传承.

无血清培养基分离肿瘤干细胞的研究进展

肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)被认为是肿瘤形成、生长、转移以及复发的根本原因。CSCs的分离、鉴定为CSCs的研究及靶向CSCs疗法的开发奠定了基础。目前,无血清培养法已经是分离培养CSCs的常用方法。本文对无血清培养基(serum free medium,SFM)分离CSCs的研究进展作一综述。