基于网络药理学和细胞实验探讨桂枝茯苓丸对卵巢癌的作用

目的通过网络药理学和体外实验探索桂枝茯苓丸作用于卵巢癌的分子机制。方法从公共数据库中获取桂枝茯苓丸的活性成分以及桂枝茯苓丸和卵巢癌的潜在靶点,然后构建蛋白-蛋白质相互作用(PPI)网络、活性成分-靶点网络及疾病-药物-活性成分-靶点网络,并通过DAVID数据库进行GO和KEGG富集分析,利用AutodockTools软件对核心活性成分和核心靶点进行分子对接。基于网络药理学结果,选择不同浓度桂枝茯苓丸含药血清干预SKOV3细胞,以流式细胞术检测细胞凋亡水平,通过蛋白免疫印迹法对PI3K/Akt通路及凋亡相关蛋白进行验证。结果筛选得到桂枝茯苓丸476个与活性成分关联的靶点,117个与卵巢癌相关基因,其中有20个共同靶点,这些靶标与细胞凋亡、细胞增殖和分化、蛋白质密切相关,并可能通过癌症中的蛋白聚糖、癌症中的碳代谢、粘着斑、PI3K/Akt信号通路、ErbB信号通路等25个相关途径发挥作用。体外细胞实验证实,桂枝茯苓丸能以浓度和时间依赖性地抑制SKOV3细胞增殖,可以抑制PI3K/Akt通路从而促进SKOV3细胞凋亡。结论桂枝茯苓丸可通过多成分、多靶点、多通路治疗卵巢癌,初步验证桂枝茯苓丸能抑制PI3K/Akt通路促进细胞凋亡,发挥治疗卵巢癌的作用。

卵巢早衰的免疫因素研究进展

近年来,卵巢早衰(POF)的发病率呈现逐年上升的趋势,严重影响育龄期妇女的生活和对生育的要求。但POF病因复杂,主要发病因素有医源性因素、环境因素、遗传因素、感染因素及免疫性因素等。有大量研究报道自身免疫性疾病患者并发POF的病例。有研究报道转化生长因子β1(TGF-β1)在POF和类风湿关节炎患者血清中均表达降低,而炎症因子白细胞介素21(IL-21)、IL-6、IL-17则均表达升高,这些细胞因子及炎症因子均参与卵巢卵泡的发育闭锁过程。自身免疫性POF以自身免疫性抗体的发现及合并自身免疫性疾病为诊断要点。POF与自身免疫性疾病之间存在相同的表达因子,其免疫机制与自身免疫性疾病的免疫机制是否存在同源性有待进一步研究。

中西医结合之我见

新中国成立后,国家大力支持中医药事业的发展,并努力寻求与现代医学即西医学的结合点,以期达到优势互补。然而,中医与西医是在两种完全不同的理论指导下的医学,理论指导上没有办法结合,现代学者采用西医的研究思路来研究中医也无终而果,两种体系对疾病的诊断和治疗更是截然不同。因此,中西医结合的研究是失败的,其指导理论上的差异决定了两者的不相融性,所以不能结合。但近年整合医学的提出为中医和西医找到了嵌合点,但这个嵌合点只能是借助于整合医学体系来实现,即整合医学体系下中医与西医的整合。

代谢组学在痛风及高尿酸血症研究中的应用

代谢组学是继基因组学、蛋白组学后发展起来的一门以研究小分子物质的产生和代谢为基础的科学。中医药在治疗痛风及高尿酸血症较西药有明显优势,且疗效确切,然中医药的药效评价体系仍不明确,通过对代谢组学用于痛风及高尿酸血症中医药研究进行总结和思考,以期为中医药现代化治疗痛风及高尿酸血症提供更多的思路。

活血滋肾方治疗肾虚血瘀型免疫性卵巢早衰临床观察

目的观察活血滋肾方治疗肾虚血瘀型免疫性卵巢早衰的临床疗效。方法将63例符合纳入标准的免疫性卵巢早衰患者采用随机表法分为两组,试验组(32例)服用中药汤剂活血滋肾方,对照组(31例)服用克龄蒙(戊酸雌二醇/雌二醇环丙孕酮片),治疗3个月。比较两组患者治疗前、治疗结束后Kuppermann评分,促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_2)、抗缪勒管激素(AMH)和抑制素B(INHB)水平,抗核抗体(ANA)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体水平。结果两组治疗后症状积分比治疗前均明显降低(P<0.05),试验组治疗后症状积分下降更为显著(P<0.05);治疗3个月后两组患者FSH、LH下降(P<0.05),E_2、AMH、INHB升高(P<0.05),其中试验组改善更为显著(P<0.05);对照组16例系统性红斑狼疮(SLE)患者ANA水平及15例类风湿关节炎(RA)抗CCP抗体水平治疗前后比较,差异均无统计学意义(P>0.05);试验组14例SLE患者ANA水平及18例RA患者抗CCP抗体水平治疗前后比较,差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论活血滋肾方及克龄蒙都能改善肾虚血瘀型免疫性卵巢早衰患者的临床症状,改善性激素水平,但活血滋肾方效果优于克龄蒙。

基于自噬研究麒麟丸对环磷酰胺诱导的卵巢储备功能减退模型小鼠卵巢储备功能的影响

目的:探讨麒麟丸对环磷酰胺诱导的卵巢储备功能减退(DOR)模型小鼠卵巢功能及自噬水平的影响。方法:18只SPF级雌性C57BL/6小鼠随机分为3组:正常对照组,模型对照组,麒麟丸组。麒麟丸组予麒麟丸溶液灌胃(5.46g·kg^(-1)·d^(-1)),正常对照组及模型对照组予等体积0.5%CMC-Na溶液灌胃,连续5周;自第2周起,模型对照组及麒麟丸组予环磷酰胺腹腔注射(75mg/kg),正常对照组予等体积0.9%氯化钠注射液腹腔注射,每周1次,共4周。ELISA法检测血清抗米勒管激素(AMH)水平,HE染色统计各级卵泡数及比例,RT-qPCR检测LC3B、P62、Becn1、Atg5、Atg7 mRNA表达,免疫组化法检测卵巢LC3B蛋白表达,Western Blot法检测分析卵巢LC3B、P62蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠卵巢系数、AMH水平显著降低(P<0.01),始基卵泡、初级卵泡及次级卵泡数量显著减少(P<0.05,P<0.01),闭锁卵泡显著增加(P<0.01);卵巢内Becn1、LC3B、Atg7 mRNA水平显著升高,P62 mRNA水平显著降低(P<0.01);LC3B-Ⅱ蛋白水平显著升高,P62蛋白水平显著下降(P<0.01)。与模型对照组比较,麒麟丸组小鼠卵巢系数及AMH水平显著升高(P<0.05),始基卵泡数显著增加,发育中卵泡及闭锁卵泡比例显著降低(P<0.01,P<0.05)。Becn1、LC3B、Atg7 mRNA水平显著降低,P62 mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。LC3B-Ⅱ蛋白表达显著降低,P62蛋白表达显著增加(P<0.01)。结论:麒麟丸可抑制环磷酰胺诱导的C57BL/6小鼠始基卵泡过度激活,减少卵泡闭锁,保护卵巢储备功能,其作用机制可能与抑制卵巢内过度自噬有关。

清热除痹方对大鼠痛风性关节炎NALP3炎性体信号通路的影响

目的探讨清热除痹方治疗大鼠痛风性关节炎(GA)以及对NALP3炎性体信号通路的影响。方法将162只大鼠随机分为6组,每组27只,分别为正常组,模型组,清热除痹方高、中、低剂量组(22,11,5.5g·kg^(-1)·d^(-1)),秋水仙碱阳性药物组(0.2 mg·kg^(-1)·d^(-1))。实验组分别用药物灌胃,模型组和正常组均给予等体积蒸馏水灌胃,连续灌胃11 d,于第8 d除正常组外所有大鼠均采用尿酸钠膝关节腔注射法进行模型复制,观察模型复制后24 h大鼠步态分级。并于模型复制后24,48,72 h各时间点每组取9只大鼠心脏采血3 m L并处死大鼠,ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量。并于相应时间点取大鼠膝关节滑膜组织。Western Blot检测滑膜Nod样受体蛋白3(NALP3)、炎性体凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和半胱氨酸天冬氨酸酶-1(caspase-1)的蛋白表达,ELISA测定滑膜IL-1β含量。模型复制后72 h,采用苏木素-伊红(H&E)染色观察大鼠膝关节滑膜组织病理学改变。结果与正常组比较,模型组大鼠步态显著变差(P<0.01),滑膜组织炎症反应明显,各时间点模型组血清中炎性因子TNF-α,IL-1β含量显著升高(P<0.01),滑膜组织中NALP3、ASC、caspase-1、IL-1β表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,清热除痹方高、中、低剂量组和秋水仙碱组步态均得到明显改善(P<0.01),滑膜组织炎症反应不同程度减轻,各时间点血清中TNF-α、IL-1β含量显著降低(P<0.05,P<0.01);各时间点滑膜NALP3、ASC、caspase-1、L-1β表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论清热除痹方能够通过抑制NALP3炎性体信号通路有效治疗GA大鼠。

紫草素对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo线粒体自噬和功能的影响

目的研究紫草素对HTR-8/Svneo细胞线粒体自噬和线粒体功能的影响。方法将人绒毛膜滋养层细胞分为4组:对照组、Mdivi^(-1)组、紫草素组和紫草素+Mdivi^(-1)组。对照组正常培养;Mdivi^(-1)组以5μmol·L^(-1) Mdivi^(-1)处理;紫草素组用0.8μmol·L^(-1)紫草素干预;紫草素+Mdivi^(-1)组以0.8μmol·L^(-1)紫草素+5μmol·L^(-1) Mdivi^(-1)干预处理。用流式细胞术检测细胞凋亡率;用ATP检测试剂盒测定细胞ATP含量;用Dihydroethidium(DHE)荧光检测探针测定细胞内超氧化物水平;用蛋白质印迹法测定线粒体自噬相关蛋白表达水平。结果细胞分组处理24 h后,对照组、Mdivi^(-1)组、紫草素组、紫草素+Mdivi^(-1)组的凋亡率分别为(6.86±0.37)%,(7.14±0.23)%,(39.97±1.52)%和(14.63±1.19)%;这4组的ATP含量为100%,(89.13±6.23)%,(52.03±9.12)%和(67.84±10.03)%;这4组的DHE探针荧光强度为23.02±1.56,23.42±0.51,43.96±0.62和36.23±1.89;这4组的PTEN介导的假定激酶蛋白1(PINK1)蛋白表达水平为0.37±0.14,0.57±0.13,1.26±0.15和0.97±0.07。上述指标,紫草素组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论紫草素能抑制HTR-8/Svneo细胞增殖,通过PINK1/Parkin通路诱导线粒体自噬的发生且伴有线粒体功能损伤,最终发生细胞凋亡。

麒麟丸对卵巢储备功能减退模型小鼠生育能力及卵巢组织HIF-1α/Bnip3/Beclin1信号通路的影响

目的探讨麒麟丸对卵巢储备功减退(DOR)小鼠生育能力的影响及可能作用机制。方法36只C57BL/6雌性小鼠随机分为空白组、模型组、麒麟丸组,每组12只。麒麟丸组以麒麟丸混悬液5.46g/(kg·d)灌胃,空白组及模型组予0.5%羧甲基纤维素钠溶液20ml/(kg·d)灌胃,共5周。灌胃1周后,模型组和麒麟丸组腹腔注射环磷酰胺溶液75mg/kg诱导DOR小鼠模型,空白组腹腔注射生理盐水10ml/kg,均每周1次,共4周。用药期间每日观察动情周期,用药结束后每组随机处死6只小鼠,Western Blot法检测卵巢组织缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、B淋巴细胞瘤-2基因/腺病毒E1B相互作用蛋白3(Bnip3)、自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)蛋白表达。其余雌鼠正常饲养7周后,与雄鼠合笼4周,观察受孕时间、受孕数、吸收胎数及健康仔鼠数。结果与空白组相比,模型组雌鼠动情周期紊乱,长期停滞于动情间期,受孕时间延长,吸收胎数量增加,卵巢组织HIF-1α、Bnip3、Beclin1蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01);与模型组相比,麒麟丸组动情周期有所恢复,受孕时间缩短,卵巢组织HIF-1α、Bnip3、Beclin1蛋白表达均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论麒麟丸可调节DOR模型小鼠动情周期,保护生育能力,其作用机制可能与调控卵巢组织HIF-1α/Bnip3/Beclin1信号通路有关。

邓高丕治疗子宫内膜异位症用药规律的数据挖掘研究

目的探索邓高丕教授治疗子宫内膜异位症的用药规律。方法收集邓高丕教授治疗子宫内膜异位症113首中药处方,录入古今医案云平台软件,经数据标准化处理后建立标准医案数据库,利用其中的数据挖掘功能对药物进行频次分析、属性分析、关联分析、聚类分析、复杂网络分析等。结果113首处方中使用中药112味,使用频次较高的中药为皂角刺、丹参、女贞子、赤芍、三棱、莪术、三七、薏苡仁、海螵蛸、鸡内金、枸杞子、覆盆子等;药物以甘温为主,多入肝、脾、肾经。聚类分析可将高频药物分为3组,其主要功效为活血散结,养阴柔肝,补益肝肾;复杂网络分析提示核心处方以滋补肝肾、化瘀散结为法。结论邓高丕教授治疗子宫内膜异位症以化瘀散结、滋补肝肾为主要治疗方法,同时重视健脾益气类药物的应用,从而达到标本兼治的目的。

化瘀消癥颗粒调控滋养细胞铁死亡敏感性治疗输卵管妊娠的机制研究

目的:研究化瘀消癥颗粒含药血清(HYXZ)对GPx4抑制剂RSL3损伤HTR-8/SVneo细胞中铁沉积及脂质过氧化的影响,探讨HYXZ治疗输卵管妊娠(TP)的潜在分子机制。方法:予RLS3和/或HYXZ干预HTR-8/SVneo细胞,采用CCK8分析细胞增殖活力;检测GPx和MDA含量;分别用DCFH-DA、C11-BODIPY581/591及FeRhoNox-1探针检测细胞内活性氧簇(ROS)、脂质ROS、不稳定铁池(LIP);Western blot检测铁死亡相关蛋白GPx4、SLC7A11、TfR1、ACSL4表达。结果:HYXZ增强RSL3诱导的HTR-8/SVneo细胞铁死亡敏感性与抑制GPx活性(P<0.01)、增加细胞内(P<0.01)及脂质ROS水平、提高LIP含量(P<0.01)有关。HYXZ进一步降低RSL3诱导的GPx4、SLC7A11蛋白表达(P<0.05),提高ACSL4蛋白表达(P<0.05)。RSL3抑制了HTR-8/SVneo的增殖、侵袭和迁移能力(P<0.01),HYXZ可加强RSL3对HTR-8/SVneo细胞功能的抑制作用。结论:在GPx4抑制诱导HTR-8/SVneo细胞铁死亡中,HYXZ协同干预促进了细胞死亡,从而治疗TP。

复方土茯苓颗粒对大鼠肝细胞XDH-mRNA表达和XO活性的影响

目的观察复方土茯苓颗粒含药血清对大鼠肝细胞高尿酸血症(HUA)模型尿酸(UA)、黄嘌呤氧化酶(XO)活性及肝脏中黄嘌呤氢化酶(XDH)mRNA转录水平的抑制作用。方法体外培养大鼠BRL 3A肝细胞,制备复方土茯苓颗粒中药血清,将细胞分成6组,即空白对照组、转染对照组、空白大鼠血清组、中药血清低、中、高剂量组(体积分数为5%、10%、20%),将pENTER-XDH重组质粒转染到空白组以外的BRL细胞,复制成肝细胞HUA模型,并将中药血清加入至相应组别。用qRT-PCR方法检测XDH-mRNA的转录水平,并进行UA分泌水平及XO活性检测。结果与空白对照组相比,转染对照组的XDH-mRNA转录水平明显升高,差异有统计学意义;与空白大鼠血清组相比,中药高剂量组XDH-mRNA的转录水平显著降低,并具有统计学意义;空白大鼠血清组的尿酸水平明显高于空白对照组和转染对照组,差异有统计学意义;各中药血清组与空白大鼠血清组相比,中药血清中剂量组与高剂量组的UA及XO活性要相对更低,差异有统计学意义。结论复方土茯苓颗粒可能通过降低XDH-mRNA和XO的活性来达到降尿酸的作用。