鹦鹉热衣原体Ⅲ型分泌蛋白SINC通过激活MAPK/ERK信号通路促进宿主细胞自噬

目的 探讨鹦鹉热衣原体(Cps)SINC蛋白对宿主细胞自噬的影响,及MAPK/ERK信号通路在其中的调控作用。方法 用重组的SINC蛋白刺激小鼠单核巨噬细胞(RAW 264.7),Western blot检测LC3-Ⅱ和Beclin-1的水平及ERK1/2的磷酸化程度,并用间接免疫荧光法检测SINC蛋白刺激后细胞LC3的水平,透射电镜检测自噬特殊结构。用50μmol MEK1/2抑制剂U0126预处理RAW 264.7细胞后1 h,再用不同浓度SINC蛋白刺激不同时间,用间接免疫荧光检测LC3的水平,并用Western blot检测LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达水平。结果 Western blot检测结果显示,以2μg/mL SINC蛋白刺激RAW 264.7细胞12 h时,LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达水平显著上调,并达到峰值;间接免疫荧光检测发现SINC刺激后可使细胞内LC3荧光斑点数明显增多,透射电镜下可见更多的自噬小体和自噬溶酶体。2μg/mL SINC蛋白刺激RAW 264.7细胞15 min时p-ERK1/2/ERK1/2比值明显上调;加入抑制剂U0126后,LC3-Ⅱ和Beclin-1表达下调,LC3-Ⅱ荧光斑点聚集减少。结论 SINC蛋白通过激活MAPK/ERK信号通路促进RAW 264.7细胞发生自噬。

琼中县农村中小学生家长营养知识及饮食行为调查

目的了解农村中小学生家长营养知识水平及饮食行为情况,为开展家长营养教育提供理论依据。方法采用整群随机抽样方法,抽取琼中县8所农村中小学校的家长进行问卷调查。结果 1 675名家长对《中国居民膳食指南》的知晓率为31.94%,不同文化程度、职业家长知晓率差异均有统计学意义(P值均<0.05);营养知识平均得分为(54.13±24.31)分,不同职业、文化程度、亲缘关系、民族家长营养知识得分差异均有统计学意义(P值均<0.05)。多元线性回归分析显示,文化程度是影响营养知识得分的重要因素。相关饮食行为中,60.18%的家长认为自己注重食物荤素搭配,牛奶和水果摄入偏少现象较普遍。结论农村中小学生家长营养知识水平和饮食行为有待改善,应加强对农村学生家长的营养教育。

鹦鹉热衣原体SINC蛋白激活宿主细胞MAPK/ERK信号通路抑制细胞凋亡

目的探讨鹦鹉热衣原体SINC蛋白对宿主细胞凋亡的影响,及丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase,MAPK/ERK)信号通路在其中的调控作用。方法用重组SINC蛋白刺激HeLa细胞,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的蛋白质表达水平及ERK1/2的磷酸化程度,Hoechst 33258染色检测SINC蛋白刺激对HeLa细胞凋亡的影响。用50μmol/L MEK1/2抑制剂U0126预处理HeLa细胞,流式细胞术检测不同浓度SINC蛋白刺激后细胞凋亡率的变化,Western blot检测Bax和Bcl-2的蛋白质表达水平。结果Western blot检测结果显示,用10μg/ml SINC蛋白刺激HeLa细胞18 h后,Bax表达下调,Bcl-2表达上调,Bax/Bcl-2比值最低;p-ERK1/2与ERK1/2的比值明显上调;Hoechst 33258染色检测发现5、10、15μg/ml SINC蛋白刺激后,HeLa细胞内凋亡小体数量明显减少。加入抑制剂U0126后,Bcl-2表达下调,cleaved PARP表达量显著增加;流式细胞术显示细胞凋亡率明显增高。结论SINC蛋白通过激活MAPK/ERK信号通路抑制HeLa细胞发生凋亡。

鹦鹉热衣原体巨噬细胞感染增强因子对宿主细胞产生前炎症细胞因子和凋亡的影响

目的研究鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)巨噬细胞感染增强因子(microphage infectivity potentiator,Mip)在诱导人单核细胞THP-1产生前炎症细胞因子和对HeLa细胞凋亡的作用。方法用不同浓度的Cps Mip重组蛋白作用THP-1细胞,ELISA检测前炎症细胞因子IL-8和TNF-α的表达量;用荧光染色法和流式细胞术分析重组Cps Mip对HeLa细胞凋亡的作用。结果重组Cps Mip能以时间、剂量依赖方式诱导THP-1细胞分泌前炎症细胞因子IL-8和TNF-α;不同Cps Mip蛋白浓度实验组刺激THP-1细胞产生的前炎症细胞因子IL-8和TNF-α水平显著高于PBS对照组(P<0. 05),当Cps Mip为16μg/ml时,所产生的前炎症细胞因子IL-8和TNF-α的量最高,分别为105. 01 pg/ml和50. 52 pg/ml。荧光染色法和流式细胞术检测细胞凋亡率,发现Cps Mip对星形孢菌素(staurosporine,STS)处理的HeLa细胞有一定的抑凋亡作用,在20μg/ml Cps Mip刺激后的细胞凋亡率比未刺激组下降了4. 48%(P<0. 01)。结论 Cps Mip蛋白能诱导THP-1细胞表达并分泌前炎症细胞因子IL-8和TNF-α; Cps Mip具有一定抑制HeLa细胞凋亡的作用。

LIGHT在小鼠鹦鹉热衣原体呼吸道感染中的作用

目的探讨LIGHT分子在鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)呼吸道感染过程中的作用。方法 C57BL/6J野生型(Wild type,WT)和LIGHT基因敲除(Knock out,KO)小鼠经鼻内接种4.5×10~5 IFU Cps,每天观察记录小鼠的进食、活动、体重变化及生存情况。感染后第4、9、14 d分批处死小鼠,分离肺组织,检测肺组织中Cps载量、病理损伤程度。结果与WT小鼠相比,LIGHT KO小鼠出现更严重的呼吸道感染症状,死亡率更高,肺组织匀浆中Cps载量更高且带菌时间延长,肺部病理损伤程度也显著高于WT小鼠。结论 LIGHT基因缺失可促进Cps呼吸道感染。

鹦鹉热衣原体Mip基因原核表达载体的构建及多克隆抗体的制备

目的克隆鹦鹉热衣原体巨噬细胞感染增强蛋白(Microphage infectivity potentiator,Mip)基因,构建原核重组质粒,诱导表达重组蛋白,并免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定了基础。方法提取鹦鹉热衣原体6BC基因组DNA,PCR扩增Mip基因,克隆至p ET-30a(+),构建原核表达载体p ET-30a(+)-Cps Mip。PCR、酶切及测序鉴定后,IPTG诱导p ET-30a(+)-Cps Mip在E.coli BL21中表达目的蛋白。融合蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,ELISA检测小鼠血清中抗Mip抗体的效价。结果 PCR扩增得到大小约为768 bp左右的Mip目的片段;经PCR、酶切及测序鉴定,证明构建的原核重组质粒中插入的片段为Cps Mip基因,测序结果经BLAST分析,与Genbank上登录序列完全一致。经IPTG诱导,重组工程菌表达一相对分子量(Mr)约为34 k D的目的蛋白;ELISA检测免疫小鼠血清效价为1:128 000。结论成功构建了鹦鹉热衣原体Mip基因原核表达载体,并表达了相应可溶性蛋白,制备了高效价的鼠抗Mip多克隆抗体。

湖南省某三甲医院2015-2019年消化系统恶性肿瘤住院患者流行病学分析

目的 通过对湖南省某三甲医院收治的消化系统恶性肿瘤患者病案首页信息进行分析,为开展消化系统恶性肿瘤的防治工作提供科学依据。方法 以国际疾病分类ICD-10编码为标准,调取某院2015年1月1日-2019年12月31日首次诊断为消化系统恶性肿瘤(C15-C26)的住院病案首页信息进行回顾性分析。结果 消化系统恶性肿瘤患者男性多于女性,男女比例为2.37∶1,尤其是食管癌(4.69∶1)和肝癌(4.65∶1);发病年龄高峰主要集中在60岁~69岁,占比为36.82%;平均住院天数为15.99天。消化系统恶性肿瘤患者在性别、年龄、住院费用、日均住院费用的差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 消化系统恶性肿瘤发病具有性别、年龄、部位差异,应着重关注男性、农民和老年群体,降低消化系统肿瘤的发病率,减轻疾病负担。

衣原体调控宿主细胞自噬和凋亡的研究进展

衣原体是一种专性胞内寄生的原核生物,调控宿主细胞凋亡和自噬在衣原体感染过程中发挥重要的作用。衣原体可通过h GBP1/2和Irga6等多种分子调节宿主细胞自噬,通过激活Raf/MEK/ERK、PI3K/Akt等途径调控宿主细胞凋亡。本文对主要参与衣原体自噬和凋亡调节的多种途径及分子进行综述。

IL-12缺失雌鼠经泌尿生殖道衣原体上行感染致肾脏病变观察

目的了解在Il-12缺失小鼠中衣原体经外生殖道进入肾脏导致肾脏病变情况。方法试验用野生型(wildtype,wt)、IL-12p35KO及IL-12p40KO小鼠,每组10只,经阴道分别接种1×104 IFUs鼠衣原体(MoPn),于感染后第45、87和100d处死小鼠。分离其肾脏、尿道、膀胱、肺、肝、脾、心脏组织,分别加入预冷的SPG,经组织匀浆器匀浆、超声破碎后做倍比稀释。取稀释液感染Hela细胞,培养24h后进行间接免疫荧光试验,计数各组织中衣原体包涵体数量。其余5只小鼠的组织进行HE染色,检测其病理变化。结果感染后第45、87和100d,3种小鼠肝、肺、心脏和脾脏组织中均未检出活的衣原体;而在肾脏、尿道、膀胱组织中除wt小鼠未检出活的衣原体外,IL-12p35KO和IL-12p40KO小鼠均检出衣原体。其中,感染后45d,IL-12p35KO和IL-12p40KO小鼠的肾脏、尿道、膀胱组织中检出的衣原体数量分别为4.12×104、4.30×104、2.88×104和4.54×105、3.48×105、1.21×105;且在87和100d,IL-12p40KO小鼠3种组织的衣原体检出数量为6.92×103、3.0×103、105和2.16×104、30、23,显著高于IL-12p35KO小鼠的35、20、13和32、12、2。对各组小鼠肾脏、尿道、膀胱组织进行病理检测,盲法判断组织病变程度,wt小鼠肾脏几乎无明显病变,IL-12p35KO和IL-12p40KO小鼠肾脏均发生严重积水和脓肿,且各组小鼠膀胱、尿道组织病变程度与肾脏病变程度成正相关。结论雌性小鼠在IL-12缺失情况下,衣原体经生殖道感染后可经泌尿生殖道组织上行感染导致肾脏病变。

DNA功能化金纳米颗粒在沙眼衣原体检测中的应用

目的建立一种基于DNA功能化金纳米颗粒检测沙眼衣原体的新方法。方法分析沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)Trp B保守基因序列,设计2条特异性寡核苷酸链,一条进行巯基修饰后与柠檬酸钠还原法制备的金纳米颗粒结合得到信号探针,另一条用生物素标记作为捕获探针。制备的靶序列与两种探针在包被链霉亲和素的酶标板内形成牢固的带有金纳米颗粒的核酸复合物,加入银染液后,经酶标仪读取630 nm处A值或肉眼观察96孔板底灰度。对建立的检测体系进行特异性和灵敏度验证。用建立的检测体系及荧光定量PCR法对可疑临床沙眼衣原体样本进行检测。结果制备的金纳米颗粒经透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)观察确定其粒径约20 nm,吸收峰为518 nm,金纳米颗粒标记的信号探针吸收峰为520 nm;不同靶序列浓度的银染结果可用肉眼进行分辨。优化后的检测体系为:反应时间2 h,杂交温度25℃,生物素探针浓度100 nmol/L,银染色时间8 min。建立的方法能特异性检测沙眼衣原体核酸序列,与其他生殖道病原菌无交叉反应,最低检测浓度达55 pmol/L。49份临床样本检出率为61%,与荧光定量PCR法相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论建立了一种简便、高效、特异的沙眼衣原体检测方法,成本低廉,为沙眼衣原体的临床病原学诊断提供了新的途径。