闭孔神经切断术对激素性股骨头缺血性坏死骨内高压的干预作用

目的探讨闭孔神经切断术对激素性股骨头坏死(SANFH)的骨内压、局部组织血液流变功能改变的影响。方法选用健康成年家兔40只,随机分为对照组(9只)、模型组(15只)和治疗组(16只)。对照组每周皮下注射生理盐水,模型组和治疗组均采用每周皮下注射醋酸泼尼松龙的方法成功制备兔早期激素性股骨头坏死的动物模型。4周后,治疗组行闭孔神经切断术,分别选取实验前、激素注射后4周(术前)、8周3个时间点,每组行骨内压测定并随机处死3只进行股骨头大体观察、HE染色、透射电镜下观察。结果模型组和治疗组家兔实验后4、8周比对照组骨内压及股骨头空骨陷窝率增高(P<0.05);到8周时治疗组骨内压及股骨头空骨陷窝率下降,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论闭孔神经切断术可以降低激素性股骨头坏死骨内压,可有效地延缓或降低股骨头坏死的发生。

闭孔神经切断术对激素性股骨头缺血性坏死局部组织血液流变学的干预作用

目的探讨闭孔神经切断术对激素性股骨头坏死(SANFH)的局部组织血液流变学功能改变的影响,以寻求早期股骨头缺血性坏死新的防治方法。方法选用健康成年中国白兔40只,随机分为对照组(9只)、激素组(15只)和治疗组(16只)三组。利用每周皮下注射醋酸泼尼松龙的方法成功制备兔早期激素性股骨头坏死的动物模型,4周后治疗组行闭孔神经切断术,分别选取实验前、激素注射后4周(术前)、激素注射后8周三个时间点行股骨头局部组织血液流变学检测,并处死进行股骨头大体观察、HE染色、透射电镜观察。结果大体观察、HE染色和透射电镜观察发现早期股骨头坏死动物模型建立成功,且8周后治疗组与激素组相比股骨头坏死表现明显减轻,两组间及治疗组治疗前后血液流变学改变有统计学意义(P<0.05或0.01)。结论闭孔神经切断术可以降低激素性股骨头坏死股骨头局部组织血黏度,有效延缓或降低股骨头坏死的发生。

p38 MAPK/p53信号通路调控骨肉瘤细胞中Ether a go-go表达的研究

目的检测Ether a go-go(Eag)在人骨肉瘤细胞中的表达并探索其调控的分子机制。方法采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(reverse trariseription polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫印迹技术(Western blot,WB)检测骨肉瘤细胞MG-63中Eag的表达。体外实验检测Eag抑制剂对MG-63细胞增殖的影响,体内实验检测Eag短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)对裸鼠骨肉瘤生长的影响。最后用WB检测骨肉瘤细胞中促有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen—activated protein kinase,MAPK)和p53蛋白的表达水平。结果 Eag在MG-63细胞中高表达,Eag shRNA或抑制剂丙咪嗪(Imipramine)能从体内外有效地抑制人骨肉瘤细胞增殖。p38 MAPK抑制剂SB203580或小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)可抑制MG-63细胞的增殖,同时诱导p53的表达。p53激活剂nutlin-3可抑制MG-63细胞增殖并下调Eag的表达,而p53抑制剂pifithrin—alpha(PVT-α)则能促进MG-63细胞增殖并诱导Eag的表达。结论 Eag作为癌基因参与了骨肉瘤细胞增殖过程,其可能受p38 MAPK/p53信号通路的调控。

经内踝截骨入路微型钢板固定治疗Hawkins Ⅲ型距骨颈骨折

目的探讨经内踝截骨入路微型钢板固定治疗Hawkins Ⅲ型距骨颈骨折的手术方法及疗效。方法 2008年1月至2014年3月,我们对14例Hawkins Ⅲ型距骨颈骨折的患者行经内踝截骨的前内侧入路切开复位微型钢板内固定术治疗,根据患者主诉、后跟及踝关节外形、功能及X线片征象来评价临床疗效。结果本组14例病例均获得随访18~41个月,平均随访29.6个月。末次随访时患者的平均AOFAS踝与后足评分为（79.8±17.3）分,按其疗效标准进行评价,优6例（42.9%）,良3例（21.4%）,可4例（28.6%）,差1例（7.1%）,优良率64.3%。3例患者出现不同程度的距骨缺血坏死,6例患者发生创伤性关节炎,累及胫距关节3例,累及距下关节2例,同时累及胫距及距下关节1例。结论经内踝截骨手术入路微型钢板固定治疗Hawkins Ⅲ型距骨颈骨折具有软组织创伤小、对距骨颈显露充分、并发症发生率低、疗效优良等特点。

接骨板系统治疗同侧股骨干合并股骨近端骨折

背景:股骨干合并同侧股骨近端骨折是一种较为少见的损伤,漏诊率高,尚无统一标准的内固定方式。目的:探讨接骨板系统治疗同侧股骨干合并股骨近端骨折的疗效。方法:回顾性分析2012年1月至2015年12月收治的16例同侧股骨干合并股骨近端骨折患者,男11例,女5例;年龄17~60岁,平均(36.2±10.7)岁;交通伤12例,高处坠落伤4例;闭合性骨折14例,开放性骨折2例(GustiloⅡ型1例,Ⅲ型1例)。入院后即刻确诊股骨近端骨折13例,延迟诊断3例,延迟时间为5~6 d。全部病例均采用接骨板系统(桥接组合式内固定系统联合重建锁定接骨板或空心钉)固定治疗。结果:手术时间为135~231 min,平均(179.7±26.3)min;术中出血量为430~575 ml,平均(497.8±40.1)ml。除1例失随访外,其余病例均获得随访,随访时间为9~30个月,平均(16.2±6.1)个月。14例股骨近端骨折于术后3~6个月获得骨折愈合,平均(4.2±0.9)个月;1例股骨颈骨折术后9个月仍未愈合,行股骨转子间外翻截骨后5个月愈合。14例股骨干骨折于术后3~7个月获得骨折愈合,平均(5.1±1.1)个月;1例股骨干骨折术后9个月骨折仍未愈合,经再次手术内固定并植骨后4个月愈合。末次随访的Friedman-Wyman功能评分:优9例,良5例,差1例。术后并发症包括伤口感染1例,股骨颈内翻畸形1例,股骨颈骨不连1例,股骨干骨不连1例,股骨头缺血性坏死1例。结论:同侧股骨干合并股骨近端骨折相对较少,漏诊率和延迟诊断率较高,且治疗复杂。应用接骨板系统治疗同侧股骨干合并股骨近端骨折的临床效果良好。

shRNA靶向沉默Eag 1钾通道对骨肉瘤细胞增殖、细胞周期及cyclin D1/E表达的影响

目的探讨短发夹RNA(shRNA)靶向沉默Ethergo-go 1(Eag1)钾通道对骨肉瘤MG-63细胞增殖、细胞周期及cyclin D1/E表达的影响。方法使用成功构建的Ad5-Eag1-shRNA表达载体转染MG-63细胞(抑制组),同时设转染无义序列(Ad5-Control-shRNA)的空转染组及不进行任何处理的对照组。采用逆转录聚合酶链式反应和Western blotting检测Ad5-Eag1-shRNA转染骨肉瘤MG-63细胞后的Eag1 mRNA和蛋白水平,分别采用CCK-8法和克隆形成实验检测各组的细胞增殖情况,流式细胞仪和Western blotting分别检测各组的细胞周期变化和细胞周期蛋白(cyclin D1和cyclin E)的蛋白水平。建立裸鼠骨肉瘤异种移植模型并测量各组裸鼠肿瘤体积的变化情况。结果抑制组的Eag1 mRNA和蛋白水平均低于空转染组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05);与其余两组相比,抑制组的细胞增殖、克隆形成数、S期细胞比例及细胞周期蛋白水平均降低,而G_0/G_1期细胞比例升高,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。抑制组裸鼠的瘤体积小于空转染组和对照组(P<0.05)。结论通过shRNA抑制Eag1基因表达可抑制MG-63细胞的增殖并诱导G_0/G_1期阻滞,可能与调控cyclin D1/E通路有关,有望成为骨肉瘤治疗和诊断的新靶点。

补阳还五汤冲洗联合负压封闭引流技术治疗四肢软组织缺损创面的临床研究

目的:探讨补阳还五汤冲洗联合负压封闭引流技术(VSD)治疗四肢软组织缺损创面的临床疗效。方法:将57例慢性四肢软组织缺损创面患者行VSD治疗后随机分为补阳还五汤冲洗组(A组,n=29)和生理盐水冲洗组(B组,n=28),术后观察并比较两组患者的炎症指标变化、细菌培养结果、1周后肉芽组织覆盖率和首次植皮成活率情况。结果:两组患者术后及术后3d的CRP比较,差异无统计学意义(P>0.05),而术后7d及14d,A组患者CRP低于B组(P<0.05)。两组患者术后即刻、术后3d、7d的ESR及白细胞计数比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组患者术后14d的ESR及白细胞计数明显低于B组(P<0.05)。术后1周A、B组平均肉芽组织覆盖率分别为(81.86±5.74)%和(73.11±4.19)%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。拆除VSD后细菌培养结果显示:A组阴性为20例(70.0%),明显高于B组的11例(39.3%),差异有统计学意义(P<0.05)。A组有24例(82.8%)首次植皮或皮瓣转移成功闭合创面,B组有16例(57.1%)首次植皮成活,两组首次植皮成活率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:补阳还五汤冲洗联合VSD治疗四肢软组织缺损创面能降低炎症反应、促进肉芽组织生长、缩短植皮时间,提高植皮成活率。

Kv1.3钾通道在骨肉瘤中的表达及作用研究

目的探讨特异性短发卡RNA(shRNA)抑制Kv1.3钾通道对骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应、Western blotting和免疫组化检测骨肉瘤MG-63细胞中Kv1.3钾通道的表达,并分别采用CCK-8法、裸鼠骨肉瘤异种移植模型和流式细胞仪检测MG-63细胞增殖、生长和凋亡的变化,采用Western blotting检测MG-63细胞中多聚ADP核糖聚合酶(PARP)和caspase-3的表达水平。结果 Kv1.3钾通道在骨肉瘤细胞中异常高表达。沉默Kv1.3钾通道的Ad5-Kv1.3-shRNA能从体内外有效地抑制MG-63细胞增殖并促进其早期凋亡。沉默Kv1.3钾通道可明显诱导细胞凋亡相关蛋白caspase-3和PARP的裂解。结论 Kv1.3钾通道参与骨肉瘤细胞增殖和凋亡的过程,有望成为骨肉瘤治疗及诊断的新靶点基因。

46例老年脊柱结核临床特点及外科治疗体会

目的探讨老年脊柱结核的临床特点及外科治疗策略。方法回顾分析2008年1月~2013年7月46例老年脊柱结核的病症特点以及外科治疗和术后相关的并发症。结果 43例患者获得系统随访,随访时间18~36个月,平均24个月,1例术后早期术口发生混合感染,2例分别在术后3个月、7个月出现窦道形成,1例在术后6个月出现内固定钢板螺钉松脱。其余患者经规范化疗后,结核症状无复发,植骨处均融合,内固定无松动及断裂。19例合并不同程度脊髓神经功能损伤的患者术后均得到不同程度恢复。按脊柱结核的治愈标准,治愈率为93.5%(43/46)。结论老年脊柱结核多合并其他系统疾病,区域病灶多为广泛溶骨样破坏。依据其不同的临床特点,合理的围术期准备及恰当的手术方式是治疗成败的关键。

OCT在骨关节炎的应用进展

现阶段诊断骨关节炎的影像学方法虽然很多,但各有其不足。采取有效的方法检测早期关节软骨损伤和退变对保护和修复软骨非常重要。光学相干断层成像是一项新的光扫描断层显像技术,能动态观察并反映关节软骨组织学横断面影像的高分辨率新型无损成像技术。文章介绍光学相干断层成像应用于骨关节炎的进展。

胸腰椎骨折合并椎间盘损伤的研究进展

胸腰椎骨折是临床常见损伤,约占所有脊柱骨折的40%~60%,通常伴发不同程度的椎间盘损伤。手术是胸腰椎骨折治疗的主要方法之一,但常存在术后矫正失败,矫正不足或甚至无法矫正等并发症,主要是因为对骨折复杂性的评估不足,往往忽略椎间盘损伤。椎体骨折中的骨性部分在进行手术治疗后通常完全愈合并恢复正常强度,但相对无血管的椎间盘来说,其愈合是不可预测的。目前常用的胸腰椎骨折的临床分型及评分系统,无论是从形态学上的Denis分型、载荷分享评分(load sharing classification,LSC)和胸腰椎损伤分类严重程度评分(thoracolumbar injury classification and severity score,TLICS),还是从损伤机制上的AO分型或AO Spine分型来看,均未提供关于椎间盘损伤严重程度的详细描述。创伤后椎间盘损伤在临床上并未受到充分的重视,椎间盘高度的丢失、椎间隙的变窄是造成胸腰椎骨折术后后凸畸形发生的重要原因,主要表现为Cobb角和椎体楔角变小等。目前,对于受损椎间盘的转归及其影响因素的研究尚不全面,笔者对胸腰椎骨折伴椎间盘损伤研究现状做一综述。

胫骨平台骨折术后感染性骨缺损的分型和治疗策略

目的探讨胫骨平台骨折术后不同程度感染性骨缺损治疗策略的选择。方法回顾性分析2014年7月至2018年2月我院收治的45例胫骨平台骨折术后感染性骨缺损病人的临床资料,其中男32例,女13例,年龄为(39.42±12.09)岁(20~66岁)。腔洞性骨缺损16例,节段性骨缺损16例,波及关节面的缺损13例。Ⅰ型为胫骨平台内腔洞性骨缺损;Ⅱa型为胫骨平台下节段性(<4 cm)并平台内腔洞性骨缺损;Ⅱb型胫骨平台下节段性(≥4 cm)并平台内腔洞性骨缺损;Ⅲa型胫骨平台波及关节面的缺损,但节段性缺损<4 cm;Ⅲb型为胫骨平台波及关节面的缺损,但节段性缺损≥4 cm。所有病人一期彻底扩创取出内固定,二期按照胫骨平台骨缺损情况进行分型治疗。记录病人一期手术前、二期手术后3个月的炎性指标(白细胞计数、C-反应蛋白、红细胞沉降率和降钙素原)、膝关节活动度、美国特种外科医院(Hospital for Special Surgery,HSS)膝关节评分,及术后并发症、骨折愈合情况。结果病人随访时间为(25.25±3.32)个月(17~56个月),骨折愈合时间为(11.21±4.43)个月(8~17个月),伤口愈合较满意,其中8例行腓肠肌肌瓣转移术覆盖伤口,10例行同侧大腿取皮局部植皮术,1例节段性骨缺损术后10个月骨折未见明显愈合,再次手术植骨后6个月得到愈合。随访2年未见伤口破溃及感染复发。在观察期间未见固定失败、再骨折、神经损伤、下肢深静脉血栓、肺栓塞等并发症的发生。二期术后3个月各炎性指标、膝关节活动度、HSS评分与一期术前比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。末次随访时,病人患膝HSS评分为(89.23±5.35)分(82~94分)。结论根据胫骨平台术后感染性骨缺损进行分型治疗,临床疗效良好,为胫骨平台术后感染性骨缺损诊疗提供了策略。

热疗联合特异性沉默趋化因子受体4对骨肉瘤增殖和侵袭的影响

目的观察热疗联合特异性siRNA沉默趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)对骨肉瘤增殖和侵袭的影响。方法培养人骨肉瘤细胞株MG 63至对数生长期,接种于6孔板中,分为三组,空白组细胞不进行任何处理常规培养,control siRNA组以control siRNA转染细胞,CXCR4 siRNA组以CXCR4 siRNA转染细胞,采用Western blot检测各组CXCR4的表达变化,评估CXCR4 siRNA转染效能。细胞及体内实验设置control siRNA组(对照组)、热疗联合CXCR4 siRNA组(联合组)、CXCR4 siRNA组(沉默组)和热疗组,以CXCR4 siRNA转染沉默组和联合组的细胞,control siRNA转染对照组细胞,热疗组和联合组进行热疗处理。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT qPCR)和Western blot检测各组细胞CXCR4的表达变化。CCK 8法和Transwell侵袭实验检测转染后MG 63细胞的增殖能力和侵袭能力变化。流式细胞技术检测转染后MG 63细胞的周期变化。体外裸鼠成瘤实验和肿瘤生长曲线观察转染后MG 63细胞增殖和裸鼠骨肉瘤生长情况。结果CXCR4 siRNA可以有效沉默MG 63细胞中CXCR4蛋白的表达。热疗联合CXCR4 siRNA有效沉默MG 63细胞中CXCR4的表达并能抑制MG 63细胞增殖和侵袭,阻滞细胞周期于G0/G1期(P均<0.05)。体内实验结果显示,从第14天起,联合组裸鼠骨肉瘤体积逐渐小于对照组、沉默组和热疗组,差异有统计学意义(P均<0.05)。联合组的瘤重也低于对照组、沉默组和热疗组,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论热疗联合特异性沉默CXCR4抑制骨肉瘤的增殖和侵袭,可作为一个有效的骨肉瘤基因治疗新方法。

过表达TRAIL联合特异性沉默Eag 1的协同抗骨肉瘤作用

目的检测过表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)联合特异性沉默Etheràgo-go 1(Eag 1)基因对骨肉瘤的影响。方法分别构建名为Ad5.e GFP、CRAd5.si Eag、CRAd5.TRAIL和CRAd5.TRAIL/si Eag1的腺病毒载体并检测其抗骨肉瘤的作用。结果Ad5.e GFP对MG-63细胞中的Eag 1和TRAIL表达无明显影响,CRAd5.si Eag仅可抑制Eag 1的表达,CRAd5.TRAIL仅可过表达TRAIL,而CRAd5.TRAIL/si Eag1既能沉默Eag 1又能过表达TRAIL。细胞增殖实验结果显示:CRAd5.TRAIL/si Eag1比Ad5.e GFP、CRAd5.TRAIL或CRAd5.si Eag1能更有效地抑制骨肉瘤细胞增殖。同时,对人成骨细胞h FOB 1.19无明显细胞毒性。CRAd5.TRAIL/si Eag1组Caspase-3/7活性为(39693.33±1922.96)RLU,Ad5.e GFP、CRAd5.si Eag1和CRAd5.TRAIL组Caspase-3/7活性分别为:(2832.83±375.99)、(3242.50±329.97)和(15583.17±698.54)RLU。统计学分析显示CRAd5.TRAIL/si Eag1组Caspase-3/7活性明显高于其它三组(P<0.001)。此外,CRAd5.TRAIL/si Eag1还可有效地诱导MG-63细胞中PARP裂解物表达。局部注射第8天,CRAd5.TRAIL/si Eag1组裸鼠肿瘤的体积为(231.19±25.96)mm3,Ad5.e GFP、CRAd5.si Eag1和CRAd5.TRAIL组裸鼠肿瘤体积分别为:(504.68±102.32)、(365.85±47.60)和(355.48±35.34)mm3,CRAd5.TRAIL组裸鼠肿瘤体积与其它三组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。第10、12和14天,CRAd5.TRAIL/si Eag1组裸鼠肿瘤的体积分别为:(367.82±39.52)、(470.18±60.11)和(631.52±61.22)mm3,Ad5.e GFP、CRAd5.si Eag1和CRAd5.TRAIL组裸鼠肿瘤体积分别为:(826.57±130.60)、(1284.69±243.50)和(1762.06±180.36)mm3,(552.12±64.39)、(721.82±108.20)和(949.20±124.70)mm3,(524.03±43.47)、(653.54±56.22)、(896.44±93.64)mm3。与其它三组相比,CRAd5.TRAIL/si Eag1可更有效地抑制裸鼠骨肉瘤生长。TUNEL实验结果显示:CRAd5.TRAIL/si Eag1的凋亡指数为(27.33±2.07)%,而Ad5.e GFP、CRAd5.si Eag1和CRAd5.TRAIL组的凋亡指数分别为(2.68±0.64)%,(8.49±1.06)%和(15.99±1.94)%,CRAd5.TRAIL/si Eag1组与其它三组相比可有效地促进骨肉瘤凋亡(P<0.001)。结论过表达TRAIL联合特异性沉默Eag 1基因可产生协同抗骨肉瘤作用,因此CRAd5.TRAIL/si Eag1腺病毒载体可作为一个有效的骨肉瘤基因治疗工具。

后路伤椎短节段固定治疗严重不稳的胸腰椎爆裂性骨折

目的探讨经后路伤椎短节段椎弓根内固定治疗严重不稳的胸腰椎爆裂性骨折的临床疗效。方法 2008年5月—2013年7月,采用后路伤椎短节段椎弓根内固定治疗52例严重不稳的胸腰椎爆裂性骨折。其中男33例,女19例;年龄21~56岁,平均37.9岁。致伤原因:高处坠落伤32例,交通事故伤16例,其他伤4例。载荷分享评分(load sharing classification,LSC)为7~9分,平均7.85分。累及节段:T_(11) 4例,T_(12) 19例,L_1 25例,L_2 4例。Frankel分级:A级2例,B级4例,C级8例,D级11例,E级27例。伤椎椎管占位24.2%~76.7%,平均47.1%。伤后至手术时间3~5 d,平均3.6 d。根据患者手术前后的伤椎Cobb角、伤椎前缘高度及Frankel分级变化评价临床疗效。结果手术时间为85~127 min,平均106.5 min;术中出血量为90~155 mL,平均137.6 mL。术后手术切口均Ⅰ期愈合。47例患者获随访,随访时间19~27个月,平均23.2个月。随访期间均未出现切口感染、椎弓根钉松动和内固定物断裂等并发症。患者术后即刻及末次随访时的伤椎Cobb角及伤椎前缘高度均较术前显著改善(P<0.001);末次随访时较术后即刻有一定程度丢失,但比较差异无统计学意义(P>0.05)。末次随访时Frankel分级均较术前提高1~2个等级,差异有统计学意义(Z=15.980,P=0.003)。结论经后路伤椎短节段椎弓根内固定治疗严重不稳的胸腰椎爆裂性骨折(LSC≥7分),能有效矫正后凸畸形、恢复椎体高度,并可避免前路的重建。

自行研制的胫骨可调负重支具在AO分型42-B型胫骨干骨折髓内钉固定术后的应用

目的探讨自行研制的胫骨可调负重支具辅助治疗AO分型42-B型闭合性胫骨干骨折髓内钉固定术后患者的临床疗效。方法选取2013年4月至2015年3月连续收治的68例闭合B型胫骨干骨折髓内固定术后患者，采用随机数字表法平均分成A、B两组（n=34），其中A组患者按胫骨干骨折术后常规处理，B组患者在此基础上，术后1周加用胫骨可调负重支具治疗。记录并比较两组患者术后3、6个月疼痛视觉模拟评分（VAS）、术后1、3、6个月患肢负重情况、骨折临床愈合时间、胫骨骨折影像学愈合（RUST）评分和及末次随访时Johner—Wruhs评分。结果62例患者术后获12—18个月（平均14．7个月）随访，5例患者失访，1例患者退出试验。术后第3、6个月B组患者VAS评分平均分别为（2．5±0．8）、（0．9±0．6）分，均显著低于A组患者[（3．0±0．9）、（1．4±0．8）分]差异有统计学意义（P〈0．05）；术后1、3、6个月A组患者的患肢负重情况平均分别为44．1％±17．5％、72．0％±17．4％、86．4％±12．5％，RUST评分平均分别为（5．4±1．4）、（8．7±1．1）、（10．3±1．1）分；B组患者患肢负重情况平均分别为53．8％±11．0％、84．1％±12．2％和94．4％±10．6％，RUST评分平均分别为（6．5±0．8）、（9．9±0．9）、（11．3±0．8）分，以上项目两组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。B组患者的骨折临床愈合时间平均为（3．3±0．7）个月，明显短于A组患者[（3．9±1．0）个月]，差异有统计学意义（P〈0．05）。末次随访时Johner—Wruh评分示：A组优19例，良12例；B组优27例，良4例，两组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论B型闭合胫骨干骨折髓内固定术后早期应用自行研制的胫骨可调负重支具较常规术后处理可更明显地减少患肢术后疼痛、加速骨痂生长、缩短骨折临床愈合时间，术后患者功能恢复满意。

沉默Herg1的表达对骨肉瘤增殖和侵袭的影响

目的观察沉默Herg1的表达对骨肉瘤增殖和侵袭的影响,并探讨其可能的调控机制。方法构建重组腺病毒载体Ad5-Herg1-shRNA并检测其转染效能。分别采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、划痕实验、Transwell实验、肿瘤生长曲线和活体成像检测Ad5-Herg1-shRNA转染后人骨肉瘤细胞株143B、U2OS的增殖、迁移和侵袭能力变化,采用串联亲和纯化/质谱法寻找可能与Herg1相互作用的蛋白并进行鉴定,采用Western blot法检测转染前后骨肉瘤细胞中大肿瘤抑制因子1(LATS1)、Yes激酶相关蛋白(YAP)及其磷酸化后的表达变化。结果 Ad5-Herg1-shRNA转染能有效抑制骨肉瘤细胞中Herg1的表达。CCK-8法检测结果显示,Ad5-Herg1-shRNA1组和Ad5-Herg1-shRNA2组143B细胞的存活率分别为(65.47±3.90)%和(79.90±1.52)%,U2OS细胞的存活率分别为(69.69±1.36)%和(76.72±2.75)%,均明显低于Ad5-control-shRNA组(均P<0.001)。划痕实验显示,Ad5-Herg1-shRNA1组和Ad5-Herg1-shRNA2组143B细胞的迁移率分别为(33.03±2.88)%和(36.47±4.16)%,U2OS细胞的迁移率分别为(68.07±0.90)%和(73.97±1.25)%,均明显低于Ad5-control-shRNA组(均P<0.001)。Transwell侵袭实验显示,Ad5-Herg1-shRNA1组和Ad5-Herg1-shRNA2组143B细胞的侵袭细胞数分别为(36.50±12.15)个和(44.83±7.62)个,U2OS细胞的侵袭细胞数分别为(21.83±7.99)个和(22.85±7.08)个,均明显低于Ad5-control-shRNA组(均P<0.001)。体内实验结果显示,从第14天起,Ad5-Herg1-shRNA1组裸鼠骨肉瘤体积小于Ad5-control-shRNA组(P<0.001)。接种5周后,Ad5-Herg1-shRNA1组瘤重为(0.36±0.10)g,低于Ad5-control-shRNA组(P<0.001)。裸鼠活体成像显示,Ad5-control-shRNA组明显可见其他部位肿瘤转移且荧光信号值高,而Ad5-Herg1-shRNA1未见其他部位的肿瘤转移。Herg1蛋白与2型神经纤维瘤(NF2)蛋白相互作用,沉默Herg1可明显下调骨肉瘤中LATS1和YAP蛋白的表达,并促进LATS1和YAP的磷酸化。结论 Herg1可能通过调控Hippo信号通路参与骨肉瘤的增殖和侵袭过程,其有望成为骨肉瘤治疗的潜在靶点。

骨肉瘤Kv1.5钾离子通道表达意义的研究

目的研究表明,Kv1.5钾离子通道参与了多种肿瘤的生物学行为,但其在骨肉瘤中的表达和作用尚未明确。本研究拟检测Kv1.5钾离子通道在骨肉瘤中的表达,并探讨小干扰RNA(small interfering,siRNA)沉默Kv1.5表达后对骨肉瘤细胞增殖、周期和凋亡的影响及可能的调控机制。方法实验分组,Kv1.5-siRNA转染细胞为实验组,controlsiRNA转染细胞为对照组,未处理细胞为空白组。采用siRNA抑制Kv1.5的表达,并分别采用CCK-8法、克隆形成率、流式细胞仪和Tunel法检测MG-63细胞增殖、生长、周期和凋亡的变化。采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测骨肉瘤细胞中周期和凋亡相关基因的表达水平。结果 Kv1.5在骨肉瘤细胞和组织中均异常高表达。CCK-8法检测结果示,Kv1.5-siRNA组细胞增殖水平为(53.87±5.91)%,与control-siRNA组的(99.14±7.87)%相比差异有统计学意义,Z=-3.49,P<0.001;与空白组(100.00±8.37)%相比差异有统计学意义,Z=-3.57,P<0.001。克隆形成实验结果示,Kv1.5-siRNA组克隆形成数为164.00±7.66,与control-siRNA组(223.20±11.41)相比,Z=-2.61,P=0.008;与空白组(228.20±12.62)相比,Z=-2.40,P=0.016。流式细胞周期结果示,Kv1.5-siRNA组G0/G1期所占比例为(68.81±0.55)%,与control-siRNA组(41.22±0.61)%相比,Z=-2.15,P=0.031;与空白组(40.79±0.52)%相比,Z=-2.31,P=0.029。流式细胞凋亡结果示,Kv1.5-siRNA组(30.23±1.74)%与control-siRNA组(14.10±1.27)%相比,Z=-2.04,P=0.039;与空白组(12.85±1.02)%相比,Z=-2.09,P=0.035。Tunel法结果示,Kv1.5-siRNA组凋亡指数为(35.20±3.14)%,与control-siRNA组(8.03±1.50)%相比,Z=-2.41,P=0.015;与空白组(8.22±1.32)%相比,Z=-2.25,P=0.019。沉默Kv1.5表达可明显下调骨肉瘤中Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E、Bcl-2和Bik基因的表达,同时上调p21、p27、Bax、Bcl-XL和Caspase-3基因的表达,与对照组相比,P值均<0.05。结论 Kv1.5钾离子通道参与了骨肉瘤细胞增殖、周期和凋亡的过程,其作用机制可能与调控周期依赖激酶和Bcl-2家族的相关因子有关。

沉默Ether à go-go 1基因调控VEGF/PI3K/AKT抑制骨肉瘤增殖和血管生成的研究

目的:检测沉默Ether à go-go 1(Eag1)基因对骨肉瘤增殖和血管生成的影响及其可能的调控机制。方法:构建抑制Eag1表达的短发卡RNA(short hair RNA,shRNA)重组腺病毒载体Ad5-Eag1-shRNA并感染骨肉瘤细胞株。采用实时定量聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)和蛋白印迹技术(Western blot analysis,WB)检测Ad5-Eag1-shRNA的感染效能。采用CCK-8法和裸鼠成瘤实验检测感染前后骨肉瘤细胞增殖和裸鼠骨肉瘤体积的变化。采用免疫组化技术和WB技术分别检测感染前后裸鼠肿瘤组织中微血管密度(microvessel density,MVD)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的变化。采用WB技术检测感染前后骨肉瘤细胞中VEGF、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)和蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)的表达变化。结果:构建的重组腺病毒载体Ad5-Eag1-shRNA具有良好的感染效能。感染Ad5-Eag1-shRNA可沉默骨肉瘤中Eag1的表达并能有效地抑制骨肉瘤细胞增殖和裸鼠骨肉瘤生长(均P<0.001),同时下调裸鼠骨肉瘤组织中MVD密度和VEGF的表达(均P<0.001)。感染Ad5-Eag1-shRNA可下调骨肉瘤细胞中VEGF的表达(P<0.05)并抑制PI3K和AKT的磷酸化(均P<0.001)。结论:沉默Eag1可能通过调控VEGF/PI3K/AKT信号通路抑制骨肉瘤增殖和血管生成。

Ether à go－go 1在人骨肉瘤细胞和组织中的表达及其调控骨肉瘤恶性表型的分子机制

目的探讨Ether à go－go 1 （Eag1）在人骨肉瘤细胞和组织中的表达及其调控骨肉瘤恶性表型的分子机制。方法采用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）、Western blot和免疫组化检测骨肉瘤细胞和组织中Eag1的表达。采用小干扰RNA （siRNA）抑制Eag1的表达，并采用CCK－8法、克隆形成实验、Transwell体外侵袭实验和划痕实验检测Eag1 siRNA转染后骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力的变化。建立裸鼠骨肉瘤异种移植模型，绘制肿瘤生长曲线，Western blot检测骨肉瘤细胞中血管内皮生长因子（VEGF）和信号转导和转录激活因子3 （STAT3）的表达水平。结果Eag1在MG－63、Saos－2细胞及骨肉瘤组织中异常高表达。CCK－8法检测显示，MG－63和Saos－2细胞中，对照组、Eag1 siRNA1组和Eag1 siRNA2组的细胞存活率分别为（100.00±4.65）%、（63.57±3.89）%、（54.13±3.70）%和（100.00±5.46）%、（56.70±5.34）%、（40.27±5.28）%，与对照组比较，差异均有统计学意义（均P〈0.001）。克隆形成实验显示，MG－63和Saos－2细胞中，对照组、Eag1 siRNA1组和Eag1 siRNA2组的克隆形成率分别为（92.00±3.46）%、（60.00±3.06）%、（53.67±2.40）%和（92.00±5.57）%、（52.33±5.13）%、（41.67±2.73）%，与对照组比较，差异均有统计学意义（均P〈0.001）。裸鼠骨肉瘤生长结果显示，从治疗后第10天起，Eag1 siRNA1组和Eag1 siRNA2组裸鼠的骨肉瘤体积小于对照组，差异有统计学意义（均P〈0.01）。侵袭实验显示，MG－63和Saos－2细胞中，对照组、Eag1 siRNA1组和Eag1 siRNA2组的侵袭细胞数分别为（134.00±3.61）个、（105.20±2.52）个、（91.00±3.01）个和（132.30±3.23）个、（114.30±3.48）个、（82.67±6.33）个，与对照组比较，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。划痕实验显示，MG－63和Saos－2细胞中，对照组、Eag1 siRNA1组和Eag1 siRNA2组的细胞迁移率分别为（62.48±1.83）%、（35.98±1.23）%、（32.30±1.20）%和（70.15±1.42）%、（41.38±1.34）%、（32.40±1.92）%，与对照组比较，差异均有统计学意义（均P〈0.001）。沉默Eag1基因可明显下调骨肉瘤中VEGF及STAT3蛋白的表达。结论Eag1可能通过调控STAT3－VEGF信号通路参与骨肉瘤细胞的增殖和侵袭过程，可作为骨肉瘤潜在的治疗靶点。