miR-181a及miR-138对软骨肉瘤细胞增殖的影响

【目的】探讨miR-181a及miR-138对软骨肉瘤细胞增殖的影响。【方法】收集20例软骨瘤及20例软骨肉瘤组织标本,采用qRT-PCR检测miR-181a及miR-138表达水平,采用miRNA模拟物促进软骨肉瘤细胞SW1353中miR-181a及miR-138的表达,通过细胞计数法检测miR-181a或miR-138单独过表达及联合过表达对SW1353细胞的生长能力的影响。通过TargetScan数据库预测miR-181a、miR-138与RAS家族关联结构域蛋白8(RASSF8)的结合位点,并采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。【结果】与软骨瘤组织相比,miR-181a及miR-138在软骨肉瘤组织中的表达均显著上调(P<0.05);与阴性对照相比,miR-181a及miR-138单独过表达组的细胞生长能力均显著上调(P<0.05),且miR-181a及miR-138联合过表达组细胞生长能力上调最为显著;经预测,miR-181a及miR-138与RASSF8均存在结合位点;与共转染野生型RASSF8+scramble组相比,共转染野生型RASSF8+miR-181a组以及野生型RASSF8+miR-138组的荧光素酶活性均显著降低(P<0.05);与共转染突变型RASSF8+scramble组相比,共转染突变型RASSF8+miR-181a组及突变型RASSF8+miR-138组的荧光素酶活性无显著变化(P>0.05)。【结论】miR-181a及miR-138可能通过抑制RASSF8而促进软骨肉瘤细胞的生长。

miR-181a通过靶向PTEN促进软骨肉瘤细胞的生长

目的探讨miR-181a通过磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)促进软骨肉瘤细胞生长的作用及其可能的调控机制。方法收集2022年1月至12月湖南省人民医院骨科患者手术切除的新鲜软骨肉瘤及软骨瘤组织各10例,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法分别检测miR-181a在软骨肉瘤及软骨瘤组织中的表达;体外培养软骨肉瘤细胞SW1353,分别转染miR-181a抑制剂(miR-181a抑制组)及其对照(对照miR-NC)到细胞中,通过CCK-8细胞计数实验及克隆形成实验分别检测miR-181a对SW1353细胞生长及增殖能力的影响;通过Target Scan数据库预测miR-181a与PTEN之间的结合位点,并采用双荧光素酶报告基因实验进行验证;分别转染miR-181a模拟物(miR-181a组)及其对照(miR-NC组)到软骨肉瘤细胞SW1353中,检测细胞中ATP含量、葡萄糖消耗量和乳酸生成量,分析miR-181a对SW1353细胞糖酵解的影响。结果软骨肉瘤组织中miR-181a的表达明显高于软骨瘤组织(P<0.05);miR-181a抑制组的细胞生长及克隆形成能力均明显低于对照组(均P<0.05);经Target Scan在线网站预测,miR-181a与PTEN之间可能存在结合位点,且双荧光素酶报告基因实验证实共转染野生型PTEN和miR-181a可显著降低荧光素酶活性(P<0.05);miR-181a组的ATP含量、葡萄糖消耗量和乳酸生成量均明显高于miR-NC组(均P<0.05)。结论miR-181a通过PTEN介导糖酵解促进软骨肉瘤细胞的生长。