总蛋白改良参考方法的建立及其用于临床检测结果的溯源性研究

目的建立测量总蛋白(TP)参考方法,评价不同实验室TP测定结果的溯源性。方法参照美国疾病控制与预防中心推荐的参考方法及相关文件,建立37℃温浴10min的总蛋白参考方法。根据美国临床实验室标准化协会系列文件对方法的精密度、正确度、线性范围等性能进行评价。应用该参考方法对新鲜血清进行赋值作为校准品校准广州21家实验室,比较校准前、后赋值血清校准品、血清样本测定结果间的偏移,进行检验结果的可比性评价。结果改良参考方法的精密度评价样本浓度为55.48、88.68g/L的CV分别为0.56%、1.23%,标准参考物质909C与靶值的偏移为1.76%,分析测量范围上限128.69g/L。与参考方法测量结果比较,赋值血清校准品校准前平均偏移为6.38%,校准后降为1.86%,样本血清1、2校准前偏移分别为6.04%和8.71%,校准后降为-1.61%、-0.13%。结论改良的双缩脲法测量TP方法性能好,应用参考方法对新鲜血清进行赋值能够实现不同检测系统结果的溯源性。

高效液相色谱串联质谱法测定血清非结合雌三醇的前处理研究

目的优化高效液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)测定血清游离雌三醇(uE3)的前处理方法。方法以活性炭吸附血清为研究基质,通过加入已知量的雌三醇(E3)标准品及E3-2-3-4-13 C3内标,在LC-20AD XR高效液相色谱系统和API 5500串联四级杆质谱仪上对E3检测的色谱条件、质谱条件及萃取条件等进行优化。结果色谱条件:选用菲罗门Knietex色谱柱(100.0mm×2.1mm,2.6μm);有机相为甲醇,水相为0.1mmol/L氟化铵水溶液,8min梯度洗脱。质谱条件:选用电喷雾(ESI)负离子模式和多反应监测(MRM)模式分析,选择质荷比(m/z)287→m/z 145作为E3的定量离子对,m/z 287→m/z 171作为定性监测离子对;选择m/z 290→m/z 148作为内标的定量离子对,m/z 290→m/z 174作为定性监测的离子对。萃取条件:萃取剂为正己烷/乙酸乙酯(50/50,v/v),样品与萃取剂的比例为1∶2,萃取率可达85.71%。结论 E3检测的色谱条件、质谱条件、萃取条件已得到全面优化,为后续建立LC-MS/MS测定人血中uE3的参考方法打下良好基础。

赋值血清校准总胆固醇、三酰甘油前后测量结果的一致性

目的应用参考方法赋值冰冻新鲜人血清样本作为校准品,观察可否改善测量结果的准确性和一致性。方法由国内2家参考实验室按IFCC推荐的参考测量程序为冰冻新鲜混合人血清赋值,各实验室在赋值血清校准前,重复检测赋值血清、水平1样本（S1）和水平2样本（S2）各3次;再用赋值血清校准常规检测系统,校准后再重复校准前测量,记录并收集实验数据。比较校准前后,不同检测系统间总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）测定结果的变异和测量结果与参考方法测量结果间的偏移。结果 TC和TG的复现性（CV）由校准前的7.01%～3.16%下降到校准后的2.34%～1.85%;偏移则从3.08%～0.88%下降到1.07%～0.33%。校准前TC项目符合质量要求的临床实验室有7家,符合率为33.3%,校准后符合率为71.4%;校准前TG项目符合质量要求的临床实验室有11家,符合率为52.4%,校准后符合率为95.2%。结论参考方法赋值的冰冻新鲜人血清校准临床常规检测系统具有可行性,可改善和提高常规检测系统测定结果的准确性和可比性。

丹参对子宫内膜异位症间质细胞MMP-9mRNA及蛋白表达的影响

目的:观察丹参对子宫内膜异位症间质细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)m RNA和蛋白表达的影响,探讨其可能的机制。方法:用混合酶消化法进行间质细胞培养,分别加入空白对照(空白组),不同浓度丹参(1 mg/L,5 mg/L,10 mg/L,15 mg/L)(丹参1组、丹参2组、丹参3组、丹参4组)。细胞常规培养48 h后,用CCK-8法观察不同浓度的丹参对间质细胞增殖的影响,RT-PCR法检测其对MMP-9 m RNA表达的影响,Western blotting检测其对MMP-9蛋白含量的影响。结果:CCK-8法结果显示,除丹参1组外,其余丹参组间质细胞增殖与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白组比较,除丹参1组外,各丹参组MMP-9m RNA表达降低、MMP-9蛋白表达量减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:丹参可以抑制异位内膜间质细胞增殖,同时可以抑制MMP-9m RNA和蛋白的表达,从而降低对细胞外基质的降解,最终抑制子宫异位内膜的种植、侵袭和转移。

基于Logistic回归和ROC曲线评价血清PCT和尿培养指标水平在CAUTI患者中的联合预测价值

探讨Logistic回归分析与ROC曲线评价血清降钙素原(PCT)与尿培养指标在尿导管相关尿路感染(CAUTI)中的联合预测价值。方法 选取疑似CAUTI患者81例,进行血清PCT检查与尿培养检测,根据病例结果分成CAUTI组与非CAUTI组,经单因素与多因素Logistic回归分析及绘制ROC曲线评价单一PCT、尿培养与联合检测预测价值。结果 CAUTI组PCT、硝酸盐、白细胞酯酶、细菌计数和白细胞计数水平均高于非CAUTI组,多因素分析表明PCT与尿培养指标与CAUTI密切相关,ROC曲线下分析表明PCT与尿培养指标的AUC曲线下面积高于单项检测。结论 联合检测PCT与尿培养在CAUTI的早期诊断中有重要价值。