DHRS7C基因多态性与驴体尺性状的关联分析

本研究旨在探索DHRS7C基因外显子多态性及其与阳原驴体尺性状的相关性。基于课题组前期阳原驴的体尺性状全基因组关联分析(Genome-wide Association Study,GWAS)结果,选择DHRS7C(Dehydrogenase/Reductase Member 7C)为候选基因,通过PCR扩增其外显子区域、Sanger测序、基因分型以及关联分析等方法,寻找与阳原驴体尺性状显著相关的SNP位点。对显著位点突变前后的mRNA二级结构,蛋白质二、三级结构进行预测比对。结果表明:阳原驴DHRS7C基因外显子区域内存在g.12389830 G>A突变,产生GG、GA 2种基因型,不同基因型个体之间的体长、胸围、管围差异不显著,体高差异显著,GA基因型个体体高显著高于GG基因型;该突变造成蛋白质第63位精氨酸变为赖氨酸,形成错义突变,通过在线网站结构预测,突变前后mRNA二级结构,蛋白质二、三级结构均无明显变化;同时,研究发现该基因还存在g.12397240 G>A、g.12397287 G>A、g.12398389 G>A、g.12398466 G>A 4个突变,但在本研究驴群中尚未发现它们与体尺性状存在显著相关性。综上所述,DHRS7C基因外显子3区域中的SNP(g.12389830 G>A)位点可作为阳原驴体高性状的潜在分子标记。

血清白蛋白的功能、应用及纯化工艺研究进展

白蛋白是血清的重要组成成分,是一种高水溶性的球状蛋白质,可以维持血浆胶体渗透压平衡,兼具抗凝和抗氧化作用。血清白蛋白(serum albumin,SA)的化学结构和构象允许其与许多药物结合,影响药物的转运和代谢过程。作为内源性和外源性配体的载体蛋白,SA对于多种疾病的治疗具有重要的临床意义,包括失血性休克、低白蛋白血症、慢性肝病等。同时,SA还可以作为细胞培养剂,影响卵母细胞的体外成熟和冷冻精子的活性,在动物生产中发挥重要作用。因此,SA的需求在世界范围内逐年增加,获得高纯度、高活性、高回收率的SA至关重要。目前,SA的纯化工艺包括冷乙醇提取法、亲和沉淀、三氯乙酸/丙酮沉淀法、硫酸铵沉淀结合液相色谱法、Cohn法结合液相色谱法、色谱法。作者综述了SA的结构、生理功能、应用及纯化工艺研究进展,并总结不同纯化工艺的原理、纯化效果及优缺点,明晰SA的提取及纯化工艺进程,以期为SA的深入研究和开发利用提供理论依据,进一步推动SA在医药、分子生物学研究、免疫诊断等领域的应用。

阳原驴P2RY10基因多态性及其与体尺性状的相关分析

本实验旨在研究P2RY10基因多态性及其与阳原驴体尺性状的相关性,进而找到与阳原驴体尺性状显著相关的分子标记,加快阳原驴专门化品系选育进程。基于前期阳原驴体尺性状全基因组关联分析的结果,筛选出P2RY10基因进一步研究,选用265头阳原成年母驴,从驴血中提取DNA,PCR扩增后将产物直接测序,对群体中的SNP位点进行基因分型和关联分析。结果表明:P2RY10基因外显子1区域内检测到一个SNP位点(G991A),阳原驴群体内G基因频率0.362,A基因频率0.638。基因型与体高、体长、胸围存在极显著相关关系,与管围存在显著相关关系。在体高和胸围方面,AA基因型显著高于GA和GG,GA显著高于GG;在体长和管围方面,AA基因型显著高于GA和GG,GA与GG间无显著差异。综上认为,阳原驴群体中P2RY10基因外显子1区域中的SNP(G991A)可作为与阳原驴体尺性状选育的潜在分子标记。

用屠宰场绵羊卵巢和附睾进行胚胎体外生产的研究

研究了从屠宰场得到的绵羊卵巢可采集的Ａ级卵母细胞数在不同月份的变化规律及运用屠宰场母羊的卵母细胞、公羊的附睾精子生产早期胚胎的可行性。结果表明在我国新疆地区，９、１０两个月份每个卵巢得到的平均Ａ级卵母细胞数显著高于其它月份（Ｐ＜０．０５），是进行绵羊体外受精研究的理想季节。卵巢卵母细胞经成熟培养后与附睾精子体外受精３０ｈ后，入孵卵母细胞在Ｍ１９９＋ＦＣＳ和Ｍ１９９＋ＦＣＳ＋ＣＣｓ培养液中的卵裂率分别为２２．４％和４４．５％；继续培养４～７ｄ，卵裂胚发育为１６－细胞以上的比例分别为６３．２％和８３．９％，差异极显著（Ｐ＜０．０１）。

马驴繁殖技术现状和未来发展趋势

家畜配子、胚胎相关生物技术的研究与应用依然是21世纪具有重要理论意义和应用价值的生物技术,它不仅是研究家畜生殖生物学和发育生物学基本理论领域的基础技术方法,而且是畜牧业生产中新品种培育、优良家畜快速繁育、家畜遗传资源生物多样性保护的有效技术方法。文章重点综述了国内外马和驴精液保存、定时输精、同期发情、体细胞克隆和X与Y精子分离等繁殖技术的最新进展,并分析了其在现代马驴业中的重要应用价值。

生物频谱对牛胚胎体外生产效率的影响

利用可调式周林生物频谱发生器对牛卵母细胞体外成熟、体外受精和体外培养过程实施辐射 ,以提高牛胚胎体外生产效率。频谱发生器与培养材料的距离为 5cm,辐射强度根据辐射温度加以调节。结果表明 ,辐射温度控制在 3 9℃时 ,入孵卵母细胞的卵裂率 ( 63 %)与对照组 61 ( %)无显著差异 ( P >0 .0 5) ,而囊胚发育率 ( 3 9%)显著高于对照组 ( 1 9%) ( P <0 .0 5) ;当辐射温度达到 4 0℃时 ,试验组的卵裂率仅为 1 4%,囊胚率为 0。体外受精生产的囊胚 EFS4 0液进行玻璃化冷保存 ,解冻后发现 ,整个生产过程经生物频谱辐射胚胎的体外发育率 ( 86%)显著高于对照组 ( 65%)

生物频谱对牛胚胎体外生产效率的影响

本试验利用可调式周林生物频谱发生器对牛卵母细胞体外成熟、体外受精和体外培养过程实施辐射 ,以提高牛胚胎体外生产效率。频谱发生器与培养材料的距离为 5cm ,辐射强度根据辐射温度加以调节。实验结果表明 ,辐射温度控制在 39℃时 ,入孵卵母细胞的卵裂率 ( 63% )与对照组 ( 61 % )无显著差异(P >0 0 5) ,而囊胚发育率 ( 39% )显著高于对照组 ( 1 9% ) (P <0 0 5) ;当辐射温度达到 4 0℃时 ,实验组的卵裂率仅为 1 4 % ,囊胚率为 0。体外受精生产的囊胚用EFS4 0液进行玻璃化冷冻保存 ,解冻后发现 ,整个生产过程经生物频谱辐射胚胎的体外发育率 ( 86% )显著高于对照组 ( 65% )。

对精子作为动物转基因载体的再探讨

基因转移的主要目的是把外源DNA导入动物细胞核内,改变动物遗传性状,以满足人类的需要。自Palmiter等(1982)获得第一只转基因小鼠以来,转基因猪、牛、羊、鱼、鸡等先后获得成功。目前,动物基因转移的主要方法有;显微注射、反转录病毒感染、胚胎干细胞途径和精子载体。显微注射因安全、可靠而得以广泛运用。精子载体是近几年发展的一种方法。与其它几种方法比较,因它得到后代的阳性率高、方法简单而引起广泛注意。但它的可靠性一直存有争议。

动物转基因技术的研究进展

动物转基因技术的研究进展中国农业大学曾申明动物基因转移是继ＤＮＡ重组之后的又一新兴生物技术，是胚胎工程和遗传工程结合的产物。它是把人工重组的遗传信息导入早期胚胎或种细胞的基因组中，准确、快速地改变受体的基因结构，获得期望性状的转基因动物。在畜牧生产中...

培养介质、卵丘细胞和卵泡直径对猪卵母细胞体外成熟的影响

A类卵母细胞在mTCM 199、NCSU2 3和NCSU37体系中培养 4 4～ 5 2小时后 ,成熟率分别为 76 .1%、78.1%和 6 5 .2 %。前两者差异不显著 (P >0 .0 5 ) ,但显著高于后者 (P <0 .0 5 )。卵母细胞在添加eCG和hCG的NCSU2 3体系中的成熟率 (75 .6 % )明显高于添加FSH的LH和成熟率 (6 5 .2 % ) (P <0 .0 5 )。A、B、C三类卵母细胞在NCSU2 3的成熟率分别为 73.3%、6 0 .4 %和 11.0 % ,三者间差异显著 (P <0 .0 5 )。大 (ф >6mm)、中 (ф =3～ 6mm)和小 (ф <3mm)三种卵泡中的卵母细胞在NCSU2 3中培养后 ,成熟率分别为 5 6 .2 % ,78.1%和 5 1.9% ,中等卵泡中卵母胞的体外成熟率显著高于其他两组 (P <0 .0 5 )。

不同激活方法对猪体外成熟卵母细胞孤雌发育的影响

研究了猪体外成熟卵母细胞的电激活、离子霉素激活和乙醇激活的方法。3种不同激活方法筛选试验表明,猪卵母细胞电激活最佳参数为电场强度130V/min,脉冲时程80μs的1次脉冲激活,即130V/mm-80μs-1次,其囊胚(发育)率为18.92%±8.48%(P>0.05);离子霉素激活的最佳条件为15μmol/L、激活时间40min,其囊胚率为21.27%±8.54%(P>0.05);乙醇激活最佳参数以9%乙醇激活处理3min,囊胚率为13.33%±7.64%。进一步对比试验表明,电激活和离子霉素激活处理的囊胚率和囊胚细胞数无显著差异(P>0.05),电激活的卵裂率明显高于乙醇激活(P<0.05),而囊胚率和细胞数差异不显著(P>0.05)。

波尔山羊胚胎移植技术的研究与应用

对 75只波尔山羊超排处理 ,共获 A、B级胚胎 776枚 ,平均 (10 .35± 6 .4 5 )枚 /只 ,鲜胚移植受体 36 7只 ,移植产羔率达 5 5 .6 %。应用 CIDR和 PMSG同期发情处理受体山羊 5 6 0只 ,5 4 9只达到同期发情 ,32 h内同期率为 98.0 4 %。囊胚和扩张囊胚在发情后 7d的移植产羔率分别为 6 2 .2 2 % (84 /135 )和 5 8.2 6 % (6 7/115 ) ,显著高于桑椹胚 (43.18% )和孵化囊胚 (5 1.72 % ) (P<0 .0 1) ,而囊胚和扩张囊胚间、桑椹胚和孵化囊胚间差异不显著 (P>0 .0 5 )。受体山羊的黄体数量直接影响到移植产羔结果 ,黄体数≥ 2的受体山羊移植产羔率显著高于黄体数为 1的受体山羊移植产羔率 (P<0 .0 1) ,分别为 6 4 .83% (94 /14 5 )和 4 9.5 5 % (110 /2 2 2 )。PMSG注射时间 (在取 CIDR前 2 d或当天注射 )和剂量对受体羊的黄体数和移植产羔率均无显著影响 (P>0 .0 5 )

OPS法玻璃化冷冻牛卵母细胞的研究

用自己现用现配的玻璃化溶液 (EFS4 0、EFS5 0和EDFS30、EDFS4 0 )对二步平衡后的牛体外培养的卵母细胞进行OPS(openpulledstraw)法冷冻保存研究。体外分别培养 6h或 2 2h的牛卵母细胞冷冻解冻后再经 18h或2h培养后 ,经体外受精 ,最高囊胚发育率分别达到 12 %和 17% ;经化学孤雌激活后 ,最高囊胚发育率分别达到2 2 %和 2 4 % ,与对照组 (33% )差异不显著 (P >0 .0 5 )。

小鼠原核胚OPS法冷冻保存技术

在 2 0、2 5℃室温条件下 ,采用 OPS(open pulled straw)法对小鼠原核胚进行玻璃化冷冻保存。结果表明 ,EFS和EDFS各冷冻组的原核形态正常率 (95 %～ 10 0 % )、体外发育率 (76 %～ 82 % )和对照组 (10 0 %、88% )无显著性差异 (P>0 .0 5 )。采用 EPFS4 0冷冻后的原核胚形态正常率 (70 %～ 76 % )与对照组相比差异极显著 (P<0 .0 1)。而 EPFS30和EPFS4 0冷冻后的胚胎发育率 (34%～ 5 7% )均极显著低于对照组 (P<0 .0 1)。另外 ,在 2 5℃室温条件下冷冻保存的原核胚 ,解冻后其囊胚发育率 (76 %～ 80 % )与对照组 (86 % )无显著性差异 (P>0 .0 5 )。冷冻保存的原核胚移植后的妊娠率和产仔率达 4 5 %和 4 4 % ,与新鲜原核胚移植的对照组 (5 6 %和 4 6 % )相比均无显著性差异 (P>0 .0 5 )

猪体外成熟卵母细胞的电激活及其激活后的体外培养

主要研究了猪体外成熟卵母细胞电激活的条件以及孤雌激活胚胎的体外培养体系。用不同场强、脉冲时程和脉冲次数激活猪体外成熟的卵母细胞。结果表明 ,在本试验条件下电激活最佳场强和脉冲时程为 130V·mm-1/ 80 μs ,其囊胚发育率为 (2 0 .12± 8.18) % (P >0 .0 5 )。多次脉冲并不比单次脉冲的激活效果好 (P >0 .0 5 )。孤雌激活胚胎用不同培养方式和气体环境在体外培养 7d ,发现 7d不换液与第 5天换液和第 5天换含 10 %胎牛血清的培养液其囊胚发育率 [分别为 (2 5 .30± 7.5 5 ) %、(2 6 .4 4± 8.35 ) %和 (17.6 8± 5 .39) % ]无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,后两者换液培养方式其囊胚细胞数 (15 .78± 5 .4 6、14 .5 5± 4 .81)明显低于不换液的 (18.0 1± 6 .79,P <0 .0 1)。同时发现低氧 (5 %CO2 ∶7%O2 ∶88%N2 )气体环境培养的胚胎囊胚发育率和囊胚细胞数和高氧环境 (5 %CO2 的空气 )无明显差别 ,分别为 [(2 0 .78± 8.80 ) %、17.0 0± 6 .12和 (2 5 .30± 7.5 5 ) %、18.0 1± 6 .79,P >0 .0 5 ]。表明激活后第 5天换原液和换含胎牛血清的培养液不能提高囊胚细胞数。低氧 (5 %CO2 ∶7%O2 ∶88%N2 )气体环境培养猪胚胎的效果不比高氧环境 (5 %CO2 的空气 )好。

绵羊体内外受精胚胎玻璃化冷冻保存

用 EFS4 0溶液对绵羊体内外受精的早期囊胚进行了玻璃化冷冻保存的研究。经卵母细胞体外成熟、体外受精和体外培养获得的早期囊胚 ,分别作如下处理 :( A) 1 0 %EG中预处理 5min后 ,在 EFS4 0平衡 3 0 s(两步法 ) ;( B) EFS4 0中平衡 1 min(一步法 ) ;( C) EFS4 0中平衡 2 min(一步法 )。然后投入液氮中冷冻保存 ,解冻胚胎的继续发育率分别为 80 %、78%和 50 %,A、B2组的结果与对照组 ( 88%)无显著性差异 ( P >0 .0 5)。经超数排卵获得的体内受精早期囊胚用两步法冷冻保存 ,解冻后胚胎发育继续率为 89%,与对照组( 93 %)也无显著性差异 ( P >0 .0 5)

猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活效率影响因素分析

研究了月龄和卵巢采集后的保存条件对猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活效率的影响 ,以确立猪卵母细胞体外成熟的最佳条件。试验包括 :(1)卵巢保存的生理盐水温度 (2 2、30、37、38.5、4 0℃ )对猪卵母细胞体外成熟和发育潜力的影响。 (2 )卵巢保存时间对猪卵母细胞体外成熟和后期发育的影响。 (3)初情期前后母猪卵母细胞对体外成熟和发育潜力的影响。结果表明 ,(1) 38.5℃保存的卵巢卵母细胞激活后的卵裂率 (79.6 4 % )和囊胚率(18.11% ) ,37℃的卵裂率 (76 .18% )和囊胚率 (33.82 % )相比 ,差异不显著 (P >0 .0 5 )。当温度达到 4 0℃时 ,卵裂率(2 1.6 8% )和囊胚率 (0 )与 37℃相比差异极显著 (P <0 .0 1)。 30℃与 37℃相比 ,卵裂率和囊胚率之间差异不明显 (P>0 .0 5 )。而当温度降低到 2 2℃时 ,卵裂率和囊胚率明显降低 (P <0 .0 5 )。 (2 )猪卵巢在体外保存 2和 6h对卵母细胞激活后的卵裂率 (6 8.86 %VS 6 8.74 % )和囊胚率 (16 .12 %VS 16 .0 9% )无显著影响 (P >0 .0 5 )。 (3)初情期前、后母猪卵母细胞激活后的卵裂率没有显著差异 (72 .90 %± 7.0 4 %VS 77.35 %± 8.2 9%P >0 .0 5 ) ,但初情期后母猪卵母细胞激活后的囊胚发育率显著高于初情期前 (2 2 .5 2 %± 7.4 8%VS 36 .6 2 %± 10 .2 5 % 。

化学激活对猪体外成熟卵母细胞孤雌发育的影响

探索了离子霉素结合细胞松驰素B(cytochalasinB,CB)、放线菌酮(cycloheximide,CHX)以及6-二甲基嘌呤(6-dimethylaminopurine,6-DMAP)等化学物质,对猪卵母细胞激活后发育的影响。试验1,体外成熟卵母细胞分别用15、20、25、30μmol·L-1的离子霉素处理40min或电激活(1.3kV·cm-1,80μs,1次脉冲),结果表明,20μmol·L-1组的激活率(69.93±5.80)%显著高于15μmol·L-1组(P<0.05),但与其它各组差异不显著(P>0.05)。试验2,卵母细胞采用20μmol·L-1离子霉素分别激活10、20、30、40、50min,再用2mmol·L-16-DMAP处理6h,其中,40min组的卵裂率、囊胚率[(72.40±13.02)%、(25.37±11.43)%]较高,但与其它各组差异不显著(P>0.05)。试验3,卵母细胞经离子霉素(20μmol·L-1、40min)激活后,分别用7.5μg·ml-1CB、10μg·ml-1CHX、2mmol·L-16-DMAP、7.5μg·ml-1CB+10μg·ml-1CHX和7.5μg·ml-1CB+2mmol·L-16-DMAP处理6h,2mmol·L-16-DMAP组的激活率、卵裂率和囊胚率[(86.05±4.29)%、(61.77±8.10)%和(21.62±3.31)%]显著高于7.5μg·ml-1CB组(P<0.05)与另外几组差异不显著(P>0.05)。试验4,卵母细胞由离子霉素(20μmol·L-1、40min)激活后,用2mmol·L-16-DMAP分别处理3.5、5.5、7.5h,5.5h组的卵裂率和囊胚率[(66.

小鼠桑椹胚简易玻璃化冷冻技术再探讨

本试验继小鼠扩张囊胚玻璃化冷冻保存成功后，在室温（２５℃）下利用不同浓度的ＥＦＳ玻璃化溶液，对小鼠的桑椹胚简易玻璃化冷冻技术进行再探讨。结果是胚胎在１０％ＥＧ溶液中预先处理５分钟，再移入事先配置好含有ＥＦＳ３０的０．２５ｍｌ塑料细管中１分钟平衡后直接投入液氮中冷冻，解冻后获得的发育率最高（９４％）。冻胚移植后妊娠率和产仔率分别为５６％（９／１６）及４２％（４９／１１６）。与对照组相比差异不显著（Ｐ＞０．０５）

山羊超数排卵与胚胎移植技术的研究与应用

本研究于 2 0 0 0年 9月～ 2 0 0 3年 11月分别对 883只 (次 )波尔山羊、95只黑山羊、5 2只努比羊和 37只波黑杂交羊采用孕激素 +FSH法进行超排处理 ,对 1190 0只受体黑山羊埋置CIDR或孕酮海绵栓并分别注射Folligon的方法进行同期发情处理 ,通过对不同品种、季节、年龄和重复超排对山羊超排反应的影响 ,胚胎分割、胚龄和黄体状况对移植妊娠率和产羔率的影响及不同孕激素制剂对同期发情效果的影响等因素进行分析 。