促红细胞生成素通过激活Akt通路促进胶质瘤的快速增殖

目的研究促红细胞生成素(EPO)是否通过Akt信号通路促进胶质瘤的快速增殖。方法通过免疫组化法检测EPO在人各病理级别胶质瘤中的表达差异;采用胶质瘤U87细胞系建立裸鼠皮下移植瘤模型,分为对照组和EPO处理组,监测肿瘤生长速度差异及瘤体中EPO与p-Akt表达变化;体外实验分为对照组、EPO处理组及EPO+Akt抑制剂组,分别使用Western blot测各组间p-Akt及cyclinD1的表达变化、CCK-8法测生长曲线、克隆形成实验检测增殖速度差异、流式细胞术检测细胞增殖周期的变化。结果人胶质瘤标本中,高病理级别组比低级别组EPO的表达量高(P=0.0002);裸鼠移植瘤过程中,EPO处理组比对照组瘤体中EPO及p-Akt表达显著增高(P_(EPO)=0.0006,P_(P-Akt)=0.0003),瘤体生长明显增快(P_(volume)<0.0001,P_(weight)=0.0003);体外实验:与对照组相比,EPO处理组细胞中p-Akt及cyclinD1的表达水平均明显升高(P_(P-Akt)=0.0020,P Cyclin D1=0.0022),细胞生长速度明显增快(P3天/5天=0.020/0.028,P克隆=0.0010),增殖指数明显升高(P=0.0028),EPO+Akt抑制剂组细胞中p-Akt及cyclinD1的表达水平较EPO组明显降低(P_(P-Akt)<0.0001,P Cyclin D1<0.0001),同时细胞生长速度及增殖指数均显著下降(P3天/5天=0.003/0.001,P克隆=0.0017,P增殖指数=0.0036)。结论本研究发现EPO可通过激活Akt信号通路上调cyclinD1的表达,加快胶质瘤增殖速度。

树鼩间质视黄醇结合蛋白-3 T细胞抗原表位的预测及其致葡萄膜炎的活性

目的:预测树鼩间质视黄醇结合蛋白-3(retinol-binding protein 3,RBP3)的T细胞抗原表位,评价其致葡萄膜炎的活性及免疫原性。方法:通过DNAMAN软件比对树鼩RBP3蛋白与人光感受器间维生素A类结合蛋白(interphotoreceptor retinolbinding protein,IRBP)、狒狒IRBP、牛IRBP、大鼠IRBP和小鼠IRBP氨基酸序列的同源性,利用DNAStar软件预测分析树鼩RBP3蛋白T细胞抗原表位及其与鼠主要组织相容性复合体Ⅱ类分子(major histocompatibility complexⅡ,MHC-Ⅱ)相互作用的抗原位点,合成上述预测的RBP3182-192抗原多肽片段评价其致B10.RIII小鼠的葡萄膜炎活性和免疫原性。结果:根据DNAMAN比对分析,树鼩RBP3与人IRBP、狒狒IRBP、牛IRBP、大鼠IRBP和小鼠IRBP的氨基酸同源性分别为83.50%、82.81%、82.23%、82.94%、82.63%。T细胞抗原表位的预测结果显示,RBP3含有47个潜在辅助性T细胞抗原优势表位和34个鼠MHC-Ⅱ类分子结合的CD4+T细胞抗原表位。合成包含预测抗原位点的RBP3182-192抗原多肽能够诱导出B10.RⅢ小鼠的全葡萄膜炎疾病和刺激其T淋巴细胞增殖。结论:树鼩RBP3蛋白包含较多CD4+T细胞抗原表位,选择并合成所预测的RBP3182-192抗原多肽具有诱导T淋巴细胞增殖的免疫活性和致小鼠葡萄膜炎的活性,可为诱导实验性自身免疫性葡萄膜炎树鼩新型模型的抗原筛选及葡萄膜炎研究提供基本理论依据。