NEAT1/miR-193a-3p通过TLR-4/NF-κB信号通路对脂多糖诱导的心肌H9c2细胞损伤的影响

目的研究NEAT1/miR-193a-3p对脂多糖(LPS)诱导的心肌H9c2细胞损伤的作用,并探讨其影响炎性损伤的潜在机制。方法采用双荧光素酶报告基因试验和RNA结合蛋白免疫沉淀试验研究NEAT1和miR-193a-3p相互关系。利用脂多糖诱导建立心肌细胞损伤模型,将pcDNA-NEAT1、miR-193a-3p mimic、阴性对照转染到H9c2细胞。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎性因子水平;通过实时定量聚合酶链式反应(PCR)法检测mRNA水平;通过蛋白质免疫印迹(Western Blot)法测定蛋白水平。结果双荧光素酶报告基因试验和RNA结合蛋白免疫沉淀试验研究证明NEAT1可以作为竞争性内源RNA(ceRNA)靶向结合miR-193a-3p。脂多糖诱导使H9c2细胞活力降低(P<0.01),miR-193a-3p mRNA水平明显降低(P<0.01),NEAT1 mRNA水平明显升高(P<0.01)。miR-193a-3p mRNA过表达可使NEAT1 mRNA的表达水平明显降低(P<0.01),NEAT1 mRNA过表达时可使miR-193a-3p mRNA的表达水平明显降低(P<0.01)。过表达miR-193a-3p可改善H9c2细胞因脂多糖刺激导致的细胞活力降低和细胞凋亡增加,而过表达NEAT1可逆转miR-193a-3p对细胞活力和凋亡的调节作用。过表达miR-193a-3p可降低H9c2细胞因脂多糖刺激导致的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)水平升高,而过表达NEAT1可逆转miR-193a-3p对TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平的调节作用。过表达miR-193a-3p可降低H9c2细胞因脂多糖刺激导致的Toll样受体-4(TLR-4)、骨髓分化主要反应蛋白(MYD88)、磷酸酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达水平升高,而过表达NEAT1可逆转miR-193a-3p对TLR-4、MYD88和p-NF-κB p65蛋白表达水平的调节作用。结论NEAT1通过miR-193a-3p可影响脂多糖诱导的心肌细胞凋亡和炎症反应,提示NEAT1可作为竞争性内源RNA海绵miR-193a-3p参与心肌损伤过程,并且与调控TLR-4/NF-κB信号通路有关。