中国耐多药结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因突变特点

为阐明中国耐多药结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因的突变特征 ,对 86株结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因两个区域 ,包括 81个碱基利福平抗药性决定区 (rifampinresistancedeterminingregion ,RRDR)和V176F区进行序列测定。其中 72株耐多药分离株中的 6 5株rpoB基因的RRDR区存在 2 2种不同类型突变、2 1种点突变和一个插入突变。最常见的突变部位分别位于密码子 5 31(4 1% )、5 2 6 (4 0 % )和 5 16 (4 % ) ,10 %耐药分离株未检测到突变。鉴定了RRDR内 6个新的等位基因 ,以及RRDR外部区域 5个新的突变。

基于核酸保护原理的 DNA芯片检测技术

制备出 3′-末端与载玻片交联、 5′-末端用 32P标记的检测 DNA的芯片，方法以化学法合成了3′-末端为尿嘧啶核糖的寡聚脱氧核糖核苷酸片段。用 32P标记寡核苷酸的 5′-末端，经过高碘酸氧化后与玻璃基片表面的脂肪胺基缩合，并用硼氢化钠还原，制成寡核苷酸 3′-末端与玻片共价交联、 5′-末端为同位素标记的 DNA芯片。将该芯片与液相中的核酸片段杂交，再用核酸酶 S1酶切。结果当液相中的核酸与玻片上共价交联的寡核苷酸片段产生特异性杂交配对时，核酸酶 S1不能酶切玻片上的寡核苷酸片段，且玻片上被保护的寡核苷酸量与液相中的与它配对的核酸量之间呈线性相关（ r=0.9967,P< 0.001, n=7)。结论上述检测法可以定性和定量地检测液相中的核酸。由于该法制备的 DNA芯片各个位点的 DNA探针的含量为已知，待测的核酸样品无需进行同位素或荧光标记，操作简便，适用于对样品的 DNA或 RNA进行检测。

应用专一性寡核苷酸微阵列可靠地检测结核分枝杆菌利福平耐药性

DNA微阵列代表聚合酶链反应产物诊断测序的发展方向 .根据结核分枝杆菌rpoB基因利福平抗药性决定区域内点突变及其它重排的特征 .研制一种快速地鉴定结核分枝杆菌利福平耐药菌株的中等密度微阵列方法 .利福平抗药性通过使荧光标记扩增遗传物质与微阵列杂交测定 .检测5 3株利福平耐药结核分枝杆菌和 15株利福平敏感结核分枝杆菌 .微阵列方法的检测结果与药物敏感性试验和DNA测序结果完全一致 .临床标本PCR扩增后仅 1 5h可检出利福平耐药临床分离株 .表明寡核苷酸微阵列是高效的、专一性的方法 。

次级淋巴趋化因子SLC的克隆及其在原核系统中的表达

以中国人的淋巴组织为材料抽提总RNA ,用RT PCR的方法扩增了次级淋巴组织趋化因子 (Secondarylym phoid tissuechemokine,SLC)的成熟肽基因。序列分析表明 ,我们克隆的SLC基因与文献报道的仅有一个核苷酸的差异 ,且并不影响氨基酸的编码。将SLC的cDNA插入含T7启动子的表达载体pET 2 8a(+)中构建重组质粒pET SLC ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)筛选表达菌株。表达菌株经 1mmol LIPTG诱导表达 3～ 5h后 ,超声破菌 ,离心后将上清进行SDS PAGE ,可以看到在 18kD左右处有明显的表达条带。用Ni2 + 亲和层析柱纯化表达产物 ,纯度达到 90 %以上。

mtDNA测序结果与Anderson标准序列的比对——ClustalX等共享软件在法医物证学上的应用

目的 对多个样本的线粒体DNA(mtDNA)高变区测序结果与Anderson标准序列进行比对分析。方法 利用ABI测序仪测定生物学样本的mtDNA高变区序列,得到测序结果文件,通过Chromas、 SeqVerter软件将之转换为aln文件,用ClustalX软件与Anderson标准序列(txt文件)进行比对,确定突变点的碱基排列次序和位置。结果Chromas、SeqVerter和ClustalX软件界面友好,操作简便,可以方便地用于多个样本DNA序列的比较,结果直观,易于判读。结论 运用Chromas、SeqVerter和ClustalX等共享软件,可成功地对多个样本的mtDNA高变区序列进行比对分析。