附子白绢病拮抗细菌的分离鉴定及发酵条件优化

【目的】从黄粉甲中分离获得对附子白绢病病原菌具有较好抑制作用的拮抗细菌,为附子白绢病的生物防治提供菌种资源。【方法】以罹病黄粉甲为材料,通过稀释涂布法和平板对峙法分离并筛选对附子白绢病菌具有拮抗作用的细菌,通过形态结构、生理生化特征及16S rDNA序列分析等对拮抗细菌进行种类鉴定;以拮抗细菌发酵液在600 nm波长下的OD值为指标,采用单因素试验的方法对拮抗细菌的培养基组分以及发酵条件进行优化;通过室内盆栽试验明确拮抗细菌对附子白绢病的防治效果。【结果】采用稀释涂布法从罹病黄粉甲中分离获得4株细菌,经平板对峙法筛选获得对附子白绢病菌具有较好拮抗效果的菌株TS1,该菌对齐整小核菌菌丝生长的抑制率可达68.03%。根据菌株TS1的菌落形态结构、生理生化特征及16S rDNA序列分析结果,确定菌株TS1为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。菌株TS1的优化培养基配方:蛋白胨10.0 g/L、酵母浸粉5.0 g/L、麦芽糖15.0 g/L;最佳发酵条件:装液量30 mL、初始接种量0.50%、转速210 r/min、培养温度42℃、初始pH 9、培养时间48 h。室内盆栽保护和治疗试验结果表明,菌株TS1对附子白绢病的平均防治效果分别为49.39%和62.97%。【结论】优化的发酵方案可用于快速、大批量培养菌株TS1菌悬液。菌株TS1对附子白绢病有较好的防治效果,具有开发成附子白绢病生防菌的潜力。

2株烟草病害拮抗细菌的分离鉴定和发酵条件优化研究

从健康烟株根际土壤中分离得到了2株拮抗细菌菌株Gj7和Gj9。采用平板对峙试验方法探究了这2个菌株对4种烟草病原真菌的抑制效果,通过形态特征观察、生理生化特征测定和16S rDNA基因序列分析对这2个菌株的分类地位进行了鉴定,并采用单因素试验方法对其发酵条件进行了优化。试验结果表明:Gj7和Gj9对烟草黑胫病、赤星病、靶斑病、根腐病菌的抑制率均在60%以上,且这2株菌的挥发性物质对4种病原菌也有抑制效果。初步鉴定Gj7菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),Gj9菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。Gj7菌株的最佳发酵培养基配方为蛋白胨1.00 g,酵母浸粉0.50 g,蔗糖2.00 g,蒸馏水100 mL;其最佳发酵条件为pH值8,转速240 r/min,装液量60 mL,温度24℃,发酵时间为22 h。Gj9菌株的最佳发酵培养基配方为蛋白胨1.00 g,酵母浸粉0.50 g,葡萄糖2.00 g,蒸馏水100 mL;其最佳发酵条件为pH值6,转速240 r/min,装液量30 mL,温度36℃,发酵时间14 h。

烟草黑胫病拮抗菌HZ15的发酵条件优化

采用平板对峙法研究了烟草黑胫病菌的拮抗菌铜绿假单胞菌HZ15菌株对烟草疫霉的抑菌活性;以HZ15菌株发酵液的细菌浓度即在波长600 nm处的OD值为指标,采用单因素试验和正交试验对HZ15菌株的基础发酵培养基和发酵条件进行了优化。结果表明:HZ15菌株的发酵培养以YSP培养基(其组分为蛋白胨10 g/L、酵母膏5 g/L、蔗糖20 g/L、蒸馏水1 L)为最适的基础培养基,以蔗糖为最佳碳源,以蛋白胨为最佳氮源;最佳发酵条件为pH 7、温度36℃、光照时间12 h/d、发酵时间48 h、装液量40 mL/250 mL、转速220 r/min、接菌量2.5%。优化后的培养基和发酵条件提高了HZ15菌株的培养效率,节约了发酵成本。

对紫茎泽兰具有除草活性的特基拉芽胞杆菌ZLSY5的鉴定及发酵条件筛选

为明确菌株的进化关系及发酵条件,本试验对一株来自泽兰实蝇幼虫消化道的ZLSY5菌株进行了鉴定,优化了基础发酵培养基和发酵条件。用形态学及建立系统进化树的方法鉴定了菌株;用分光光度法测定菌液在600 nm处的OD值,根据OD值的大小判断发酵条件的优劣;用圆叶片法测定了优化前后菌株对紫茎泽兰叶片的侵害作用的比较。结果表明,菌株ZLSY5为特基拉芽胞杆菌Bacillus tequilensis 10 b;分别在不同培养基上接种培养72 h后,以牛肉膏酵母葡萄糖培养基中细菌量最多,细菌生长速度最快;在5种不同碳源中,麦芽糖最利于菌株ZLSY5生长;在6种不同氮源中,酵母膏效果最好,其次为蛋白胨。最适发酵条件为温度28℃,pH 6,接菌量2.0%,装液量40 mL/250 mL,转速240 r/min,发酵时间36 h,光照20 h/d。菌株ZLSY5最适培养基:蛋白胨10 g/L,酵母膏5 g/L,麦芽糖10 g/L,蒸馏水1 L。优化后培养基对叶片的影响较小,因此优化后所培养的菌株ZLSY5对紫茎泽兰叶片的侵害作用更好,原浓度时侵害指数接近90%。

烟草黑胫病拮抗细菌的分离、鉴定及发酵条件优化

【目的】从美洲大蠊肠道筛选获得对烟草黑胫病病原菌具有拮抗作用的拮抗菌株,明确拮抗菌株的分类地位、优化其发酵条件及测定其对烟草黑胫病的室内防治效果,为烟草黑胫病的生物防治提供菌种资源。【方法】以美洲大蠊肠道为材料,利用稀释涂布平板法及平板对峙法筛选对烟草黑胫病具有拮抗作用的菌株,根据形态特征、生理生化、16S rDNA和gyrB基因序列分析对拮抗菌株进行鉴定;以细菌发酵液的OD_(600)为指标,对拮抗菌株发酵培养基及发酵条件进行单因素及正交试验;通过室内盆栽试验测定拮抗菌株对烟草黑胫病的防治效果。【结果】采用稀释涂布平板法从美洲大蠊肠道分离得到200株细菌,经平板对峙法筛选得到对烟草黑胫病具有较强拮抗作用的菌株MC2-1,其抑菌带宽为8.00 mm,平均抑菌率为62.87%。结合菌落形态、生理生化及16S rDNA和gyrB系统发育进化树分析结果,鉴定菌株MC2-1为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis);其最适培养基配方为:牛肉浸膏8 g/L,酵母浸粉5 g/L,麦芽糖10 g/L;最佳培养条件为:接菌量10%、装液量30 mL、培养基初始pH 7、转速180 r/min、培养温度36℃、培养时间60 h;优化后的培养基和发酵条件菌液浓度(OD_(600)分别为2.72和2.81)均显著高于原始培养基和发酵条件的菌液浓度(OD_(600)分别为2.31和2.56)(P<0.05);盆栽试验结果显示,优化后菌株MC2-1对烟草黑胫病的平均防效为63.92%,显著高于优化前的53.72%。【结论】优化后的方案可提高菌株MC2-1的菌体量,并增强对烟草黑胫病的防治效果。菌株MC2-1具有开发成为烟草黑胫病生防菌的潜力。

一株烟草黑胫病拮抗菌Y12的鉴定及发酵条件优化

本试验通过形态学特征、生理生化特征及16S rRNA基因序列分析,对从美洲大蠊肠道内分离出的烟草疫霉拮抗菌Y12菌株进行鉴定;采用分光光度法测定菌悬液在600 nm处的OD值以判断其生长状况并确定最适发酵条件。结果表明,Y12菌株为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。其最适培养基为:牛肉浸膏8.0 g,酵母浸粉5.0 g,葡萄糖10.0 g,琼脂15.0 g,加蒸馏水至1 L;最适发酵条件为:温度28℃、初始pH=7、装液量20 mL、发酵时间60 h、转速220 r/min、光照时间8 h/d、接菌量0.10%。采用最佳发酵条件进行Y12的培养,可明显提高菌株的发酵速率,为后续利用Y12菌株进行生物防治提供了理论依据。

一株咖啡灭字脊虎天牛幼虫虫生真菌鉴定、培养及致病力研究

为探索防治咖啡灭字脊虎天牛的生物菌剂,从田间自然罹病死亡的咖啡灭字脊虎天牛幼虫的僵虫虫体上分离到1株对其有高致病力的虫生真菌(编号Bd01),生测实验发现该菌对咖啡灭字脊虎天牛幼虫的LC为4.56×10^(5)孢子/mL。采用形态学观察和ITS序列分析对该菌进行鉴定,并测试不同环境因子对该菌营养生长和致病力的影响。结果显示:该菌为爪哇虫草,PPDA为该菌最适生长培养基,26℃、85%~100%的相对湿度是其最适宜的生长条件,紫外光照射30 min后不利于该菌生长;1×10^(8)孢子/mL孢子悬浮液接种咖啡灭字脊虎天牛幼虫10 d后,在26~28℃条件下致病力最强,相对湿度为85%~100%致病力最强,紫外光照射60 min后致病力减弱。结果表明:爪哇虫草Bd01在适宜的环境条件下对咖啡灭字脊虎天牛幼虫有较好的生防潜力,具有进一步深入研究和开发利用的前景。

一株烟草疫霉拮抗菌MC4-2的鉴定、发酵条件优化及防效测定

【背景】烟草黑胫病是由烟草疫霉(Phytophthora parasitica var.nicotianae)引起的真菌性病害,给我国烟叶生产带来了巨大损失。【目的】在美洲大蠊肠道中分离并获得一株对烟草疫霉具有拮抗作用的菌株MC4-2,拟进一步明确该菌株的分类地位、优化发酵条件及对真菌性病害的防治效果。【方法】通过形态特征、生理生化特征和16S rRNA基因序列等方法对菌株MC4-2进行鉴定;以细菌发酵液在波长为600nm时的OD值为指标,采用单因素和正交试验的方法对菌株MC4-2的发酵培养基和发酵条件进行优化;通过在温室内进行盆栽防效试验,明确了该菌株对烟草黑胫病的防治效果。【结果】通过平板对峙试验发现菌株MC4-2对烟草疫霉有较好的抑制效果,抑制率可达到64.04%;16S rRNA基因序列分析表明菌株MC4-2与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)相似度达到99%,形态特征和生理生化特征与该菌也基本符合;其优化培养基配方为:蛋白胨1.0 g、酵母浸粉1.0 g、蔗糖1.5 g、蒸馏水100 mL;最佳发酵条件为接种量8%、装液量30 mL、初始pH 6.0、转速210 r/min、温度32°C、培养时间60 h、光照时间12 h/d;室内盆栽试验结果表明,菌株MC4-2对烟草黑胫病的平均防效可达到63.86%。【结论】为利用枯草芽孢杆菌MC4-2进行生物防治提供了重要参考依据。