啤酒酵母中(1→3)-β-D-葡聚糖的提取及其机理研究

分别采用酸法、酸碱法来提取啤酒酵母中的(1→3) β D 葡聚糖,然后对其产品进行多糖成分和紫外光谱分析。结果发现,在用c(CH3COOH)=0 5mol/L的水溶液提取啤酒酵母中的(1→3) β D 葡聚糖时,其产品中除含有葡聚糖外,还含有一定量的甘露聚糖和蛋白质这两种成分。但先用c(NaOH)=1 0mol/L的水溶液提取,再用w(CH3COOH)=4%的醋酸溶液处理时,产品为高纯度的(1→3) β D 葡聚糖。此结论由傅立叶红外光谱和核磁共振碳谱得到进一步的证实。接着从其水解机理上阐述了产生上述两种不同结果的原因,从而说明了酸碱法是从啤酒酵母中提取(1→3) β D 葡聚糖的理想途径。

HCV NS5B蛋白对HCVRNA的模板特异性研究

在大肠杆菌菌株BL21(DE3)中表达并纯化HCV的依赖于RNA的RNA多聚酶(RNAdependentRNApolymerase,RdRp,NS5B蛋白)。以HCV正、负链RNA3′末端的序列为模板,体外研究NS5B蛋白催化的RNA合成。结果显示,正链RNA在体外不能指导RNA合成,而负链RNA模板可以产生一条全长的正链RNA产物,表明NS5B对负链RNA具有模板特异性。NS5B对负链RNA的特异性在模板竞争性实验中得到进一步证实,正链RNA的存在和竞争对以负链为模板的RNA合成没有影响。这样,就合理解释了在HCVRNA复制时正链RNA的数量远比负链RNA多这一问题。同时,本实验的结果也为进一步研究病毒或其它细胞因子参与以正链RNA为模板进行的RNA合成,以及有关负链RNA模板特性的研究奠定了基础。

HBV X基因的表达及在真核细胞中对内质网压力的作用

运用PCR技术获得HBx基因,分别克隆到原核表达载体pET-his和真核表达载体pcDNA3.1(-)上。重组质粒pET-his-HBx转化大肠杆菌BL21(DE3)后,IPTG诱导表达,利用Ni柱纯化后的蛋白免疫家兔,获得特异性的抗-HBx兔抗血清。重组质粒pcDNA3.1(-)-HBx分别转染HepG2和Hep3B细胞系后,经RT-PCR和Westernblot检测,证明HBx可以在这两种细胞系中表达。通过报告基因的表达研究了HBx对XBP1和GRP78启动子的激活活性,结果表明瞬时转染HBx的细胞系中,XBP1和GRP78启动子介导的荧光素酶活性比相应的对照细胞增加了3～7倍。通过RT-PCR分析证明,转染了HBx的细胞中XBP1mRNA发生了剪切。因此,可以初步推断HBx在HepG2和Hep3B细胞中的表达可以引起内质网压力反应,为进一步阐明HBx表达对内质网的影响和肝脏病原发生机制奠定了基础。

用Vero细胞制备马抗狂犬病血清抗原

以Vero细胞为基质制备马抗狂犬病血清用抗原,以期建立有效、经济、简便的抗原制备方法.用含10%马血清营养液对Vero细胞作适应性培养,接种狂犬病毒,以含1%～3%马血清营养液作维持液培养病毒,于第5,8天收获病毒液,经灭活、浓缩、离心等制成抗原.第5,8天收获病毒滴度可稳定在7.0logLD50/mL以上,灭活抗原具良好的抗原性,用NIH法测定效价达6.0IU/mL以上,可用作抗原生产抗狂犬病血清.

大肠杆菌对志贺氏菌生长的抑制作用

志贺氏菌是引起夏秋季急性腹泻的重要病原菌，在我国发病率一直居高不下，对公众健康造成严重威胁。志贺氏菌为兼性厌氧菌，能在普通培养基上生长，形成中等大小，半透明的光滑型菌落。在肠道杆菌选择性培养基上形成无色菌落。大肠杆菌广泛份布在自然界，大多数是不致病的，

湖北省36株单增李斯特菌脉冲场凝胶电泳分型

目的:了解湖北省各类食品中分离到的单核细胞增生李斯特菌各菌株之间的遗传相关性,了解湖北省Lm基因型的分布情况和分子流行特点。方法:按照标准化的Lm-PGFE方法对所分离到的36株Lm菌株进行脉冲场凝胶电泳分型。结果:36株Lm菌株通过PGFE分成了12个型别,各型别之间不紧密相关。结论:湖北省食品中Lm的污染来源于不同的克隆株,菌型分散,未发现单个基因型菌株流行的迹象。

中国部分食品分离单增李斯特菌的抗菌药物敏感性及耐药基因检测

目的了解我国部分食品中分离单增李斯特菌的抗菌药物敏感性和耐药性,探讨单增李斯特菌耐药基因的携带与耐药表型的关系。方法采用微量肉汤稀释法对2005-2011年从我国7个省市/地区食品分离的203株单增李斯特菌进行庆大霉素、氨苄西林、头孢噻吩、青霉素、四环素、强力霉素、亚胺培南、红霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、利福平、万古霉素、氯霉素、氨苄西林/舒巴坦、复方新诺明、诺氟沙星、头孢呋肟、多粘菌素B、呋喃妥因、氯林可霉素共20种抗菌药物药敏试验,采用PCR方法对实验菌株进行9种耐药基因及接合型转座子Tn916检测,并对阳性基因产物进行序列测定分析。结果食源性单增李斯特菌对多粘菌素B、呋喃妥因、头孢呋肟、氯林可霉素、四环素、强力霉素、环丙沙星、诺氟沙星和氯霉素的耐药率分别为98.52%、55.66%、50.25%、12.81%、2.46%、1.97%、0.99%、0.99%和0.49%。203株单增李斯特菌中,5株对四环素耐药的菌株均检测出tetM基因,其中3株菌的tetM基因位于接合型转座子Tn916上。结论食品中分离的单增李斯特菌存在不同程度的耐药情况,并有83株多重耐药株存在,具有引起食源性单增李斯特菌感染的风险存在,应加强对抗生素使用的管理以保证食品安全及公众健康。

中国部分食品来源单增李斯特菌中致病相关基因的分布研究

目的了解中国食品来源部分单增李斯特菌(Listeria monocytogences,LM)中致病相关基因的分布情况。方法 383株LM分离自2002-2011年中国14省(市)的生肉、熟食、蔬菜、冷饮、水产等食品。采用PCR(polymerase chain reaction)和DNA打点杂交方法在单增李斯特菌中进行了55个致病相关基因的检测。结果 50个致病相关基因检出率均为100%,inlF、fbpA和mprF基因检出率为99.73%,aut基因检出率为99.22%(380/383),vip基因检出率为98.17%(376/383)。结论 383株食品来源单增李斯特菌中,大部分致病相关基因均存在,部分毒力基因的缺失存在多样性。

荆门市学生餐加工过程微生物监测结果分析

目的了解荆门市学生餐生产加工过程中微生物污染情况,为指导食品加工单位改善卫生条件提供参考。方法 2015年4—9月方便抽取4所市级中学,对学生餐加工过程各环节的236份样本进行微生物指标检测。结果学生餐制作环节中30%的样本大肠菌群计数<10 cfu/m L,大肠菌群计数最大值为7.0×105cfu/m L。金黄色葡萄球菌的检出率为2%(4/228),阳性样本为2份环境(豆制品操作台面、盛放炒菜的方盆)和2份原辅料(鲫鱼、鸡肉)样本。生活用水、物表环境样本和成品学生餐微生物指标不合格率分别为75%(6/8),79%(50/63)和53%(21/40),差异有统计学意义(χ2=8.439,P=0.014)。结论荆门市学生餐生产加工过程各环节样本大肠菌群污染普遍,环境和原辅料样本致病菌风险隐患突出。建议加强对学生餐生产加工各环节卫生的监管力度。

武汉市64株副溶血性弧菌水产品分离株分子特征的研究

目的了解武汉地区水产品中副溶血性弧菌的分子特征,为防止副溶血性弧菌引起的食源性疾病提供基础数据。方法采用PCR的方法,对武汉市2008年-2013年从水产品中分离的64株副溶血性弧菌进行了耐热性溶血毒素基因tdh、耐热性溶血毒素相关溶血素基因trh、不耐热溶血素基因tlh、毒力表达基因toxR和大流行株O3:K6特征基因片段orf8进行检测,并进行统计分析。结果在64株副溶血性弧菌中,tdh、trh基因的阳性率为14.06%和4.69%,orf8基因的阳性率为7.81%,而toxR和tlh基因的阳性率为100.00%。结论 tlh和toxR基因可作为副溶血性弧菌的快速初筛和辅助鉴定手段。武汉地区水产品中副溶血性弧菌tdh,orf8阳性率较高,建议卫生监督部门加强水产品监管,提防公共卫生事件的发生。

武汉市2010年志贺氏菌菌株情况分析

目的掌握武汉市2010年细菌性痢疾监测中分离的志贺氏菌的生化血清学分型、药物敏感状况及毒力基因携带情况。方法按《全国细菌性痢疾监测方案》提供的方法进行病原菌分离鉴定和药敏试验;利用PCR方法分别对志贺氏菌分离株7对毒力相关基因进行检测。结果 2010年分离志贺氏菌15株,宋内氏菌12株,福氏志贺氏菌3株。志贺氏菌敏感药物为阿莫西林(66.7%),诺氟沙星(73.3%)、环丙沙星(60.0%)。全部耐药的有利福平,氨苄两林、萘啶酸。所有菌株对11种抗生素中的6种及以上耐药。15株菌株ipaH基因检出率为100%,ial,virA及sell基因的检出率均为73.3%。setlA与setlB基因仅在福氏志贺氏菌检出。结论 2010年武汉市细菌性疾病病原菌以宋内氏志贺菌为主,耐药情况有口趋严重的趋势,毒力基冈携带模式相对单一。