羌药铁棒锤炮制品的抗炎镇痛作用及初步安全性评价

目的:观察羌药铁棒锤炮制品的抗炎、镇痛作用及初步安全性评价。方法:KM小鼠单次灌胃给药后,观察铁棒锤生品及不同炮制品的中毒情况,计算LD_(50)或最大给药量;分别采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型和琼脂致小鼠肉芽肿模型观察铁棒锤炮制品的抗炎活性;冰醋酸致小鼠扭体实验观察炮制品的镇痛活性。结果:铁棒锤生品的LD_(50)为0.9605g·kg^(-1),而160～180℃、200～220℃和240～260℃砂炒炮制品的最大给药量分别为17.492、16.836和16.840g·kg^(-1)。其中160～180℃和200～220℃砂炒炮制品均能显著降低二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀,并对琼脂致小鼠肉芽肿有明显的抑制作用,对小鼠冰醋酸致扭体疼痛,能明显减少动物扭体次数,延长扭体潜伏期,表现出一定的抗炎、镇痛作用,尤以160～180℃砂炒炮制品疗效更优。结论:铁棒锤生品毒性较大,经炮制后毒性明显降低,其中以160～180℃砂炒炮制品疗效更优,具有明确的抗炎、镇痛作用,适用于临床内服,这也体现了中医"减毒存性"的炮制特色。

民族药铁棒锤不同药用部位中生物碱含量测定

目的:测定铁棒锤不同药用部位中的主要生物碱含量,为民族药铁棒锤不同药用部位合理使用提供依据。方法:色谱柱:WatersXTerraTMRP18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈(有机相),0.03mol/L碳酸氢铵溶液,浓氨水调pH9.5(水相),梯度洗脱;流速:1.0mL/min;检测波长:230nm。结果:在此色谱条件下,3种生物碱类成分可以完全分离,乌头碱、去氧乌头碱、3-乙酰乌头碱的线性范围分别为:0.23～11.5μg(r=1.0000),0.11～5.5μg(r=0.9999),0.084～4.2μg(r=0.9999),回收率分别为:96.2%,RSD=0.8%;96.3%,RSD=0.9%;96.6%,RSD=0.7%。结论:铁棒锤母根与子根生物碱含量和组成差异较小,可以增加为新的药用部位;铁棒锤幼苗中生物碱含量较高,建议在临床使用时减少用量或炮制后使用。

细胞损伤修复及相关药物研发现状

组织损伤的本质是大量细胞死亡导致的组织结构改变和功能失常,严重情况下还可能进一步发展为器官的损伤。目前对组织损伤的处理更偏重于改善微环境和促进细胞新生,但对细胞的损伤修复不够重视,易导致疾病进展并迁延难愈。因此,治疗组织损伤应该以修复细胞为基础。为了系统的掌握细胞损伤修复的研究现状和药物开发情况,本文从DNA损伤、RNA损伤、蛋白质损伤、线粒体损伤、膜损伤以及细胞死亡等方面对损伤原因、修复机制、药物发展进行了系统综述,期望能有助于促进修复类药物的研究发展。

美洲大蠊不同炮制品对CCl_4致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的探索不同炮制方法下美洲大蠊对CCl_4致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法采用CCl_4致小鼠急性肝损伤模型,各实验组按炮制给药方法分为空白组、模型组、原药组、清炒组、盐炙组、麸炒组、米炒组、联苯双酯组。连续给药1周后,除空白组外,各实验组腹腔注射0.2%CCl_4橄榄油溶液,禁食不禁水24 h后,摘除小鼠眼球取血,分离血清。测定血清谷草转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)的活性;取肝脏测肝脏系数,固定于10%的甲醛溶液中,进行肝脏病理组织学考察。然后采用索式提取器测定各炮制组油脂含有量,采用考马斯亮蓝法测定各炮制组蛋白质含有量,采用苯酚-硫酸分光光度法测定各炮制组多糖含有量。结果与模型组比较,各炮制组与原药组均能显著降低小鼠肝脏系数,各炮制组能显著降低小鼠血清中AST、ALT水平(P<0.01),而原药组对小鼠血清中AST、ALT水平的降低与模型组比较不具显著性差异(P>0.05),HE染色表明麸炒组病变最轻。与原药组比较,各炮制组油脂含有量下降;蛋白质含有量以盐炙组最低,原药组最高;多糖含有量在盐炙组、清炒组均较高,在原药组、麸炒组、米炒组均较低。结论美洲大蠊各炮制品均能对CCl_4致小鼠急性肝损伤起保护作用,以米炒、麸炒组效果最佳,原药组效果最差。

近红外光谱结合随机森林算法:一种快速有效的附子产地溯源策略

可靠的原产地认证方法对于保护指定产地的高价值中药材(例如道地药材、地理标志产品等)至关重要。附子作为著名的传统中药和川产道地药材,疗效显著,临床应用广泛,在国内外市场需求量很大。不同产地的附子疗效和价格有所不同,大众很难通过传统经验进行准确鉴别,基于植物代谢组学模式下的质谱检测技术,测试样本制备过程繁琐冗长、操作复杂、检测时间长,且重现性偏低。近红外光谱作为一种成熟、快速、无损的检测技术,被机器学习集成后为中药材在线质量监管和控制带来新途径。基于近红外光谱技术结合随机森林算法建立了一种不同产地附子无损鉴别模型。在四川、陕西和云南等主要栽培区域共采集了255份附子样本,采用傅里叶变换近红外光谱获得所有样本的漫反射光谱信息。采用单一和组合光谱预处理方式以消除光谱中的多种干扰,并筛选出最佳预处理方式,以此为输入指标建立随机森林模型。采用灵敏度、特异度和平衡精度等指标评价了模型的综合性能。结果表明:Savitzky-Golay平滑+多元散射校正为最佳预处理方式;仅采用全波长数据,RF模型对3组省级的样本的预测准确率超过了90%,预处理后预测准确率达98.39%;对于市/县一级样本,RF模型同样具有优秀的判别能力,准确率大于75%。模型对道地产区周边栽培区域的样本,识别率达100%。过滤出前100个特征波数,重新优化模型,模型对各市/县级区域的识别精度超过85%,尤其是对一些产自高原样本的识别能力得到了明显提升。研究中采用了环境友好型溯源策略,分析速度更快,样品损失更少,精度更高,为不同产地附子快速、高效的鉴别提供了新模式,为后续附子及其相关炮制品的鉴别和溯源提供了参考。

药用美洲大蠊氨基酸和维生素含量分析

以人工饲养条件下不同发育阶段的美洲大蠊Periplaneta americana为材料,测定了其氨基酸和维生素的含量。结果表明,美洲大蠊各虫态均含有18种氨基酸,氨基酸总量为23. 27%～29. 44%,人体必需氨基酸含量占44. 04%～49. 55%,优于联合国粮农组织/世界卫生组织推荐的40%的标准,属于优质蛋白质资源。与成虫期相比,若虫期氨基酸含量较高,色氨酸、谷氨酸、丙氨酸、天门冬氨酸和甘氨酸较为丰富。所检测的5种维生素中,维生素E含量最高,刚蜕皮成虫及雌成虫含量均超过12 mg·kg^(-1)。美洲大蠊相关产品促睡眠、抗氧化功能可能与其富含色氨酸、谷氨酸和维生素E有关。

美洲大蠊质量评价研究进展

美洲大蠊是我国传统动物药之一,有效成分为氨基酸、多肽、核苷、多糖等,具有保肝、抗肿瘤、抗炎、增强机体免疫能力、促进组织修复等功能,临床上多用于消化系统疾病、皮肤损伤、慢性乙型肝炎、原发性肝癌等疾病,其疗效确切,应用广泛,不良反应低。美洲大蠊药材来源于人工饲养,现有的真伪鉴别方法多为性状鉴别,DNA条形码技术也趋于成熟,质量控制主要以单一指标、高效液相色谱(HPLC)、指纹图谱为主。药材的真伪优劣直接影响到临床应用是否安全有效,但其鉴定方法、质量评价方式、质量标准尚不完善,因此,提升与完善美洲大蠊质量控制体系刻不容缓。就美洲大蠊药材鉴定、质量评价方法、现行质量标准进行综述,并对质量评价体系中存在的问题进行分析,从而提出合理的建议,以期为完善美洲大蠊质量体系提供参考。

Illumina高通量测序分析健康三七与患根腐病三七根际土和根内生真菌多样性

利用高通量测序技术对患根腐病三七及健康三七根际土与根内生真菌群落组成,物种丰富度及多样性分析。根际土中测序共获得204818高质量序列,主要分为子囊菌门,被孢霉门,球囊菌门、担子菌门及毛霉门;健康三七根际土中被孢霉门,球囊菌门和担子菌门相比健康三七均有着较高的丰度,而子囊菌门则有着较低的丰度。根内共获得209079有效序列,主要分为子囊菌门、担子菌门和毛霉门,根内生真菌的多样性低于根际土的真菌多样性。且患病三七根内致病菌镰刀菌属丰度显著低于根际土中镰刀菌属丰度,可能是镰刀菌属为土壤致病菌导致的。另外,发现无论是在根际土还是根内,患病三七中球囊菌门丰度均高于健康植株,因此,对球囊菌门更深一步的研究有助于探讨球囊菌门与三七根腐病的关系。

铁棒锤及其炮制品中二萜生物碱化学成分研究

目的研究铁棒锤及其水煮炮制品的化学成分。方法采用硅胶柱色谱等方法对铁棒锤及水煮炮制品的化学成分进行分离纯化,根据化合物的理化常数和波谱数据鉴定其结构。结果从铁棒锤及其水煮炮制品中共分离得到12个化合物,经鉴定为去氧乌头碱(1)、3-乙酰乌头碱(2)、乌头碱(3)、15α-OH-neoline(4)、8-acetyl-15-hydroxyneoline(5)、尼奥灵(6)、14-benzoyl-8-O-methylaconine(7)、苯甲酰乌头原碱(8)、多裂乌头碱D(polyschistineD,9)、苯甲酰去氧乌头碱(10)、polyschistineA(11)、乌头原碱(12)。结论二萜生物碱是铁棒锤块根的主要化学成分,其中化合物4～8为首次从该植物中分离得到。与生品相比,铁棒锤水煮炮制品中二萜生物碱成分发生了一定的变化,其中化合物9～12为炮制品新增的成分,这些成分的鉴定为铁棒锤水煮炮制法炮制原理的揭示提供了依据。

民族药铁棒锤炮制减毒原理初步研究

目的:研究铁棒锤不同炮制方法的炮制减毒原理。方法:采用高效液相色谱法和急性毒性试验比较铁棒锤炮制前后化学成分和毒性的变化。结果:生品中的主要毒性成分为乌头碱、去氧乌头碱和3-乙酰乌头碱,炮制品中这3种生物碱的含量降低,苯甲酰乌头原碱的含量增加,新出现了polyschistine-D,beyzoyldeoxyaconine,16-epi-pyroaconitine,16-epi-pyrodeoxya-conitine等生品中所不含的生物碱,从结构上分析,这些新增的成分由乌头碱等毒性成分转化而来。结论:铁棒锤的炮制减毒原理与乌头碱等有毒成分通过酯键水解和高温热解的方式转化成毒性小的成分有关,不同炮制方法均能够达到减毒的目的。

生附片多糖的理化性质及其抗炎与免疫调节作用研究

以生附片为研究对象,采用回流提取粗多糖,利用Sevag除蛋白,通过DEAE-52纤维素柱和Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱对其中的中性多糖片段分离纯化,利用紫外光谱、红外光谱、离子色谱、凝胶渗透色谱等仪器对生附片多糖结构表征;以LPS刺激RAW264.7细胞建立炎症损伤模型,以M1型细胞表面抗体CD86表达、巨噬细胞功能、上清液NO、IL-6含量为指标,考察生附片多糖的抗炎活性;建立H22荷瘤化疗小鼠免疫抑制模型,以抑瘤率、免疫器官指数与功能、血清细胞因子水平为指标,评估生附片多糖的免疫调节活性。结果表明,生附片多糖是由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、果糖以物质的量比0.004∶0.018∶0.913∶0.065组成,相对分子质量为80251的多糖,扫描电镜下呈现光滑的块状形态;在25~200μg·mL^(-1),生附片多糖对RAW264.7细胞未表现出明显的细胞毒性并可抑制细胞向M1型极化,降低细胞上清液中NO与IL-6含量,在25μg·mL-1下能抑制细胞吞噬功能,100~200μg·mL^(-1)增强RAW264.7细胞吞噬功能;200 mg·kg^(-1)生附片多糖能减轻环磷酰胺所致的脾脏损伤,使小鼠血清中IL-1β、IL-6水平增加,TNF-α水平降低。综上所述,生附片多糖具有一定的抗炎作用与较弱的免疫调节作用,可能是附子散寒止痛的物质基础之一。

康定乌头及其炮制品的急性毒性和抗炎镇痛作用研究

目的:研究藏药康定乌头及其不同炮制品的急性毒性和抗炎镇痛作用。方法:小鼠一次灌胃给药后,观察14天内中毒情况,计算LD50或最大给药量。采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀和棉球致小鼠肉芽肿实验考察抗炎活性;采用醋酸致小鼠扭体实验考察镇痛活性。结果:生品、青稞酒制、诃子汤制、甘孜州藏医院制的LD50依次为1176.29mg/kg、163.62mg/kg、329.01mg/kg、2395.48mg/kg,05版药典法制的最大给药量为11428.02mg/kg。生品,青稞酒制,诃子汤制可明显降低二甲苯致小鼠耳廓肿胀度。青稞酒制,诃子汤制对棉球致小鼠肉芽肿有明显抑制作用。青稞酒制、诃子汤制、05版药典法制,甘孜州藏医院制,生品均可以明显减少扭体次数。结论:康定乌头及炮制品毒性大小顺序为:青稞酒制>生品>诃子汤制>甘孜州藏医院制>05版药典法制;各炮制品均有一定的抗炎镇痛作用,青稞酒制,诃子汤制及生品具有较明显抗炎镇痛作用。

铁棒锤砂炒炮制品中二萜生物碱化学成分的研究

目的研究铁棒锤砂炒炮制品的化学成分。方法运用硅胶柱色谱等方法进行分离纯化,根据波谱数据和理化常数进行结构鉴定。结果从铁棒锤砂炒炮制品中分离并鉴定出7个化合物,分别为3-乙酰乌头碱、乌头碱、16-epi-pyrode-oxyaconitine、16-epi-pyroaconitine、polyschistine-D、苯甲酰去氧乌头碱、苯甲酰乌头原碱。结论铁棒锤砂炒炮制品成分的研究可为阐明铁棒锤砂炒法炮制原理提供依据。

HS-SPME-GC-MS分析美洲大蠊不同炮制品的腥臭味物质

目的:分析美洲大蠊生品、酒炙品、醋炙品、麸炒品中腥臭味成分种类及其相对质量分数。方法:采用顶空-固相微萃取法(HS-SPME)萃取美洲大蠊生品、酒炙品、醋炙品、麸炒品中腥臭味成分,结合气相色谱-质谱技术(GC-MS)对腥臭成分进行分析与鉴定,GC条件为程序升温(初始温度50℃,保持1 min;以4℃·min^-1升温至250℃,保持5 min),进样口温度250℃,载气高纯度氦气,载气流速1.0 m L·min^-1,不分流进样;MS条件为电子轰击离子源(EI),离子源温度230℃,四级杆温度180℃,电子能量70 e V,检测范围m/z 35~550。利用峰面积归一化法计算各组分的相对质量分数。结果:从美洲大蠊生品、酒炙品、醋炙品、麸炒品中分别鉴定出41,32,40,47种化合物,四者含共有成分13种。结论:美洲大蠊生品中腥臭成分主要来源于醛类、醇类、胺类及烃类等挥发性物质,醋炙、酒炙、麸炒后可有效减少生品中的腥臭成分及其含量,并且增加的香味物质可掩盖其腥臭气味,为探究美洲大蠊的矫臭去腥方法提供了科学依据,并为动物药腥臭气味分析与矫正提供参考。

美洲大蠊提取物诱导Hct 116细胞凋亡的实验研究

目的:探讨美洲大蠊提取物诱导人结肠癌Hct 116细胞凋亡的作用。方法:用不同浓度的美洲大蠊提取物7.0、7.5、8.0、8.5、9.0mg/ml处理人结肠癌Hct 116细胞,采用MTS法检测细胞增殖的变化并计算IC_(50)值;HE染色和Hoechst33258荧光染色观察细胞形态学变化;TUNEL染色和Annexin V-FITC/PI双标记检测Hct 116细胞凋亡;PI/RNase流式检测Hct 116细胞周期变化。结果:与对照组相比,美洲大蠊提取物7.0、7.5、8.0、8.5、9.0mg/ml处理Hct 116细胞24h具有增殖抑制的作用,抑制率为15.99%～51.55%且具有浓度依赖性,24h的IC_(50)值为9.05mg/ml;HE染色显示细胞出现凋亡形态学变化,Hoechst33258荧光染色、TUNEL阳性染色、Annexin V+/PI-单阳性和Annexin V+/PI+双阳性显示细胞凋亡增多且与美洲大蠊提取物作用浓度呈正相关。美洲大蠊提取物7.5mg/ml可阻滞Hct 116细胞于G0/G1期。结论:PKA可抑制Hct 116细胞增殖,具有诱导Hct 116细胞凋亡的作用。