羧甲基茯苓多糖对肠道病毒71型的抗病毒活性及其机制研究

为研究羧甲基茯苓多糖(CMP)对肠道病毒71型(EV71)的抗病毒活性,并探讨其作用机制,采用CCK-8法检测CMP对人恶性胚胎横纹肌瘤细胞(RD细胞)增殖的影响;采用致细胞病变效应(CPE)法观察CMP对EV71感染引起的CPE的抑制作用;采用致半数细胞病理改变的病毒感染剂量(TCID50)法检测CMP对EV71感染性病毒颗粒的抑制水平;采用RT-qPCR法检测EV71结构蛋白VP1的表达;采用Western blotting法分析VP1、P62、LC3、Caspase-3、cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果表明:不同质量浓度(0、250、500、1000μg/mL)CMP对RD细胞无明显的细胞毒性;与对照组相比,CMP在无毒性浓度范围内可有效抑制EV71的复制,且能够呈剂量依赖性地降低病毒感染引起的细胞病变效应;CMP可呈剂量依赖性地降低EV71病毒结构蛋白VP1的表达和子代感染性病毒颗粒的产生;CMP可下调EV71病毒感染的RD细胞中的LC3-Ⅱ、cleaved Caspase-3的表达。

基于短引物扩增应用的龙牙百合主要病毒鉴定

为确定龙牙百合所感染病毒种类,有效减少百合病毒性病害带来的损失,采用随机取样法在湖南省隆回县取染病植株样本9株,以百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和百合无症病毒(Lily symptomless virus,LSV)3种百合主要病毒已公布序列设计短引物,采用95℃预变性15 min,95℃变性10 s、60℃退火30 s、72℃延伸30 s,45个循环进行RT-qPCR。扩增结果为:LMoV-99、LMoV-101引物扩增产物的片段长度在100 bp左右,符合预期设计所能扩增出的片段长度,而LSV-169、CMV-70引物扩增产物的片段长度在50 bp以下,不符合预期片段长度,而LSV-70基本没有获得PCR产物。检测结果为:龙牙百合感染病毒为百合斑驳病毒,未感染黄瓜花叶病毒和百合无症病毒。