锥形束CT诊断双侧上下颌第一前磨牙对称性三根三管型1例

第一前磨牙根管系统变异度较大,且女性双侧上下颌第一前磨牙对称性三根三根管情况临床中极为少见。本文回顾第一前磨牙根管系统三根管或多根管情况并报道1例上下颌对称性第一前磨牙三根三根管病例,为临床诊疗提供参考。

兔牙髓细胞的体外增殖及鉴定

背景:牙髓干细胞的多分化潜能、高扩增速率和容易获取使之成为引人注目的间充质干细胞来源。目的:观察兔牙髓细胞增殖特性并进行细胞表面标志物的鉴定。方法:体外分离培养兔牙髓细胞,采用酶解组织块法培养细胞至第3代观察细胞形态变化、计数细胞活率、细胞克隆形成率、细胞生长曲线、细胞增殖周期以及细胞表面标志物的鉴定。结果与结论:酶解组织块法可以较快的收获各代兔牙髓细胞。第3代到第6代细胞活率分别比为94.7%∶95.8%∶95.2%∶95.3%,细胞的克隆形成率为18个/2000;细胞的生长曲线基本符合间充质细胞特征,细胞周期G0/G1期大于80%;免疫细胞化学vimentin、CD44、osteonectin、Dsp均为阳性表达。证实兔牙髓细胞中可分离培养出牙髓干细胞,并能在体外有效增殖。

牙周炎患者牙周指标以及唾液NO含量与胃食管反流病相关性分析

目的探讨牙周炎与胃食管反流病(GERD)的相关性,分析患者唾液NO含量与牙周炎患者牙周指标关系,探讨胃食管反流病以及唾液NO含量在牙周炎发病中的作用。方法选择50名正常人(非GERD组)和50例患有GERD的患者(GERD组)作为研究对象,检查两组患者牙周的牙周探诊深度(PD)、附着水平(AL)、社区牙周指数(CPI)以及GERD相关检查,通过单因素和多因素Logistic回归分析,考察牙周炎与GERD的相关性。同时按照是否患有牙周炎将非GERD组分为两组,对比分析患者唾液NO含量与牙周炎患者牙周指标关系。结果GERD组BMI指数、牙周病数以及抽烟者人数均明显高于非GERD组(P<0.05)。GERD组患者的轻、中、重度明显多于非GERD组(P<0.05),经Logistic回归分析,GERD疾病、吸烟史以及BMI指数是牙周炎疾病的危险因素。牙周组患者的NO含量以及PD、AL、SBI值明显高于健康组患者(P<0.05),线性相关性分析,表明牙周炎患者的NO含量与PD以及AL呈现正相关(P<0.05),与CPI无相关性(P>0.05)。结论GERD疾病、吸烟史以及BMI指数是牙周炎疾病的危险因素,患者唾液NO含量与PD和AL呈现正相关,诱发牙周炎的发生。

基于岗位胜任力的口腔住院医师规范化培养路径

随着现代医学教育技术的不断发展,住院医师规范化培训已成为医学生毕业医学教育的重要组成部分,口腔医学住院医师的规范化培养质量直接关系到医师的未来执业水平和执业能力,直接关系到我国口腔医学发展水平和高度。口腔医学具有明显的专业特色,实践性要求较高。针对我国口腔住院医师在规范化培养中存在的诸如医患沟通技巧不畅、岗位业务能力培养内容不规范、科研水平不高、医学人文素养有待提升、岗位胜任能力职业生涯规划欠缺等问题进行分析,并针对上述问题探讨了基于岗位胜任力的口腔医学住院医师规范化培养的方法和路径。

294例维吾尔族患者下颌第三磨牙牙位与拔牙后并发症之间的关系

目的:研究294例维吾尔族患者下颌阻生智齿不同萌出情况与拔牙术后并发症之间的关系。方法:根据长期临床观察及294例拔牙病例记录资料并进行分析。结果:在根尖发育已完成的294例中,近中阻生占48.3%(142例),其次为垂直阻生及水平阻生,各占25.2%(74例)及24.1%(71例),舌向位少见,占2.4%(7例)。在294例中,水平位拔牙后并发症最多见,占49.3%,舌向位最少,占14.3%。结论:拔牙时应根据牙齿位置,牙位高低,牙根及根尖形态,邻牙情况等来选择适当拔牙方法,预防术后并发症。

TGF-β3联合牙髓干细胞修复兔牙槽骨缺损的影像学初探

初步评价TGF-β3联合牙髓干细胞,以bio-oss骨粉为支架修复兔牙槽骨缺损成骨效果的影像分析。方法:从新西兰幼兔前牙及磨牙牙髓组织中分离DPSCs进行体外培养,建立安全可靠的动物模型,术后第4周、第6周分别处死动物,进行大体观察、HE染色、X线、CBCT影像学观察分析。结果:术后6周空白组:牙槽骨吸收明显,未见明显成骨,纤维组织充填其中;对照组:牙槽骨吸收较空白组缩小;实验组:牙槽骨吸收较其他组较少,可见未吸收骨粉颗粒。实验组植骨区新生骨板面积显著高于对照组(P<0.05)。结论:外源性TGF-β3与牙髓干细胞联合bio-oss骨粉在6周即可有效地促进牙槽骨缺损的修复。

基于HMM的维吾尔语腭裂患儿语音理解度评估方法

为维吾尔语腭裂患者语音理解度的评估提供一种非主观的临床辅助手段,提出了一种通过语音识别技术对腭裂患者进行语音评估的方法。结合腭裂病理性语音特征和维吾尔语特点,提取维吾尔语正常儿童语音特征参数,建立了基于隐马尔科夫模型（HMM）的腭裂语音评估系统。再用此系统对腭裂患儿进行了语音理解度评估实验。将此方法评估结果与由专家判听来完成的主观评估方法比较。实验结果显示,该方法对于腭裂患儿的语音评估结果与主观评估结果具有高度一致性,该方法有一定的临床价值,值得进一步研究。

转化生长因子β3促进兔牙髓干细胞成骨向分化的体外实验研究

目的:探讨转化生长因子β3(TGF-β3)体外诱导兔牙髓干细胞(rDPSCs)骨向分化的效果及其作用机制。方法:酶解组织块法分离的rDPSCs分为实验组(rDPSCs+80 ng/ml TGF-β3),对照组(rDPSCs+矿化液)和空白组(rDPSCs),免疫细胞化学染色法行COL-I、OCN, Runx-2染色;RT-qPCR检测各组ALP、COL-I、OCN、Runx-2表达水平;茜素红(ARS)染色观察矿化结节。结果:免疫细胞化学染色结果示实验组成骨蛋白表达明显强于其余2 组;RT-qPCR结果显示实验组中成骨基因的表达均高于其余2 组(P<0.05);实验组矿化结节形成数高于其余2组(P<0.05)。结论:TGF-β3能促进rDPSCs骨向分化。

转化生长因子β3与骨形成蛋白2对牙髓干细胞增殖和成骨分化的影响

背景:转化生长因子β3与骨形成蛋白2对牙髓干细胞的增殖和成骨向分化能力对比相关研究甚少。目的:探讨相同质量浓度转化生长因子β3与骨形成蛋白2对牙髓干细胞成骨向分化的作用及其初步机制。方法:采用酶解组织块法从新西兰大白兔牙髓组织中分离培养牙髓干细胞;将第3代牙髓干细胞分为空白组、骨形成蛋白2(80μg/L)组和转化生长因子β3(80μg/L)组,采用MTT法检测各组细胞的增殖活力;培养第7,14天行碱性磷酸酶活性定量检测,Runt相关转录因子2、骨涎蛋白免疫细胞化学染色,RT-qPCR法检测成骨相关基因的表达;培养第14,21天进行茜素红染色观察矿化结节形成能力。结果与结论:①骨形成蛋白2组和转化生长因子β3组的牙髓干细胞增殖活性、碱性磷酸酶活性均高于空白组(P<0.05);转化生长因子β3组第7天碱性磷酸酶活性高于骨形成蛋白2组(P<0.05);②转化生长因子β3组与骨形成蛋白2组Runt相关转录因子2、骨涎蛋白表达均高于空白组(P<0.05),其中转化生长因子β3组第7天Runt相关转录因子2蛋白表达高于骨形成蛋白2组(P<0.05);③转化生长因子β3组与骨形成蛋白2组碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原A1、Runt相关转录因子2、骨钙蛋白、骨桥蛋白和Osx基因表达量高于空白组(P<0.05),第7天转化因子β3组碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原A1、Runt相关转录因子2基因的表达高于骨形成蛋白2组(P<0.05);④转化生长因子β3组与骨形成蛋白2组矿化结节较空白组明显;⑤结果表明,转化生长因子β3与骨形成蛋白2均能促进牙髓干细胞增殖和成骨向分化;转化生长因子β3对牙髓干细胞成骨早期促进作用优于骨形成蛋白2。

TGF-β3对成骨细胞的增殖和成骨能力的影响及其机制初探

目的观察不同浓度的转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)对成骨细胞增殖和成骨能力的影响及其机制。方法分离获得新西兰幼兔颅盖骨成骨细胞,纯化并鉴定后用不同浓度的TGF-β3(0.1、1、10、100μg/L)诱导成骨细胞,CCK-8法检测增殖活性,定量检测法测定碱性磷酸酶(ALP)含量;免疫细胞化学染色观察Ⅰ型胶原Α1(COL-1A1)、Runt相关骨形成蛋白-2(Runx-2)和骨钙素(OCN)蛋白表达;qPCR法检测ALP、骨桥蛋白(OPN)、骨涎蛋白(BSP)、成骨细胞特异性转录因子(Osx)和Smad4基因的表达;Western blotting法检测Smad2/3蛋白的表达情况。结果成功分离获得并鉴定成骨细胞;10、100μg/L的TGF-β3能明显促进成骨细胞增殖(P<0.05);10μg/L TGF-β3组ALP含量始终高于对照组(P<0.05);免疫细胞化学染色结果显示10、100μg/L的TGF-β3组各蛋白表达均强于对照组;qPCR结果示10、100μg/L的TGF-β3能促进ALP、OPN、BSP、Osx和Smad4基因的表达(P<0.05);Western blotting结果示1~100μg/L的TGF-β3组Smad2/3蛋白表达高于对照组(P<0.05)。结论10~100μg/L的TGF-β3可促进成骨细胞的增殖和成骨能力,浓度为10μg/L时效果最显著,其诱导成骨作用通过Smad依赖通路实现。

转化生长因子β3联合牙髓干细胞在种植体骨结合中作用的实验研究

目的初步探讨转化生长因子β3 （transforming growth factor-β3, TGF-β3）联合体外培养的兔牙髓干细胞（dental pulp stem cells，DPSC）对增强种植体骨结合的影响，为缩短种植周期及增强骨结合提供新的视角。 方法将36只新西兰大白兔按随机数字表法随机分为磷酸盐缓冲液（phosphate buffer saline，PBS）组、DPSC组及TGF-β3＋DPSC组，每组12只。在兔下颌按随机数字表法随机拔除2颗牙齿，即刻植入种植体，PBS组植入Bio-Oss骨粉0.30 g＋PBS 20 μl; DPSC组植入Bio-Oss骨粉0.30 g＋ 1×108个/L DPSC 20 μl；TGF-β3＋DPSC组植入Bio-Oss骨粉0.30 g＋80 μg/L TGF-β3 20 μl＋1×108个/L DPSC 20 μl。术后4、8周分别处死新西兰大白兔18只，行茜素红染色检测成骨质量，行图像灰度分析检测骨涎蛋白、Ⅰ型胶原蛋白及骨钙蛋白的表达，行骨形态计量学分析检测种植体周围骨板宽度（combined bone lamella width，CBLW）、骨结合率（implant bone contact rate，IBCR）、骨小梁宽度（trabecular width, TW）及骨小梁视野面积百分比（trabecular area, TA）。 结果茜素红染色显示，术后4、8周，TGF-β3＋DPSC组较其他两组出现更多的红色钙化结节；术后8周较术后4周钙化结节进一步增多。图像灰度分析显示：术后4周，TGF-β3＋DPSC组骨涎蛋白、骨钙蛋白及Ⅰ型胶原相对表达量分别为（0.35±0.04）、（0.36±0.03）及（0.39±0.01）；DPSC组骨涎蛋白、骨钙蛋白及Ⅰ型胶原相对表达量分别为（0.27±0.02）、（0.24±0.01）及（0.28±0.03）；PBS组骨涎蛋白、骨钙蛋白及Ⅰ型胶原相对表达量分别为（0.13±0.03）、（0.15±0.02）及（0.16±0.02）。术后8周，TGF-β3＋DPSC组骨涎蛋白、骨钙蛋白及Ⅰ型胶原相对表达量分别为（0.51±0.02）、（0.49±0.03）及（0.53±0.02）；DPSC组骨涎蛋白、骨钙蛋白及Ⅰ型胶原相对表达量分别为（0.35±0.02）、（0.37±0.01）及（0.38±0.01）；PBS组骨涎蛋白、骨钙蛋白及Ⅰ型胶原相对表达量分别为（0.21±0.03）、（0.19±0.02）及（0.22±0.02）。术后4、8周，TGF-β3＋DPSC组骨涎蛋白、骨钙蛋白及Ⅰ型胶原表达均显著高于DPSC组及PBS组（P〈0.05），DPSC组与PBS组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。术后8周，TGF-β3＋DPSC组CBLW、IBCR、TW、TA均显著高于DPSC组及PBS组（P〈0.05），DPSC组与PBS组间差异无统计学意义（P〉0.05）。 结论DPSC具有成骨向分化潜能；TGF-β3对DPSC成骨向分化具有促进作用；TGF-β3联合DPSC可有效促进种植体的骨结合。

TGF-β3与牙髓干细胞联合应用对兔面神经损伤修复的作用

目的 探讨转化生长因子-β3（TGF-β3）与牙髓干细胞联合应用能否显著促进兔面神经的损伤修复.方法 取16只成年健康新西兰大白兔,制备面神经上颊支7mm缺损并于损伤局部进行硅胶管套接的动物模型.右侧面神经随机设为（TGF-β3＋牙髓干细胞）实验组（8只兔）和TGF-β3对照组1（8只兔）,左侧面神经设为PBS液对照组2（8只兔）和正常对照组（8只兔）.术后3月,进行大体形态观察、组织学观察及电生理检测.结果实验兔16只均进入分析,实验组再生神经直径与近、远端神经干相当,无神经瘤形成,外膜血管丰富,质地坚韧.再生组织切片HE染色显示：实验组面神经外膜完整,神经纤维排列相对较整齐,形态较完整,髓鞘肿胀,仍可见肥大增生的雪旺细胞,胞核浓密,束间血管较多.光学显微镜图像分析显示：实验组再生神经纤维总数多于其他2个对照组,再生神经纤维直径也远远大于其他2个对照组,其差异具有统计学意义（p＜0.05）.超薄切片透射电镜结果显示：实验组的再生纤维以有髓神经纤维为主,形态规则,髓鞘板层结构清晰,轴浆内细胞器丰富.神经电生理检测结果显示实验组神经肌肉动作电位的潜伏期明显短于其他2个对照组[实验组（1.96±0.32） ms,对照组1（2.35±0.41） ms,对照组2（3.42±0.55）ms,p＜0.05],并且实验组神经肌肉动作电位的波幅明显高于其他2个对照组[实验组（11.06±3.25） mV,对照组1（8.40±1.68） mV,对照组2（4.62±0.77） mV,p＜0.05].结论TGF-β3与牙髓干细胞联合应用能显著提高面神经损伤后的修复作用.

TGF-β3和DPSCs修复兔面神经损伤的组织学观察

目的探讨联合应用质量浓度为100ng／pJ的转化生长因子β3（TGF-β3）和牙髓干细胞（DPSCs）共同修复兔面神经横断性损伤的可行性。方法选用健康成年新西兰大白兔36只，随机分为实验组（DPSCs＋TGF-β3组）、对照1组（TGF-β3组）和对照2组（PBS组），每组各12只。在兔左面颊部手术建立面神经上颊支横断伤模型，实验组向再生室内加入质量浓度为100ng／txl的TGF-β3液和浓度为lxl0S／L的DPSCs悬液0．1ml，TGF-β3组加入等体积的质量浓度为100ng／μl的TGF—β3液，PBS组加入等体积的PBS，分别于术后第1、4、12周处死动物制备标本，评价面神经再生及功能恢复情况。结果36只模型全部进入结果分析，与对照组相比，实验组再生神经恢复均优于2个对照组，对照1组优于对照2组，其差异均具有统计学意义（P〈0．05），且各组恢复效果随时间延长越来越好。结论联合应用TGF-β3与DPSCs可有效促进兔面神经再生，且2者联合应用比单独应用TGF-β3修复效果好，TGF-β3组的效果要优于PBS组。

腹直肌-腹膜瓣转移修复舌缺损后的组织学变化研究

目的观察携带与不携带神经的腹直肌-腹膜瓣转移修复舌缺损后,腹直肌-腹膜瓣的细胞形态及组织学改变。方法选用12只Beagle犬,随机分为2组,分别制备带肋间神经的腹直肌-腹膜瓣(A组)和不带肋间神经的腹直肌-腹膜瓣(B组)修复舌缺损。A组修复时行神经吻合,B组仅缝合修复舌缺损区,不行神经吻合。术后12周进行修复舌大体观察(腹直肌腹膜瓣长度、宽度、表面积),A、B两组腹直肌-腹膜瓣的细胞形态及肌细胞酶组织学染色,观察肌纤维类型。结果术后12周A组腹直肌腹膜瓣长度、宽度、表面积均大于B组,差异有统计学意义(P均<0.01);显微镜下A组腹直肌腹膜瓣有部分肌纤维萎缩,肌束出现部分结缔组织、脂肪组织,肌纤维排列不紧密,肌细胞结构基本正常。B组腹直肌-腹膜瓣肌纤维萎缩,可见脂肪组织,肌细胞结构紊乱,几乎无正常结构的肌细胞。A组Ⅱ型酵解型肌纤维向Ⅰ型肌纤维转化,Ⅰ型纤维比例增加。B组肌纤维萎缩,被大量脂肪组织替代,肌细胞结构紊乱,染色趋于一致,分型变模糊。结论带神经的腹直肌-腹膜瓣移植修复舌体缺损后,重获舌下神经支配的肌纤维类型发生转变,与舌肌接近,为舌体动力性恢复提供了基础。

体外诱导聚氧乙烯-聚氧丙烯醚共聚物水凝胶内兔牙髓干细胞成骨向分化的研究

目的 探讨牙髓干细胞（dental pulp stem cells,DPSC）与聚氧乙烯-聚氧丙烯醚嵌段共聚物（Pluronic F-127）水凝胶的生物相容性,以及DPSC在Pluronic F-127水凝胶支架内的成骨活性,以期为颌骨缺损的组织工程修复提供依据.方法 酶解组织块儿法分离DPSC,有限稀释法进行纯化,镜下观察细胞形态.制备质量浓度为20％的Pluronic F-127水凝胶,扫描电镜观察水凝胶支架材料的微形态.用Pluronic F-127水凝胶包封DPSC进行三维培养,并以普通培养皿的二维培养作为对照组,光学显微镜下观察细胞生长情况.培养第1、3、5、7天甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl terazolium,MTT）法检测支架对细胞增殖活性的影响.常规成骨矿化液诱导14d进行茜素红、免疫细胞化学染色,荧光定量PCR检测碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2（Runt-related transcription factor 2,RUNX2）、Ⅰ型胶原、骨钙蛋白,以评价牙髓干细胞的成骨活性.结果 成功分离并纯化DPSC,二维及三维培养的细胞镜下观察均生长良好,扫描电镜图显示多孔管状结构.培养第1、3、5、7天时A570值：二维培养DPSC分别为0.30±0.06、0.30±0.17、0.35±0.04、0.25±0.06,三维培养的DPSC分别为0.36±0.06、0.54±0.18、0.70±0.10、0.32±0.10,三维培养DPSC的增殖率显著高于二维培养（P＜0.05）,DPSC的细胞活性均在培养第5天时达峰值.常规矿化液诱导14d后茜素红染色结果显示：对照组及三维培养组矿化结节计数分别为（6.8±1.3）和（7.0±1.2）个,两组差异无统计学意义（P＞0.05）.免疫细胞化学染色显示,对照组及三维培养组DPSC中RUNX2、Ⅰ型胶原呈强阳性,骨钙蛋白染色呈弱阳性.荧光定量PCR结果显示：三维培养组Ⅰ型胶原相对表达量显著高于对照组（P=0.015）,其余基因相对表达水平组间差异均无统计学意义（P＞0.05）.结论 Pluronic F-127具有良好的生物相容性,可支持DPSC的成骨向分化;Pluronic F-t27可作为DPSC的生物载体,有望成为理想的骨组织工程支架材料.

牙髓干细胞修复种植体周围骨缺损的研究

目的 建立兔下颌骨前牙即刻种植种植体周围骨缺损的动物模型,考察牙髓干细胞（DPSCs）在种植体周围骨缺损中的骨再生能力.方法 将8只新西兰白兔随机分为两组,分别拔除兔双侧下颌前牙,在拔牙窝颊侧建立2 mm＆#215;3 mm骨缺损区,即刻植入种植体,对照组植入Bio-oss骨粉和磷酸盐缓冲液,实验组植入Bio-oss骨粉和DPSCs.通过大体观察和组织学观察（苏木精-伊红染色、Goldner＆#39;s三色染色和扫描电镜观察）评价植入后4周骨缺损区的骨再生能力.结果 所有实验兔种植体植入顺利,且种植体植入后均稳固,无明显差异.苏木精-伊红和Goldner＆#39;s三色染色观察均可见实验组有新生骨组织形成,且部分新生骨组织为编织骨,骨细胞体积大、数量多,呈编织状排列,骨细胞分化成熟;而对照组可见少量新生骨样组织形成,骨细胞分化较成熟.扫描电镜结果显示,实验组新生骨与种植体间的骨结合较对照组多.结论 与单独使用Bio-oss骨粉比较,DPSCs与Bio-oss骨粉联用的成骨能力相对较强,新生骨组织与种植体的结合能力更好.

维吾尔族腭咽闭合不全患者浊塞音的声学特征分析

目的分析维吾尔语中浊塞音在维吾尔族腭裂术后腭咽闭合不全患者发音中的声学特征。 方法从我科建立的“维吾尔族儿童跟读语音语料库”及“维吾尔族腭裂术后患者跟读语音语料库”中选取维吾尔族正常儿童31例（正常组）和维吾尔族腭咽闭合不全患儿28例（VPI组）。采集2组受试者跟读包含浊塞音/b/、/d/、/g/的9个词的录音样本，并应用PRAAT软件分别比较和分析2组受试者录音样本中的辅音时长（CD）、音强（CA）、第一共振峰（VF1）、第二共振峰（VF2）、第三共振峰（VF3）、第四共振峰（VF4）以及嗓音起始时间（VOT）。 结果2组受试者跟读浊塞音/b/的参数比较，VPI组的VF1、VF3和VF4均显著低于正常组，差异均有统计学意义（P〈0.05）；VPI组的CD显著长于正常组，差异有统计学意义（P〈0.05）。2组受试者跟读浊塞音/d/和/g/的参数比较，VPI组的VF1、VF3和CD与正常组比较，差异均有统计学意义（P〈0.05）。正常组/b/、/d/和/g/ 3个浊塞音的VOT分别为（0.12±0.05）s、（0.10±0.03）s和（0.09±0.03）s，出现率均为100%，浊塞音VOT和出现百分比与VPI组比较，差异均有统计学意义（P〈0.05）。 结论维吾尔语中3个浊塞音/b/,/d/,/g/在腭咽闭合不全患儿与正常儿童语音声学特征之间存在显著差异。

干细胞在骨再生领域的研究进展

干细胞是人体的起源细胞，具有高度增殖、多向分化潜能和自我更新能力。根据来源可将其分为胚胎干细胞和成体干细胞。近年来，骨组织工程的研究取得了长足进步，且已成功应用于临床；而干细胞的研究也为口腔组织工程带来了新的希望，并对骨再生产生了重要的意义。获取增殖能力强，又具有成骨潜能的种子细胞对于骨组织工程的构建至关重要，寻找能够满足要求和易于操作的种子细胞是组织工程研究中的关键环节。牙源性干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪干细胞及胚胎干细胞因具有优良的再生和分化潜能，已成为骨再生治疗的重要来源。就目前研究较多的干细胞的骨再生能力作一综述，并对其应用前景进行探讨。

不同方法提取兔牙髓干细胞对其生物学特征的影响

目的采用不同方法提取兔牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs),比较其生物学特征差异。方法健康新西兰幼兔6只,随机分为观察组和对照组各3只,观察组采用下颌骨下缘根尖孔途径法、对照组采用劈牙冠取牙髓法取牙髓组织,记录2组提取牙髓组织所需时间。2组牙髓组织DPSCs接种至DMEM培养基中培养、传代,显微镜下观察细胞形态。取第1代DPSCs,锥虫蓝染色后计数存活细胞和死亡细胞,计算存活细胞率;姬姆萨染色后显微镜下观察细胞克隆数;第1代DPSCs培养第1、3、5、7、9天,采用血细胞计数器行细胞计数计算增殖细胞数;取第3代DPSCs,茜素红染色后观察钙化结节数。结果观察组提取牙髓组织所需时间[(72.3±5.6)s]较对照组[(283.0±15.1)s]少(P<0.05);与对照组比较,观察组DPSCs较致密,细胞间杂质相对较少;观察组第1代DPSCs细胞存活率[(95.5±6.2)%]、克隆团形成数[(19.00±0.82)个]高于对照组[(93.0±5.8)%、(16.00±1.15)个](P<0.05);培养第1天,观察组增殖细胞数[(41 000±221)个]较对照组[(43 929±215)个]少(P<0.05),培养第3、5、7、9天,观察组增殖细胞数[(70 000±236)、(120 286±216)、(167 943±164)、(177 729±103)个]与对照组[(70 043±231)、(120 457±225)、(167 914±257)、(177 900±110)个]比较差异均无统计学意义(P>0.05);培养14d,观察组第3代细胞钙化结节数[(6.70±0.75)个]与对照组[(6.43±0.53)个]比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论下颌骨下缘根尖孔途径法提取DPSCs较简便、省时,所提取的DPSCs中杂质少,具有细胞存活率高、细胞克隆团形成能力强、增殖能力强等优势。

恒定磁场作用下TGF-β3对兔牙髓干细胞成骨分化潜能的体外研究

目的:探讨体外环境中恒定磁场(static magnetic field,SMF)作用下转化生长因子β3(transforming growth factorβ3,TGF-β3)对兔牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)成骨向分化的潜能。方法:用酶解组织块法分离,提取兔DPSCs,观察SMF作用对其增殖的影响。实验分为空白对照组,SMF组,TGF-β3组和TGF-β3+SMF组,按各组条件培养DPSCs。培养不同阶段采用ALP活性检测,荧光定量PCR,免疫组织化学检测和茜素红染色来评估DPSCs成骨相关指标的表达。结果:通过酶解组织块法获取的兔DPSCs在诱导体系中生长良好。第5,7,9天SMF作用均促进了DPSCs增殖。SMF作用在TGF-β3基础上上调了部分成骨相关指标的表达。结论:SMF的应用在体外环境中对促进兔DPSCs增殖,提高TGF-β3对兔DPSCs成骨向分化的诱导能力。