穿孔素介导的细胞凋亡机制在抗流感病毒感染免疫防御中作用的研究

目的:穿孔素介导的细胞凋亡机制在流感病毒初次感染中作用的研究。方法:用流感病毒A/PR/8/34经鼻感染穿孔素基因敲除鼠和同源对照C57BL/6小鼠,采用PFU方法测定肺内流感病毒增殖状况;免疫组织化学染色方法观察小鼠病毒感染后感染细胞的凋亡情况;利用乳酸脱氢酶释放法检测感染鼠脾淋巴细胞NK活性及CTL杀伤活性。结果:穿孔素基因缺乏导致流感病毒在小鼠肺内大量增殖;小鼠清除感染病毒所需时间延长;病毒感染细胞发生凋亡的时间亦因穿孔素的缺乏而延迟;感染小鼠脾淋巴细胞NK活性及CTL杀伤活性均显著降低。结论:穿孔素依赖的细胞介导的细胞毒效应在控制流感病毒初次感染,快速清除感染病毒方面起重要作用。

呼吸道合胞病毒感染时间对花粉诱导的过敏性反应的影响

目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染时间对花粉诱导的呼吸道过敏性反应是否有影响作用。方法用花粉抽提物JCP致敏BALB/c鼠,致敏前或后经鼻感染RSV,提取肺组织细胞,体外培养,ELISA试剂盒检测培养上清中细胞因子水平;姬姆萨染色法分类并计数肺组织内浸润细胞数量;ELISA方法检测血清特异性抗体IgE水平。结果JCP致敏鼠肺组织细胞培养上清中Th2型细胞因子IL-4明显升高,血清JCP特异性IgE抗体水平亦显著上升,提示JCP是Th2型免疫应答的诱导剂。致敏前RSV感染诱导BALB/c鼠肺组织细胞合成分泌Th1型细胞因子,下调JCP诱导的Th2型免疫应答,降低致敏鼠肺组织炎性细胞的浸润,减少前炎性因子TNF-α及趋化因子IL-8的分泌,降低血清JCP特异性IgE抗体水平。结论在某种条件下,RSV感染对花粉过敏原诱导的过敏性反应有一定的保护作用。

SAM-P1鼠对神经毒型流感病毒R404BP株中枢神经系统感染的免疫防御

目的:研究SAMP1鼠中枢神经系统被流感病毒感染后,机体对感染神经元的清除及病毒感染所诱导的免疫应答。方法:采用立体定位微量注射法,用神经毒型流感病毒R404BP株经嗅球感染SAMP1鼠,造成实验性流感病毒脑炎动物模型。检测感染鼠生存率,感染神经元清除时间以及Th1型细胞免疫。结果:SAMP1鼠对流感病毒R404BP株易感性高,感染后生存率降低,清除感染神经元所需时间延长,脾淋巴细胞NK活性及CTL杀伤活性低下。结论:老化鼠因机体Th1型免疫应答下降导致对神经毒型流感病毒免疫防御机制的降低。

HSV Us3蛋白激酶对巨噬细胞生物学活性和凋亡的影响研究

为探讨单纯疱疹病毒Us3基因及其编码产物对LPS活化的巨噬细胞生物学活性和凋亡的影响,小鼠巨噬细胞系RAW246.7细胞瞬时转染pcDNA3.1(+)-Us3重组质粒并体外培养。利用免疫荧光技术检测转染率,ELISA方法检测培养上清中TNF-α分泌水平,Annexin-V染色评价转染细胞凋亡情况。结果发现,pcDNA3.1(+)-Us3重组质粒可成功转染至RAW246.7细胞,转染率为10.3%。与空质粒转染组相比,pcDNA3.1(+)-Us3转染细胞培养上清中TNF-α分泌水平明显升高,但凋亡细胞数量略有下降,证实Us3基因及其编码蛋白在调控巨噬细胞细胞因子分泌活性及其活化细胞凋亡方面发挥一定作用。