目的研究非梗阻性无精症(NOA)睾丸基因表达谱变化,为研究其发病机制奠定基础。方法知情同意下获取正常青年人和NOA患者的睾丸活检标本各3例,采用Q IA GEN RNA提取试剂盒提取总RNA,分别等量混合后制备探针。利用ClonTech公司生产的包含8...目的研究非梗阻性无精症(NOA)睾丸基因表达谱变化,为研究其发病机制奠定基础。方法知情同意下获取正常青年人和NOA患者的睾丸活检标本各3例,采用Q IA GEN RNA提取试剂盒提取总RNA,分别等量混合后制备探针。利用ClonTech公司生产的包含8000个已知基因的人类cDNA基因芯片[Atlas Plastic Human 8K Mi2croarray(Cat.#790521)]筛选差异表达基因。按基因功能分类方法对睾丸组织中差异表达的基因进行归类分析。从基因芯片结果中选择我们感兴趣的基因用RT-PCR、T-A克隆测序方法验证。结果筛选到显著差异表达基因4117个(上调基因1564个,下调基因2553个)。在表达上调的基因中代谢相关基因(11.4%),与基因和蛋白表达相关的基因(34.8%),信号通路相关基因(28.3%),细胞分化相关基因(16.5%),细胞结构和运动相关基因(4.2%),细胞或内环境稳态相关基因(24.9%)。在表达下调的基因中代谢相关基因(13.6%),与基因和蛋白表达相关的基因(31.5%),信号通路相关基因(36.7%),细胞分化相关基因(13.5%),细胞结构和运动相关基因(3.6%),细胞或内环境稳态相关基因(20.1%)。RT-PCR及T-A克隆测序进一步证实TGF-β信号通路中TGFβRⅡ和Smad2基因在NOA患者睾丸组织显著上调。结论NOA患者睾丸组织中基因表达谱发生了明显变化,NOA与多种基因表达变化有关,其中TGF-β信号通路显著上调可能对进一步研究NOA的机制具有重要意义。展开更多
文摘目的研究非梗阻性无精症(NOA)睾丸基因表达谱变化,为研究其发病机制奠定基础。方法知情同意下获取正常青年人和NOA患者的睾丸活检标本各3例,采用Q IA GEN RNA提取试剂盒提取总RNA,分别等量混合后制备探针。利用ClonTech公司生产的包含8000个已知基因的人类cDNA基因芯片[Atlas Plastic Human 8K Mi2croarray(Cat.#790521)]筛选差异表达基因。按基因功能分类方法对睾丸组织中差异表达的基因进行归类分析。从基因芯片结果中选择我们感兴趣的基因用RT-PCR、T-A克隆测序方法验证。结果筛选到显著差异表达基因4117个(上调基因1564个,下调基因2553个)。在表达上调的基因中代谢相关基因(11.4%),与基因和蛋白表达相关的基因(34.8%),信号通路相关基因(28.3%),细胞分化相关基因(16.5%),细胞结构和运动相关基因(4.2%),细胞或内环境稳态相关基因(24.9%)。在表达下调的基因中代谢相关基因(13.6%),与基因和蛋白表达相关的基因(31.5%),信号通路相关基因(36.7%),细胞分化相关基因(13.5%),细胞结构和运动相关基因(3.6%),细胞或内环境稳态相关基因(20.1%)。RT-PCR及T-A克隆测序进一步证实TGF-β信号通路中TGFβRⅡ和Smad2基因在NOA患者睾丸组织显著上调。结论NOA患者睾丸组织中基因表达谱发生了明显变化,NOA与多种基因表达变化有关,其中TGF-β信号通路显著上调可能对进一步研究NOA的机制具有重要意义。