食管癌细胞中沉默Survivin基因对ATG16L1表达的影响

目的探讨食管癌Eca109细胞中沉默生存素(Survivin,SVV)基因的表达对自噬相关蛋白ATG16L1表达的影响。方法使用雷帕霉素(rapamycin,RAPA)在Eca109细胞中诱导建立自噬模型;使用Survivin抑制剂YM155和Survivin-siRNA作用于自噬模型,采用免疫荧光法观察自噬体数量变化,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测Survivin和ATG16L1的mRNA表达水平,Western blot法检测LC3-Ⅱ、p62、Survivin、ATG16L1的蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因检测Survivin与p62的作用关系。结果RAPA诱导Eca109细胞后,自噬标志蛋白LC3-Ⅱ蛋白的表达水平升高,p62蛋白的表达水平降低,同时细胞内自噬体数目增多。在RAPA组中ATG16L1mRNA和蛋白表达水平均升高。在细胞自噬模型中沉默Survivin表达后,Survivin和ATG16L1的mRNA表达水平均降低。过表达Survivin能够显著抑制p62的启动子活性,下调p62的蛋白表达。结论沉默食管癌Eca109细胞中Survivin基因表达可以下调ATG16L1的表达,可能与Survivin靶向抑制p62有关。

食管癌细胞中脂多糖对肿瘤坏死因子α诱导程序性细胞死亡配体1表达的影响

目的探讨在食管鳞癌Eca-109细胞中脂多糖(LPS)通过Jak2/Stat3信号通路对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导程序性细胞死亡配体1(PD-L1)表达的影响及意义。方法2020年5―10月,在TNF-α诱导下,分别使用LPS干预食管鳞癌Eca-109细胞3、6、12、24 h以及不同浓度的LPS干预食管鳞癌Eca-109细胞24 h,应用蛋白质印迹法检测p-Jak2、p-Stat3、PD-L1蛋白表达水平的变化;应用流式细胞技术检测LPS干预对Eca-109细胞凋亡的影响。结果与对照组相比,TNF-α组中p-Jak2蛋白表达(0.79±0.05比0.63±0.11)、p-Stat3蛋白表达(1.48±0.24比0.45±0.08)、PD-L1蛋白表达(0.92±0.15比0.55±0.11)均升高(P<0.05),同时LPS组中凋亡率[(8.20±1.65)%比(4.77±0.15)%]和TNF-α+LPS干预组中凋亡率[(7.63±1.37)%比(4.77±0.15)%]明显升高(P<0.05)。与TNF-α组相比,TNF-α+LPS干预组中p-Jak2蛋白表达(0.46±0.05比0.79±0.05)、p-Stat3蛋白表达(1.10±0.22比1.48±0.24)、PD-L1蛋白表达(0.59±0.08比0.92±0.15)明显降低(P<0.05)。LPS的干预下调p-Jak2、p-Stat3、PD-L1的蛋白表达且呈浓度依赖性。结论LPS通过干预Jak2/Stat3信号通路下调PD-L1的表达水平从而对食管鳞癌Eca-109细胞的免疫逃逸机制进行调控,为进一步探索LPS干预食管癌发生发展的分子机制提供了实验基础。

花粉的现代药理研究和临床应用概述

花粉是有花植物雄性花蕊中一种呈粉末状的雄性生殖细胞,是植物繁衍后代的范围和精华。我国是应用花粉治疗疾病和作为强身保健药物的最早国家之一。早在二于多年前《神农本草经》就有蒲黄和松花粉“主治心腹、邪气、利小便消瘀血,久服轻身益气力,延年”的记载,在《干金方》、《唐本草》、《太平圣惠方》等书中也均可散见。《本草纲目》共系统记载了78种植物花粉用于食疗保健和防病治病。公元847年,唐代李商隐宦途失意,抑郁寡欢,身患黄肿和阳痿等病,诸药无效,后食玉米花粉而愈。故有“标村蜀黍满山岗,穗条迎风散异香,借问他身何处好?无心摇落玉花黄”之诗句。

TNF-α在食管鳞癌细胞中对PD-L1表达的影响

目的探讨TNF-α在食管鳞癌细胞株Eca109中对PD-L1表达的影响以及PKA/CREB在TNF-α调节PD-L1表达中的作用。方法体外培养食管鳞状细胞癌Eca109细胞,实验分为空白对照组、TNF-α组(20 ng/ml TNF-α诱导24 h)和TNF-α+Staurosporine组(先20 ng/ml Staurosporine作用15 min,再加入20 ng/ml TNF-α诱导24 h)。应用qRT-PCR检测PD-L1 mRNA水平,应用免疫荧光染色观察PD-L1的表达情况,应用Western blot检测PD-L1、p-CREB和PKA的蛋白表达水平。结果qRT-PCR、免疫荧光染色和Western blot检测结果显示,与空白对照组比较,TNF-α组中PD-L1 mRNA和蛋白水平的表达升高(P<0.05);与TNF-α组比较,TNF-α+Staurosporine组PD-L1 mRNA表达降低(P<0.05),PD-L1、p-CREB和PKA蛋白表达降低(P<0.05)。结论TNF-α能够促进食管鳞癌细胞株Eca109中PD-L1的表达,TNF-α对PD-L1的调节可能与PKA-CREB有关。

miR-378a-3p靶向PKM2基因对食管鳞癌细胞Eca-109凋亡及能量代谢的影响

目的探讨微小RNA-378a-3p(miR-378a-3p)与PKM2基因的关系,以及miR-378a-3p对食管鳞癌细胞Eca-109凋亡及能量代谢的影响.方法采用Eca-109细胞系,后续实验分为空白对照组、阴性对照组(转染negative control)和实验组(miR-378a-3p基因转染24 h与48 h).利用流式细胞技术检测miR-378a-3p转染后24 h和48 h对Eca-109细胞凋亡的影响;用紫外分光光度法检测miR-378a-3p转染后24 h和48 h对Eca-109细胞能量代谢的影响;用蛋白免疫印迹法(Western blot-ting)检测miR-378a-3p干预后PKM2蛋白水平的变化.结果与空白对照组和阴性对照组相比,实验组miR-378a-3p转染24 h和48 h时PKM2蛋白的表达水平降低(P<0.05),且48 h较24 h时PKM2蛋白的表达水平降低更明显.与空白对照组和阴性对照组相比,实验组转染miR-378a-3p后24 h和48 h,紫外分光光度法检测ATP含量明显降低(P<0.01),代谢减少,且48 h较24 h的ATP产量降低更明显.与空白对照组和阴性对照组相比,实验组miR-378a-3p转染后24 h和48 h Eca-109细胞的凋亡率显著增高(P<0.001),48 h较24 h时细胞凋亡率增高更明显.结论miR-378a-3p通过抑制有氧酵解关键酶PKM2来干预食管癌细胞的能量代谢,进而增加细胞的凋亡.

新疆地区食管癌发生与肿瘤免疫因子表达调控的关系及其意义

目的:探讨新疆地区食管癌发生与肿瘤免疫因子表达调控的关系及其意义。方法:应用流式细胞术检测60例食管癌患者(食管癌组)和60例健康人(正常对照组)血清标本中IL-6、IL-10、IL-2、IL-4、IL-17A、TNF-α和IFN-γ等肿瘤免疫因子的表达水平。根据肿瘤分化程度、侵犯深度、淋巴结转移、是否远处转移等病理分期以及临床分期对60例食管癌患者进行分组,分析肿瘤免疫因子表达水平与食管癌病理、病期的关系。结果:与正常对照组相比,食管癌患者血清中细胞因子IL-6、IL-10、IL-2、IL-4、IL-17A和IFN-γ水平升高,差异有统计学意义(P<0.01),TNF-α水平变化不明显;低分化组食管癌患者血清中IL-10、IL-2、IL-4、IL-17A和TNF-α的水平上升,差异有统计学意义(P<0.05)。当食管癌侵犯黏膜下层及肌层时,患者血清中IL-6的水平降低;Ⅲ~Ⅳ期患者血清IL-6水平高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:新疆地区食管癌患者血清中IL-6、IL-10、IL-2、IL-4、IL-17A、TNF-α、IFN-γ的表达水平与食管癌的发生密切相关,检测其表达水平对食管癌的诊断、进展及预后有重要参考价值。

THP-1来源的M1型巨噬细胞对食管鳞癌细胞的凋亡、增殖与迁移作用

THP-1细胞经LPS和IFN-γ活化诱导为经典激活的M1型巨噬细胞。M1型巨噬细胞在肿瘤发生的初期发挥着重要的作用,能够识别并清除肿瘤细胞,但对食管鳞癌细胞Eca109的具体调节作用尚不清楚。本研究利用THP-1细胞来源的M1型巨噬细胞与食管鳞癌细胞Eca109共培养的模型;用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测TNF-α和IL-1β mRNA的表达;用流式细胞技术、Transwell实验检测M1型巨噬细胞与食管鳞癌细胞Eca109共培养24 h后对Eca109细胞凋亡、增殖与迁移的影响。结果显示,诱导后的THP-1细胞完全贴壁并有伪足出现;与M0细胞相比,诱导的M1型巨噬细胞相关细胞因子TNF-α、IL-1β的mRNA表达均显著增高(P<0.01);与M1型巨噬细胞共培养后可以促进食管鳞癌细胞的凋亡(P<0.01)、抑制食管鳞癌细胞的增殖(P<0.01)与迁移(P<0.001)。本研究结果提示,THP-1来源的M1型巨噬细胞与食管鳞癌细胞Eca109共培养可以促进食管鳞癌细胞Eca109的凋亡,抑制其增殖与迁移。

食管癌细胞中Survivin对Smad3及PD-L1表达调控的影响

目的探讨食管鳞癌Eca109细胞中,经炎性因子白介素6(interleukin-6,IL-6)诱导激活Jak2/Stat3信号通路促使程序性细胞死亡配体1(programmed cell death ligand1,PD-L1)表达升高的调控过程中,生存素(Survivin)对Smad3及PD-L1的调控作用。方法选用IL-6诱导食管鳞癌Eca109细胞6、12、24 h,激活Jak2/Stat3信号通路,再使用Jak2/Stat3信号通路抑制剂AG490干预24 h,应用免疫印迹试验(Western blot)检测p-Jak2、Jak2、p-Stat3、Stat3、Survivin、p-Smad3、Smad3和PD-L1蛋白表达量的变化;在IL-6诱导下,使用Survivin抑制剂YM155干预Eca109细胞24 h,应用Western blot方法和流式细胞术分别检测Survivin、p-Smad3、Smad3和PD-L1蛋白表达量的变化以及不同分组细胞凋亡的情况。结果使用IL-6诱导Eca109细胞6、12、24 h后,Western blot检测结果显示,p-Jak2、Jak2、p-Stat3、Stat3、Survivin、p-Smad3、Smad3和PD-L1的蛋白表达量升高,以12、24 h最为明显(均P<0.05);使用抑制剂AG490干预24 h后,p-Jak2、Jak2、p-Stat3、Stat3、Survivin、pSmad3、Smad3和PD-L1的蛋白表达水平均下调(均P<0.01);抑制剂YM155在抑制Survivin表达的同时降低了p-Smad3、Smad3和PD-L1的表达(均P<0.05);使用YM155干预后,促进食管鳞癌Eca109细胞的凋亡(P<0.05)。结论在食管鳞癌Eca109细胞中,IL-6激活Jak2/Stat3信号通路后,存在Survivin对Smad3和PD-L1的正向调控关系。提示Survivin可能通过参与调节肿瘤的免疫逃逸,从而影响食管癌的发生发展,为靶向PD-L1的免疫治疗提供可靠的实验依据以及理论基础。