荧光原位杂交技术在未培养羊水细胞产前诊断中的应用研究

目的:探讨运用荧光原位杂交(FISH)技术对未培养羊水细胞的染色体非整倍体进行快速诊断的临床应用价值。方法:对符合产前诊断要求的孕妇于孕18～24周抽取羊水,用13、21、18及X、Y号染色体探针对其未培养羊水细胞进行诊断,并与核型分析结果比较。结果:125例标本的核型分析中,成功培养123例,其中117例为正常核型,6例为异常核型,异常核型为21-三体2例,9号染色体臂间倒位3例,6号和7号染色体平衡易位1例;与核型分析相比,FISH只检测出2例非整倍体核型,其余染色体结构异常未能检出,FISH检测时间为24～48小时,较传统核型分析时间2～3周大大缩短,且同核型结果一致,特异性100%。结论:荧光原位杂交技术具有简便、准确等优点,可快速地辅助核型分析,缓解患者及家属情绪,有临床推广价值。

人乳头瘤病毒HPV16整合与宫颈病变程度的研究

目的研究HPV 16整合与宫颈病变程度的关系,探讨反应宫颈病变的指标。方法收集感染HPV16的标本,慢性宫颈炎/CINⅠ25例(慢性宫颈炎21例,CINⅠ4例),CINⅡ22例,CINⅢ23例,宫颈癌28例,对不同HPV16质粒浓度的E2和E7基因进行定量PCR分析,制作标准曲线,得出游离型和混合型HPV16 E2/E7的临界值,并对样本进行扩增,根据临界值,分析HPV16整合在不同宫颈病变的分布情况。结果标准曲线制作良好,相关系数均在0.97以上;不同HPV16质粒浓度的E2/E7比值显示,0.77为游离型和混合型HPV16的临界值;根据该临界值,发现慢性宫颈炎/CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌的HPV16的整合率分别为4.00%、9.09%、13.04%、10.71%,统计显示HPV16整合率在不同宫颈病变中没有统计学差异(P>0.05),因混合型HPV16也存在病毒整合,把整合型和混合型HPV16合并,得出HPV16总整合率在慢性宫颈炎/CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌分别为48.00%、59.09%、65.22%、75.00%,分析显示HPV16总整合率在各宫颈病变程度间亦不显著(P>0.05),HPV16总整合率在宫颈病变的分布亦无差异。结论 HPV16整合与宫颈病变程度的关系不明显,病毒整合是宫颈病变的早期事件,不能反应宫颈病变程度的变化。

HPV16病毒负荷量与宫颈病变及物理状态的研究

目的研究HPV16病毒负荷量与宫颈病变及物理状态的关系,探讨反应宫颈病变的指标。方法收集感染HPV16患者的宫颈病变标本,对不同PML2d HPV-16质粒浓度的E2和E7基因进行定量PCR扩增,制作标准曲线,得出HPV16物理状态的临界值,描述标本HPV16的病毒负荷量,并根据临界值,分析HPV16病毒负荷量与宫颈病变及物理状态的关系。结果不同宫颈病变的HPV16中位数病毒负荷量随宫颈病变的级别升高而增加,但病毒负荷量差异无统计学意义(P=0.22),整合型HPV16在低级别宫颈病变也有较高分布,HPV16物理状态在不同宫颈的分布无统计学意义(P=0.55),不同物理状态间的病毒负荷量差异亦不显著(P=0.34)。结论 HPV16病毒负荷量与宫颈病变关系不明显,病毒整合是宫颈病变的早期事件,高的病毒负荷量不会导致整合增加。

TSA诱导MCF-7细胞毒性过程中转录调节的实验研究

目的:研究制滴菌素(trichostatin A,TSA)诱导乳腺癌细胞株MCF-7的细胞毒性作用及基于该效应可能的转录调节基础。方法:采用MTT法观察不同浓度TSA对MCF-7细胞的抑制作用,Annexin-V/PI双染观察该梯度下的细胞凋亡情况,细胞周期分析检测不同时间段的周期变化,RT-PCR分析TSA处理前后ERα、myc-c、P21、cyclin-D及Bcl-2基因的转录表达情况。结果:TSA对MCF-7细胞的抑制作用具有时间和剂量的依赖性,Annexin-V/PI双染分析显示在TSA处理48h后,随其浓度的增加,细胞的凋亡率依次升高,0.5"mol/L TSA作用,细胞凋亡率为33.82%;细胞周期分析检测显示在0.5"mol/L TSA的作用下,MCF-7细胞出现周期阻滞,但未检测出细胞凋亡。RT-PCR分析显示除P21基因上调外,ERα、myc-c、cyclin-D及Bcl-2均下调,同朝着增殖抑制、周期阻滞及凋亡的方向进展。结论:TSA能诱导MCF-7细胞的细胞毒性作用,其机制可能与转录调节有关。

子宫内膜异位症Treg细胞上调的机制研究

目的研究子宫内膜异位症Treg细胞上调的原因。方法选41例子宫内膜异位症患者,其中16例术前经过GnRH-a治疗的为治疗组,另25例术前未经治疗的为未治疗组,同时选25例子宫肌瘤患者为对照组,通过采血、腹腔液取样,用化学发光、流式细胞和ELISA方法检查化验,观察治疗组、未治疗组和对照组的基础雌二醇水平、腹腔液Treg细胞百分比及与Treg细胞诱导有关的IL-10、TGF-β、PGE-2炎症因子水平。结果经GnRH-a治疗后,治疗组的基础雌二醇下降显著,相比于治疗组治疗前、未治疗组及对照组,差异有统计学意义(P=0.00)。未治疗组Treg细胞百分比明显升高,相比于治疗组治疗后、对照组,差异有统计学意义(P<0.01);与Treg细胞诱导有关的TGF-β、PGE-2在未治疗组显著增高,相比于对照组、治疗组治疗后,差异有统计学意义(P=0.00)。IL-10在治疗组、未治疗组、对照组中的差异无统计学意义(P>0.05)。结论子宫内膜异位症经GnRH-a治疗后,Treg细胞及TGF-β、PGE-2炎症因子水平下降,提示患者腹腔存在炎症,Treg细胞的上调可能与其诱导的炎症因子的升高有关。

永生背景下肿瘤发生的探讨

肿瘤是一种常见病、多发病。在欧美国家,肿瘤的死亡率仅次于心血管系统疾病而居第二位。我国随着人口老龄化的进程及环境污染,肿瘤的危害日益增加,对肿瘤的防治和研究也越来越引起重视。但是关于对肿瘤的认识,如果从肿瘤本身去研究,探讨是否有基因突变、转录活性调节、

临床路径在计划性剖宫产中的应用

目的:探讨卫生部试行的临床路径管理在我院计划性剖宫产中的应用效果。方法:选取185例已实施临床路径管理的计划性剖宫产孕妇(路径组)和96例未实施临床路径管理的计划性剖宫产孕妇(对照组),对两组孕妇的住院天数、各种住院费用、各项指标的变异系数和构成比,以及患者的满意度和术后并发症等指标进行综合比较分析。结果:路径组住院天数比对照组缩短,差异有高度统计学意义(P=0.00),但住院总费用两组比较,差异无统计学意义(P=0.19);对于住院总费用的构成变化,路径组药费下降,但治疗费增加,两组间的药费和治疗费比较,差异均有统计学意义(P<0.05);路径组变异系数波动总体较对照组小,患者满意度有所提高,但术后并发症率无明显改变。结论:临床路径应用于我院计划性剖宫产起到了规范医疗行为的作用。

高危型人乳头瘤病毒负荷量与宫颈病变的关系研究

目的:研究高危型人乳头瘤病毒(HPV)病毒负荷量与不同级别宫颈病变的关系。方法:收集慢性宫颈炎102例,CINⅠ104例,CINⅡ120例,CINⅢ109例,宫颈癌94例,HC-Ⅱ法检测高危型HPV病毒负荷量。结果:慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌高危型HPV感染率分别为41.18%、82.69%、89.17%、96.33%、91.49%,负荷量中位数分别为0.77 pg/ml、18.83 pg/ml、102.07 pg/ml、254.16 pg/ml、213.59 pg/ml,不同级别宫颈病变间的高危型HPV感染率及负荷量差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。6层高危型HPV病毒负荷量分层间不同宫颈病变程度比较,差异有统计学意义(P<0.01),但当剔除病毒负荷量<5 pg/ml的病例时,差异则无统计学意义(P>0.05)。结论:高危型HPV病毒负荷量与宫颈病变程度的关系不明显。

PRLR基因反义RNA对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖的影响

目的:构建表达人催乳素受体基因(prolactin receptor,PRLR)反义RNA的真核表达质粒,观察其对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。方法:应用基因重组技术,将人PRLR的cDNA反向克隆至pcDAN3.1(-)载体中,构建PRLR反义RNA真核表达质粒,将其转染入人乳腺癌细胞系MCF-7中,经G418筛选得到稳定细胞克隆,利用荧光定量PCR检测转染后细胞PRLR基因表达量的变化,应用MTT法、平板克隆形成实验及流式细胞术评价转染后细胞的增殖情况。结果:成功构建出能够表达PRLR反义RNA的真核表达质粒,转染该质粒后,MCF-7中PRLR基因表达量下降,细胞生长变慢,克隆形成能力降低,G1期细胞增加,S期细胞减少。结论:PRLR反义RNA能够下调该基因的表达,并且抑制乳腺癌细胞的增殖,证明反义基因干预治疗的可能性,为乳腺癌基因治疗的进一步研究提供了必要的依据。

原发性少精、无精子症患者Y染色体微缺失分子检测的应用研究

目的:探讨Y染色体部分生精基因缺失与原发性少精症和无精症的关系及其分布规律,为评价这部分患者是否可行单精子卵细胞浆注射(IntracytoplasmicSpermInjection,ICSI)及ICSI成功后是否需要行产前诊断提供实验依据。方法:应用聚合酶链反应技术选取Y染色体上AZFa、AZFb、AZFc区6个STS位点进行多重PCR分子检测。对98例原发性少精、无精症患者及10例正常生育男性进行Y染色体微缺失的分子检测。结果:98例原发性少精、无精症患者有缺失者7例,缺失率为7.14%(7/98),其中无精子症中缺失率为9.43%(5/53),少精子症中缺失率为4.44%(2/45)。结论:①Y染色体微缺失与原发性少精症和无精症有关;②Y染色体微缺失的缺失位点分布与原发性少精症和无精症有关;③由于Y染色体微缺失有可能通过垂直遗传给男性后代,因此对原发性少精症和无精症患者,在进行人工授精或胞浆内单精子注射前,进行相关基因检测,对防止基因缺失传给下一代、提高优生率有着重要的临床意义。