SIRT1-shRNA慢病毒表达载体转染对A549细胞生物学行为的影响

目的探讨SIRT1-shRNA慢病毒表达载体转染对人非小细胞肺癌A549细胞SIRT1基因表达、黏附能力、迁移能力及E-cadherin、β-catenin mRNA和蛋白表达量的影响。方法构建SIRT1-shRNA慢病毒表达载体,并用其转染A549细胞。对照组转染277空载体,观察组转染277-i SIRT1。用RT-PCR法检测两组细胞SIRT1 mRNA表达,用细胞黏附实验检测两组细胞黏附能力,划痕实验检测细胞迁移能力,RT-PCR法检测细胞内E-cadherin、β-catenin mRNA表达,Western blot法检测细胞内E-cadherin、β-catenin蛋白表达。结果观察组、对照组A549细胞SIRT1 mRNA分别为0.48±0.26、1.00±0.00(P<0.05),黏附细胞数分别为(196.6±9.8)、(125.6±9.8)个(P<0.05),细胞相对迁移率分别为65%±2%、100%±0(P<0.05),E-cadherin蛋白表达量分别为1.27±0.16、1.00±0.00(P<0.05),β-catenin蛋白表达量分别为1.24±0.13、1.00±0.00(P<0.05)。结论 SIRT1-shRNA慢病毒表达载体可明显下调A549细胞SIRT1表达,提高其下游基因E-cadherin、β-catenin mRNA和蛋白表达量,增强细胞黏附能力,降低细胞迁移能力。

微生物代谢组学的样品前处理

微生物代谢组学是指全面分析(定性和定量)细胞生长或生产周期某一时刻细胞内和细胞周围的所有低分子量代谢物。微生物代谢组学研究需要可靠和重现地分析细胞内较宽动力学浓度范围(nmol^mmol)、化学功能各异的代谢产物,因此,需要对从生物量培养、灭活和代谢产物的提取到代谢物的定量分析这整个实验过程提出耐用、可重现和可靠的实验方案。本文介绍了灭活过程中细胞内代谢产物泄漏的处理方法,较为详细地论述了通过灭活草案捕获代谢反应活性方法和代谢物提取方法的优化,并对微生物代谢组学样品前处理的目前发展趋势提出初步见解。

流式细胞术应用于医学细胞生物学实验教学改革和探索

医学细胞生物学在基础医学发展中起到举足轻重的作用。流式细胞术近年在生物医学研究中取得突破性进展。而医学细胞生物学实验作为医科院校开设的重要基础实验课程之一,针对医科院校培养方针和实际需求,将流式细胞术引入实验教学实践中,更新教学内容及深化教学改革,促使学生掌握流式细胞术的实际应用,开拓科研思维,培养具有综合素养的医学人才。