加速凋亡引入肿瘤的进程

细胞凋亡被引入肿瘤研究的实践，使人们走出对细胞无限增殖的困惑，开始关注增殖与凋亡的平衡，从而找出一条攻克肿瘤的新途径，这是认识的一次飞跃。而进一步发展凋亡理论，确切地完全阐明凋亡机制，建立起理性的肿瘤凋亡基因疗法，用理论指导实践，将是认识的一次更大飞跃。鉴于这一过程的艰巨性和复杂性，只有基础医学理论和肿瘤临床密切合作、合力攻关，才能加速其进程，攻克这一危害人类的凶险顽症。

转化细胞内质网分布—可能的蛋白出胞新模式

目的 :探讨细胞诱发转化中内质网的生物学特性。方法 :利用改进的整装培养细胞内质网技术对转化状态下的细胞内质网及固定细胞内质网超微结构进行观察。结果 :显示细胞的内质网由正常的网状转变为链锁状 ,发育不良 ,且在伪足及细胞边缘可见内质网结构及其独支盲端。结论

人源MAP3K7克隆及其GST融合蛋白的表达和鉴定

目的构建MAP3K7蛋白GST的融合表达载体,高效表达和纯化GST-MAP3K7融合蛋白,为GST Pulldown实验做准备。方法通过PCR扩增MAP3K7全长编码基因,经双酶切定向克隆至表达载体pGEX-5X-1,构建原核重组表达载体pGEX-5X-1-MAP3K7,通过酶切和测序鉴定后,导入E.coli BL21宿主菌中,IPTG诱导表达融合蛋白,经谷胱甘肽琼脂糖凝胶纯化表达产物,SDS-PAGE和Western blot分析鉴定。结果经测序鉴定成功构建了原核重组表达载体pGEX-5X-1-MAP3K7,诱导后的GST融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot检测到分子量正确的特异性蛋白条带,经纯化后,得到了高纯度的融合蛋白。结论成功构建了MAP3K7全长的GST重组表达载体,确定了GST-MAP3K7融合蛋白表达的最佳条件,诱导成功并得到了高纯度的融合蛋白,为进一步研究MAP3K7蛋白的生物学功能奠定了基础。

hTFF3基因真核表达载体构建及表达鉴定

目的克隆人肠三叶因子基因hTFF3,构建重组真核表达载体pEGFP-C1-TFF3,并在真核细胞中表达。方法应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从真核细胞中扩增得到人TFF3的全长序列,克隆至表达增强型绿色荧光蛋白载体中,经酶切、PCR鉴定后测序证实克隆成功。将重组载体转至真核细胞,荧光显微镜观察下转染效率,同时采用RT-PCR、Western blot技术检测外源基因TFF3的表达。结果成功将hTFF3基因克隆到真核表达载体中,酶切片段与预期大小一致(200 bp)。在荧光显微镜下观察转染后的细胞可见明显的绿色荧光,RT-PCR及Western blot结果表明:转染后的细胞中TFF3在转录和翻译水平的表达均有明显提高。结论成功构建了真核表达载体pEGFP-C1-TFF3,并在真核细胞中显著表达,为进一步研究TFF3因子的生物学功能奠定了基础。

关于燃气工程施工及运营安全管理要点探究

随着社会的发展,燃气工程覆盖的面积正在逐渐扩大,燃气也是保障人民正常生产生活的清洁能源之一,所以,燃气工程管理也逐渐引起了人们的重视。燃气工程管理涉及施工以及运营安全管理,燃气工程的施工和运营具有高风险性质,因此需要建立专业的安全管理体系,从而保证工程的安全和稳定运行。本文结合实际情况,重点探讨了燃气工程施工及运营安全管理的要点。

高GC hTwist融合蛋白载体构建及其表达条件优化

目的构建高GC基因Twist融合蛋白表达载体;高效表达并纯化GST/TWIST融合蛋白,为GST-Pulldown等实验做准备。从而进一步研究其生物学功能。方法以胃癌细胞系SGM7901 cDNA为模板,依据高GC含量基因Twist分子结构特点和高GC含量基因引物设计策略,合成PCR引物。本实验通过分析各种DNA聚合酶不同扩增效率及特异性,选择适合高GC基因扩增的DNA聚合酶,优化反应体系的离子强度,并且结合改良降落PCR等综合策略的实施,比较不同策略下高GC含量基因Twist PCR产物的特异性及效率,尝试高效扩增特异的高GC含量Twist全长编码基因,通过Bam HI和Xho I双酶切位点将Twist全长定向插入pGEX-5X-1载体中,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-Twist,并转化E.coli DH5α,筛选富含GC的Twist阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测序正确后,转化E.coli BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,经谷胱甘肽琼脂糖凝胶纯化表达产物,SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果通过Platinum pfx DNA聚合酶配合PCRx加强缓冲液的使用及改良降落PCR策略的实施,独立可重复实验证实:我们获得了高效特异的高GC Twist全长编码基因,成功构建原核表达质粒pGEX-5X-1-Twist。诱导表达的GST融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定,检测到分子量正确的特异性蛋白条带,经纯化,得到高纯度的融合蛋白。结论上述策略的实施可以成功完成高GC Twist原核表达载体的构建,并确定GST/TWIST融合蛋白表达的最适条件,获得了高纯度融合蛋白,为进一步研究TWIST蛋白的生物学功能奠定基础。

学生因你而不同——听孙小红老师《以畜牧业为主的农业地域类型》教学启示

今年3月看了孙小红老师的网络直播课堂教学，被孙老师的魅力所吸引。孙老师是一位智者型的老师，充分整合了课堂教学内容，让学生享受地理学科之美。本节课的教学，学生的学习能力在课堂上得以培养生成，在探索平时的课堂教学实践中受益匪浅。

hβ-arrestin1重组蛋白不同亚型筛选及互作鉴定

目的构建GST/β-arrestin1融合蛋白表达载体,筛选其不同亚型重组子,并诱导表达、纯化蛋白,初步进行蛋白亚型互作比较,为进一步功能研究提供实验基础。方法提取人源细胞的mRNA,反转录为cDNA。用PCR法扩增hβ-arrestin1全长编码基因,通过SalI和NotI酶切位点将hβ-arrestin1全长定向插入pGEX-5X-1中,构建原核表达载体pGEX-5X-1-β-arrestin1,并通过BglⅡ单酶切筛选A、B亚型,然后将重组质粒转入E.coli BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,用谷胱甘肽-琼脂糖珠亲和纯化表达的GST/β-arrestin1A、B,SDS-PAGE鉴定,互作实验比较亚型的结合能力。结果酶切及测序结果证明,成功构建了β-arrestin1A、B原核表达载体,并通过SDS-PAGE证实:经IPTG诱导表达及亲和纯化,从转化重组质粒的BL21菌株中获得了融合蛋白GST/β-arrestin1A、B亚型,通过GST Pulldown初步比较了重组β-arrestin1A、B蛋白亚型的结合能力。结论成功构建pGEX-5X-1-β-arrestin1A、B原核表达载体并确定了融合蛋白的诱导表达及纯化方法,且互作实验显示β-arrestin1A有较强的结合能力,为进一步研究β-arrestin1的生物学功能奠定了基础。

hβ-arrestin2基因重组质粒构建及蛋白表达和定位

目的:构建p EGFP-C1-β-arrestin2融合蛋白表达载体,并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法:以p GEX-5X-1-β-arrestin2为模板,PCR法扩增hβ-arrestin2编码序列,亚克隆至p EGFP-C1中,p EGFP-C1-β-arrestin2经双酶切初步鉴定再送测序公司检测正确后瞬时转染人胚肾细胞HEK293,Western blot检测融合蛋白表达。激光扫描共聚焦显微镜观察融合蛋白在HEK293细胞中的分布。结果:hβ-arrestin2编码序列被成功克隆至p EGFP-C1中,Western blot检测到融合蛋白表达,分子量约为77k Da,p EGFP-C1-β-arrestin2定位于HEK293细胞的细胞质中。结论:成功构建hβ-arrestin2基因真核表达载体,证实了融合蛋白定位在HEK293的细胞质中。

Ser176/180磷酸化位点突变的IKKα真核表达载体的构建及鉴定

目的构建Ser176/180磷酸化位点突变的核因子κB抑制剂激酶α(IKKα)真核表达载体。方法通过PCR获得带有IKKαSer176/180突变位点和无义突变KpnⅠ位点的片段,以及带有无义突变KpnⅠ位点的片段,两片段分别经过HindⅢ/KpnⅠ以及KpnⅠ/EcoRⅠ双酶切,载体pEGFP经HindⅢ/EcoRⅠ双酶切后连接。共聚焦显微镜技术观察激活型/死型p EGFPIKKαKA/KD融合蛋白在真核细胞中的定位及其对P65核质易位的影响。Western blot法检测重组蛋白表达。结果测序显示载体构建成功。pEGFP-IKKαKA分布在细胞核和细胞质,并能使P65发生核穿梭。pEGFP-IKKαKD主要分布在细胞质,不能使P65发生核质易位。Western blot结果显示出融合蛋白的特异性条带。结论成功构建IKKα磷酸化位点激活型及死型的真核表达载体,在真核细胞中可有效表达。pEGFP-IKKαKA/KD在真核细胞中蛋白表达呈现不同定位,对下游P65的核质穿梭调控发挥不同效应。

社区教育现代化的理念及实践转向研究

社区教育的发展经历了从早期作为学校教育的补充到如今服务于社会现代化建设的历程变化,成为教育体系不可或缺的重要组成部分。为助力实现教育现代化的目标,社区教育现代化需更加体现公平性、均衡性、优质性的价值取向。针对当前社区教育发展中存在的不公平、不均衡、不优质等问题,在理念层面,社区教育应回归于“以人为本”和“促进社会发展”,并以可持续发展为先导。在实践层面,应做好顶层设计,为实现社区教育现代化提供制度保障;建立科学的管理机制,确保社区教育现代化有章可循;大力融通资源,实现社区教育均衡发展;完善课程建设,提升社区教育质量;着力提升师资队伍能力,打造优质社区教育团队;重点关注特殊群体,提升教育对象普惠性。

中国农业对外合作百强企业的发展情况及策略分析

本文从分析中国农业对外合作百强企业的主要特征入手,指出了企业目前面临的外部投资不确定性增多、农业对外合作政策体系亟须完善、企业内生动力亟须加强等挑战。针对上述问题,本文提出了加强顶层设计、加大政策支持、培育企业竞争力等若干建议,旨在为中国农业企业对外投资的健康发展提供参考。

信息化背景下老年教育课堂教学模式与教学方法的探究——以上海市松江区为例

随着中国老龄人口的迅速增加,老年教育的需求不断加大。在老年教育资源日益紧缺、信息技术迅猛发展的背景下,呼唤老年教育课堂教学模式的转变。老年学校应加强创设软硬件环境,丰富网络学习资源,营造良好的学习氛围;教师应积极转变角色,创新运用各种方法来引导和培养学员的数字化学习意识、兴趣和能力,为老年教育课堂教学的理论发展及实践探索提供有益思路。

新媒体时代党员教育模式的创新与思考——以12371共产党员手机报为例

新媒体时代的到来,给党员教育工作带来了前所未有的挑战。作为一张"红色手机报",12371共产党员手机报创新传播理念和传播方式,开启了一种"普照模式"的党员教育,有效克服了新形势下党员队伍频繁流动、大量党员由单位人转变为社会人等难题,成为传统党员教育模式的有益补充。

聚焦社会组织党建工作难题(二) 党务工作谁来抓

做好社会组织党建工作,离不开一支高素质的党建工作骨干力量。然而,党建工作没人抓、不愿抓、不会抓的现象,在社会组织中不同程度存在,党务工作者数量不足、力量不强的问题非常突出。

中国农业文化外交走进世界粮食计划署

意大利罗马时间2019年11月18日晚间,中国常驻联合国粮农机构代表处(简称粮代处)与联合国世界粮食计划署联合举办南南合作边会,庆祝双方在南南合作及人道主义援助领域卓有成效的友好合作。中国常驻联合国粮农机构代表牛盾大使、世界粮食计划署执行干事David Beasley出席活动并发表致辞。

讲好舆论场中的组织人事故事

习近平总书记在全国宣传思想工作会议上指出,要讲好中国故事,传播好中国声音。在全面从严治党新常态下,组织人事工作由于政治性、政策性强,专业性、敏感度高,群众关切、社会关注,不可避免地成为舆论场中的焦点。作为组织人事领域的专业媒体,如何讲好组织人事故事,正确引导舆论,占领舆论场的制空权,无疑是一项值得研究的重要课题。

聚焦社会组织党建工作难题(一) 党员在社会组织咋“安家”

近年来,我国社会组织发展迅速,仅在民政部门登记的社会组织,就从1988年的4446个发展到2014年的60.6万个,增长130多倍。种类多、领域广的社会组织,广泛参与社会治理,已成为社会主义现代化建设的重要力量、党的工作和群众工作的重要阵地。蓬勃发展的同时,新问题随之而来。如何引领社会组织正确发展方向？如何激发社会组织活力？如何促进社会组织在国家治理体系和治理能力现代化进程中发挥更大作用？答案聚焦一点：坚持党的领导、加强党建工作。

聚焦社会组织党建工作难题(三) 党组织活动怎么搞

＂三会一课＂等组织生活,是基层党组织活动的基本内容和政治属性的重要体现。对于知识分子云集的社会组织来说,规范、常态、有效开展党组织活动,更是引领发展方向、团结凝聚群众的重要载体。党内生活贵在经常、重在认真。然而,在社会组织领域,组织活动难、发挥作用难的问题却非常突出。组织活动内容方式大多沿袭机关、非公等领域的传统模式,严重缺乏吸引力。

这个社区的党员学习日12年雷打不动,靠什么?

每月13日，河南省安阳市普通党员肖书斌夫妻俩都会起个大早，转两趟公交车，花上近两小时，回到曾经居住的殷都区铁西路街道文源社区，