胞外酸化对大鼠关节软骨细胞焦亡的影响及可能机制

目的观察胞外酸化对大鼠关节软骨细胞焦亡的影响,研究该过程中可能机制。方法利用酶消化法获得原代大鼠关节软骨细胞。软骨细胞分为不同pH处理组(pH7.4、pH 7.0、pH 6.5和pH 6.0)以及pH6.0酸化不同时间组(0、6、12、24、48 h),经ROS还原剂NAC预处理的酸化组和正常组,Real-time PCR和Western blot观察各组促炎细胞因子IL-1β、IL-18和炎症小体组成成分ASC、NLRP3、caspase-1基因和蛋白的表达情况,ELISA检测各组细胞培养基中的IL-1β、IL-18含量,AO/EB染色和LDH细胞毒性检测试剂盒分析细胞的死亡情况,ROS测定试剂盒观察细胞内ROS荧光强弱。结果与pH 7.4组比较,酸化组的促炎细胞因子IL-1β、IL-18和炎症小体组成成分ASC、NLRP3、caspase-1基因和蛋白的表达明显增加,荧光显微镜观察到ROS荧光明显增强,AO/EB染色和LDH检测实验发现酸化可以诱导软骨细胞死亡,且pH 6.0酸化处理组效果最明显;ROS还原剂NAC预处理可以明显下调IL-1β、IL-18、ASC、NLRP3、caspase-1基因和蛋白的表达,并且明显减弱软骨细胞内ROS荧光,同时明显下调细胞死亡率。结论胞外酸化可能通过上调细胞内ROS的含量,促使软骨细胞发生焦亡。

不同方式注入Ta对Cr4Mo4V和Cr12MoV抗点蚀性能的影响

研究了用不同方式注入Ta 对Cr4Mo4V和Cr12MoV抗点蚀性能的影响。注入方式包括直接离子注入、离子束混合和离子束辅助沉积。阳极极化行为表明不同方式注入都使两种材料在0.1MNaCl 醋酸缓冲溶液(pH=5.9)中的钝化电流密度降低了一个数量级,并在大范围钝化区保持低电流钝化。试验亦表明所有注入方式都显著地提高了两种基材的钝化和抗点蚀性,而其中IBAD方式最为有效。用AES和XPS分析了注入原子的分布和化学成分,并讨论分析了提高耐蚀性的机理。

荧光共振能量转移(FRET)体系的构建及其验证

目的构建携带FRET体系(YFP-CFP对)的一组原核表达工程质粒,在大肠杆菌(E. coli)中高效表达后,验证该体系FRET信号作为细胞内监测蛋白相互作用指标的可行性。方法分别构建N端、C端以及两端分别编码YFP和(或) CFP的6个原核表达工程质粒:pNYFP、pCYFP、pNCFP、pCCFP、pYFP-CFP、pCFP-YFP。设计YFP-CFP和CFP-YFP作为阳性对照,而等量的YFP与CFP混合的体系(YFP+CFP)作为阴性对照。将过表达的工程蛋白通过镍柱、分子筛层析柱进行初步纯化后使用酶标仪检测相同摩尔浓度纯化蛋白的FRET信号。在此基础上,进一步用酶标仪检测表达工程蛋白的菌液中的FRET信号。结果通过测序验证,成功构建了6个原核表达的工程质粒。酶标仪检测的结果显示在体外纯化蛋白条件和菌液条件下均可产生明确的FRET信号。结论成功构建了FRET体系的原核表达工程质粒,不仅验证了蛋白条件下的可行性,而且验证了菌液条件下的可行性,为在活细胞条件下对蛋白-蛋白相互作用进行实时的动态研究,提供一个非常便利的实验方法。