响应面法优化止泻木子总生物碱的提取工艺

本文对止泻木种子中总生物碱的提取工艺进行优化。在单因素实验的基础上,通过四因素三水平进行响应面设计实验,以总生物碱得率为响应值进行响应面分析,优化总生物碱的提取工艺参数。结果表明各因素对止泻木子中总生物碱提取得率的影响顺序依次为:提取温度>乙醇浓度>提取时间>料液比。止泻木子中生物碱的最佳提取工艺为乙醇浓度85%、提取时间3 h、料液比1∶10、提取温度80℃。此条件下,止泻木子中总生物碱的含量为(23.8±0.12)mg/g。此方法可靠,提取率高,适于止泻木中的总生物碱提取。

低频率低强度电磁场对体外培养大鼠颅骨成骨细胞成熟和矿化的影响

目的:比较研究50 Hz 1.8 mT正弦电磁场(SEMF)和50 Hz0.6 mT脉冲电磁场(PEMF)对大鼠颅骨成骨细胞成熟和矿化的影响。方法:原代培养大鼠颅骨成骨细胞,传代后随机分为空白对照组、SEMF组和PEMF组。SEMF组和PEMF组每天接受电磁场处理一次,每次90 min。电磁场处理2 d时,采用蛋白质印迹法和实时定量RT-PCR检测Ⅰ型胶原(Collagen-1)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)、Osterix(OSX)和Runt相关转录因子2(Runx-2)的蛋白和基因表达;电磁场处理第6天和第9天时,采用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测ALP活性;电磁场处理第10天时采用偶氮偶合染色检测ALP活性;电磁场处理第12天时,以茜素红染色观察钙化结节形成情况并作定量分析。结果:与空白对照组比较,SEMF组和PEMF组的Collagen-1、BMP-2、OSX、Runx-2蛋白和基因表达水平均显著升高(P<0.01或P<0.05),且Collagen-1、BMP-2在PEMF组中的mRNA表达量显著高于SEMF组(均P<0.05)。电磁场处理第6天时,PEMF组ALP活性显著高于空白对照组(P<0.05),SEMF组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);第9天时,PEMF组和SEMF组ALP活性均显著高于空白对照组(均P<0.01),而PEMF组和SEMF组之间差异无统计学意义(P>0.05)。PEMF组和SEMF组偶氮偶合染色面积均大于空白对照组(均P<0.01),且PEMF组染色面积大于SEMF组(P<0.05)。茜素红染色结果显示,PEMF组和SEMF组钙化结节染色面积显著大于空白对照组(均P<0.01),且PEMF组钙化结节染色面积大于SEMF组(P<0.01)。结论:50 Hz 1.8 mT SEMF和50 Hz 0.6 mT PEMF均能促进大鼠颅骨成骨细胞成熟和矿化,其中PEMF效果更为明显。

不同类型低频电磁场抵抗失重引起的骨流失

目的研究和比较50 Hz 0. 6 m T低频脉冲电磁场(PEMFs)和50 Hz 1. 8 m T正弦交变电磁场(SEMFs)防止尾吊大鼠骨量下降的效果,为失重引起的骨流失防治提供理论参考和科学依据。方法采用尾吊模型大鼠在地面模拟微重力,将40只SD大鼠随机分为对照组、后肢悬吊(HLS)组、HLS+PEMFs组和HLS+SEMFs组4组,每组10只。HLS+PEMFs组和HLS+SEMFs组分别采用50 Hz 0. 6 m T的PEMFs和50 Hz 1. 8 m T的SEMFs两种电磁场进行治疗,每天干预90 min,4周后处死大鼠。采用双能X射线吸收测定法检测大鼠股骨和椎骨骨密度(BMD),AG-IS型生物力学仪检测生物力学强度,ELISA法检测血清骨钙素(OC)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b (Tracp 5b)浓度、甲状旁腺激素(PTH)和环磷酸腺苷(cAMP)的含量,Micro-CT和HE染色观察骨组织微结构。结果 HLS组股骨(P=0. 000)和椎骨(P=0. 001)的BMD显著低于对照组; HLS+PEMFs组股骨(P=0. 001)和椎骨(P=0. 039)的BMD显著高于HLS组; HLS+SEMFs组股骨的BMD明显高于HLS组(P=0. 003),但椎骨的BMD与HLS组差异无统计学意义(P=0. 130); HLS+PEMFs组和HLS+SEMFs组股骨(P=0. 818)和椎骨(P=0. 614)的BMD差异均无统计学意义。HLS组股骨和椎骨的最大载荷(P=0. 000,P=0. 009)和弹性模量(P=0. 015,P=0. 009)显著低于对照组; HLS+PEMFs组股骨(P=0. 038)和椎骨(P=0. 087)的最大载荷显著高于HLS组,但弹性模量与HLS组相比差异无统计学意义(P=0. 324,P=0. 091); HLS+SEMFs组股骨和椎骨的最大值载荷(P=0. 190,P=0. 222)和弹性模量(P=0. 512,P=0. 437)与HLS组相比差异均无统计学意义。HLS+PEMFs组和HLS+SEMFs组股骨(P=0. 585,P=0. 948)和椎骨(P=0. 668,P=0. 349)的最大载荷和弹性模量差异均无统计学意义。HLS组的血清OC水平显著低于对照组(P=0. 000),HLS+PEMFs组(P=0. 000)和HLS+SEMFs组(P=0. 006)的OC水平显著高于HLS组。HLS组的血清Tracp 5b浓度显著高于对照组(P=0. 011),HLS+PEMFs组(P=0. 459)和HLS+SEMFs组(P=0. 469)与对照组相比差异无统计学意义; HLS+PEMFs组(P=0. 056)和HLS+SEMFs组(P=0. 054)的血清Tracp 5b浓度与HLS组相比差异无统计学意义。HLS组的PTH (P=0. 000)和cAMP浓度(P=0. 000)显著低于对照组; HLS+PEMFs组和HLS+SEMFs组的PTH (P=0. 000,P=0. 000)和cAMP浓度(P=0. 000,P=0. 000)显著高于HLS组。HLS组股骨松质骨与对照组相比非常稀疏,且体积较小。而对照组、HLS+PEMFs组和HLS+SEMFs组的松质骨密度和体积很接近。与对照组相比,HLS组大鼠的BMD (P=0. 000)、骨体积(BV)/组织体积(TV)(P=0. 000)、骨小梁数量(Tb. N)(P=0. 000)和骨小梁厚度(Tb. Th)(P=0. 000)最低,骨小梁离散程度(Tb. Sp)(P=0. 000)和骨表面积(BS)/BV (P=0. 000)最大;与HLS组相比,HLS+PEMFs组和HLS+SEMFs组的Tb. Sp (P=0. 000,P=0. 000)和BS/BV (P=0. 000,P=0. 000)显著降低,BMD (P=0. 000,P=0. 000)、BV/TV(P=0. 001,P=0. 004)、Tb. Th (P=0. 000,P=0. 001)和Tb. N (P=0. 000,P=0. 001)显著升高。HLS+PEMFs组和HLS+SEMFs组的骨小梁厚度差异有统计学意义(P=0. 024)。HLS组(P=0. 000)、HLS+PEMFs组(P=0. 000)和HLS+SEMFs组(P=0. 000)骨小梁表面成骨细胞密度明显低于对照组,HLS+PEMFs组(P=0. 000)和HLS+SEMFs组(P=0. 000)明显高于HLS组。HLS组骨内膜成骨细胞密度显著低于对照组(P=0. 000),HLS+PEMFs组(P=0. 000)和HLS+SEMFs组(P=0. 000)显著高于HLS组,HLS+PEMFs组又显著高于HLS+SEMFs组(P=0. 041)。HLS组相比对照组骨髓腔中产生大量脂肪空洞,但治疗组中脂肪球明显减少,几乎与对照组没有差别。HLS组每mm2骨髓中的脂肪细胞数目是对照组的4倍(P=0. 000),HLS+PEMFs组(P=0. 000)和HLS+SEMFs组(P=0. 000)显著低于HLS组,HLS+PEMFs组和HLS+SEMFs组间差异无统计学意义(P=0. 086)。结论 50 Hz 0. 6 m T的PEMFs和50 Hz 1. 8 m T的SEMFs治疗可以有效提高尾吊大鼠的BMD和生物力学值,促进大鼠血液中骨形成标记物的浓度,可能通过影响PTH含量激活cAMP通路,进一步提高成骨细胞含量,防止骨微结构的恶化,是良好的电磁场治疗方法。其中PEMFs治疗更显著,可防止约50%的BMD和最大载荷值的降低,通过促进骨形成更好地提高尾吊大鼠骨量。

正弦交变电磁场提高成骨细胞活性的时间效应及其信号转导机制

目的研究50 Hz 1.8 mT正弦交变电磁场(SEMFs)提高成骨细胞活性具有时间效应的信号转导机制。方法将新生大鼠颅骨成骨细胞(ROBs)置于自制螺线管产生的均匀磁场中,待磁场处理30、60、90、120和150 min后,分别检测胞内碱性磷酸酶(ALP)活性,并用Western blot法检测Runx-2、Smad1/5/8和MAPK蛋白表达量,用双荧光素酶报告基因检测Wnt信号途径的激活水平,用免疫荧光染色法观察Smad1/5/8和β-catenin发生核转位情况,用特异性阻断剂抑制p38 MAPK后检测ALP活性变化情况。结果SEMFs可提高ROBs的ALP活性,对照组、干预30、60、90、120和150 min分别为45.53±3.24、51.41±5.21、59.47±4.02、67.56±4.68、63.69±3.92、58.16±3.61,其中90 min时达到最高值,之后趋于下降。Runx-2、Smad1/5/8、p38 MAPK和β-catenin的蛋白表达量也增加,90 min时达到峰值,之后逐渐恢复正常水平。Wnt信号途径ALP活性,对照组、干预30、60、90、120和150 min分别为0.49±0.06、0.52±0.09、0.75±0.05、0.77±0.42、0.58±0.08、0.42±0.09,同样在90 min达到最高活性,同时β-catenin和Smad1/5/8的核转位也达到最高水平。用SB 203580特异性抑制p38 MAPK前对照组和SEMFs组ALP活性分别为44.60±3.84、71.54±7.34,抑制后SB203580和SEMFs+SB203580分别为52.08±0.83、52.15±10.77,说明抑制后不能提高ALP活性。结论50 Hz 1.8 mT SEMFs通过激活BMP/Smad1/5/8、Wnt/β-catenin和p38 MAPK信号途径提高成骨细胞活性,最佳日处理时间为90 min。

五株植物内生真菌分子生物学鉴定及代谢产物化学成分初探

目的鉴定五株内生真菌并初步研究其次级代谢产物的化学成分。方法运用分子生物学手段鉴定五株内生真菌,采用硅胶柱色谱、高效液相色谱法及TLC研究其次级代谢产物的化学成分,并运用酶标法测定单体化合物的单胺氧化酶抑制活性。结果与结论 GWT-8、LRWT-26-1和LRWT-39鉴定为链格孢属真菌,GWT-7鉴定为喙枝孢属真菌,CQ-17暂时鉴定为镰孢属真菌。从其次级代谢产物中分离得到5个化合物pseurotin A1(1)、alternariol(2)、ergosterol peroxide(3)、bisdethiobis(methylthio)gliotoxin(4)、alternariol-4-methy ether(5),其中化合物3和化合物4具有一定程度的单胺氧化酶抑制活性,初质量浓度为300μg·mL^(-1)时,抑制率分别为53.82%和65.60%,IC50值分别为142μg·mL^(-1)和130μg·mL^(-1)。