ST11肺炎克雷伯菌QL5株携带的质粒pQL5-NDM-KPC的研究

目的探讨肺炎克雷伯菌QL5株携带编码碳青霉烯酶基因的质粒及其特性。方法基于二代Illumina和三代Nanopore测序技术平台获得菌株的基因组和质粒序列,然后用一系列软件分析菌株的生物学信息。S1核酸酶切脉冲场凝胶电泳、质粒液相接合试验和稳定性试验检测菌株携带的质粒特性。结果生信分析显示:肺炎克雷伯菌QL5株携带的bla_(NDM-1)和bla_(KPC-2)基因位于同一个IncC/IncFII(PHN7A8)/IncR杂合质粒上(命名为pQL5-NDM-KPC);QL5株携带的pQL5-NDM-KPC可发生bla_(NDM-1)基因所在区域的片段丢失。结论经检索,携带bla_(NDM-1)和bla_(KPC-2)基因位于同一个IncC/IncFII(PHN7A8)/IncR杂合质粒pQL5-NDM-KPC(GenBank序列号:OR253888)上,为国内外首次报道。

大肠埃希菌临床株QD24对黏菌素和碳青霉烯类耐药的机制

目的探讨大肠埃希菌临床株QD24对黏菌素和碳青霉烯类耐药的机制。方法通过二代Illumina和三代Nanopore测序技术平台获得大肠埃希菌QD24株的染色体和质粒序列,然后对其进行在线软件分析。液相接合试验、S1核酸酶切脉冲场凝胶电泳(S1-PFGE)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)检测菌株携带的质粒。结果测序分析显示大肠埃希菌QD24属于ST69型,携带了黏菌素耐药基因mcr-1.1和碳青霉烯类耐药基因blaNDM-13,且这两个基因分别位于IncHI2型质粒pQD24-1和IncB/O/K/Z型质粒pQD24-3上。液相接合显示大肠埃希菌QD24能将blaNDM-13基因传递到大肠埃希菌J53Azi^(R)。结论大肠埃希菌QD24对黏菌素和碳青霉烯类耐药是因为携带了mcr-1.1和blaNDM-13耐药基因。经检索,同时携带mcr-1.1和blaNDM-13耐药基因ST69型大肠埃希菌为国内外首次报道。

碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌耐药性及耐药基因分析

目的探讨医院碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)的临床耐药性及耐药表型和基因型,为医院CRE菌株感染的临床治疗及医院感染暴发的预防和控制提供科学依据。方法收集2020年7月至2023年1月日照市中医医院临床患者标本中分离的77株CRE菌株,采用全自动微生物分析仪进行细菌鉴定和药敏试验,采用改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)和乙二胺四乙酸(EDTA)改良碳青霉烯酶灭活试验(eCIM)联合检测碳青霉烯酶表型,采用聚合酶链反应(PCR)扩增耐药基因并进行测序分型。结果77株CRE菌株主要分离自痰液,其次是尿液、胸腔积液;科室来源主要是颅脑外科、重症医学科、脑卒中监护室。CRE菌株中肺炎克雷伯菌33株,大肠埃希菌15株,阴沟肠杆菌12株,其他细菌17株。CRE菌株对替加环素敏感性为97.4%,阿米卡星为44.2%,复方磺胺甲噁唑为39.0%,对其他抗菌药物的敏感性均低于20.0%。mCIM筛选碳青霉烯酶菌株的灵敏度为95.9%,特异度为100.0%。PCR扩增结果显示49株CRE菌株携带NDM基因,24株CRE菌株携带KPC基因,1株CRE菌株携带IMP基因,3株未检出碳青霉烯酶基因;基因测序比对确定耐药基因亚型分别为bla KPC-2、bla NDM-1、bla IMP-4。结论CRE菌株以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌为主,具有较强的耐药性,肺炎克雷伯菌碳青霉烯类耐药基因主要为bla KPC-2、大肠埃希菌耐药基因主要为bla NDM-1,阴沟肠杆菌耐药基因主要为bla NDM-1,临床需加强CRE菌株检测,根据药敏试验结果合理选用抗菌药物,防范其在医院内暴发流行。

栖冷克吕沃尔氏菌临床株对碳青霉烯类耐药的分子机制

目的探讨栖冷克吕沃尔氏菌临床株PD49对碳青霉烯类耐药的分子机制。方法细菌鉴定和药敏分别通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪和VITEK 2 Compact系统。碳青霉烯酶的检测通过NG-Test CARBA 5卡。基于Illumina MiSeq和Nanopore MinION技术平台对菌株测序,然后进行生物信息学分析。通过液相接合试验和S1核酸酶切脉冲场凝胶电泳(S1-PFGE)检测菌株所携带质粒的水平转移能力。结果栖冷克吕沃尔氏菌临床株PD49对广谱头孢菌素敏感,环丙沙星和左氧氟沙星中介,厄他培南、亚胺培南和美罗培南耐药。通过测序平台获得了PD49株的基因组序列,进一步的生物信息学分析显示:PD49株的染色体(命名为PD49-chr,4844054 bp)携带bla_(KLUC-1)基因以及多个外排泵基因;该菌株携带1个ColKP3/IncX3型杂合质粒(命名为pPD49-OXA-181,51479 bp),且bla_(OXA-181)和qnrS1基因位于该质粒上。液相接合和S1-PFGE结果显示PD49株将携带的pPD49-OXA-181质粒传递到大肠埃希菌J53Azi^(R)。结论本研究表明栖冷克吕沃尔氏菌临床株PD49对碳青霉烯类耐药的分子机制是因为该菌携带了bla_(OXA-181)基因。经检索,同时携带bla_(KLUC-1)、bla_(OXA-181)和qnrS1基因的克吕沃尔氏菌为国内外首次报道。

同时携带blaNDM-1和blaKPC-2基因肺炎克雷伯菌的研究

目的探讨某医院儿科分离的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类耐药的机制和菌株的同源性。方法2021年6月~2021年12月在某医院儿科住院患儿中分离出8株对碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌。细菌的鉴定和药敏采用VITEK 2系统。基于Illumina和Nanopore测序平台获得菌株的基因组和质粒序列,然后用软件分析菌株的生物学信息。Xba I酶切脉冲场凝胶电泳(PFGE)、S1核酸酶切脉冲场凝胶电泳(S1-PFGE)和质粒的液相接合试验分别检测菌株的同源性和携带的质粒。结果这8株肺炎克雷伯菌都携带blaNDM-1和blaKPC-2及其他的耐药基因,与呈现的多重耐药表型相符合。依据Tenover规则,这8株菌的PFGE属于相同的克隆群,且多位点序列都属于ST11型。S1-PFGE和测序结果都显示QD1株携带三个质粒,分别命名为P1(携带blaNDM-1)、P2和P3(携带blaKPC-2)。另外,液相接合显示QD1株携带的P1质粒(携带blaNDM-1)可水平传递到大肠埃希菌J53Azi^(R)。结论研究表明这些菌株对碳青霉烯类的耐药是因为携带了blaNDM-1和blaKPC-2基因。经检索,同时携带blaNDM-1和blaKPC-2基因的ST11型肺炎克雷伯菌在儿科患者中的暴发流行为国内外首次报道。

乙型肝炎病毒DNA与血清标志物联合检测在预防医院感染中的研究

目的为预防医院感染和提高输血安全性,评估乙型肝炎病毒DNA和血清标志物联合检测的价值。方法采用免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量PCR技术分别对医院患者和献血员的标本进行乙型肝炎病毒血清标志物和DNA含量检测。结果经ELISA法检测,346例医院患者中乙型肝炎病毒标志物阴性62份,其中呈HBV DNA阳性1例(1.6%);在300份初筛合格的献血员标本中,6例呈HBV DNA阳性(2%),其中222份ELISA法全阴性的标本检出HBV DAN阳性2例(0.9%)。结论本地区人群存在HBsAg阴性的HBV感染;乙型肝炎病毒DNA和血清标志物的联合检测,对预防医院感染和提高输血安全性有重要意义。

艾滋病患儿粪便中检出鼠伤寒沙门菌氏1例

患儿,男,2岁,因间断发热伴腹泻4mo入院.期间,抽血进行淋巴细胞表型分析,CD4+为0.73%,遂做HIV抗体筛查,后经上级CDC证实患儿为HIV抗体阳性;同时,大便培养分离出鼠伤寒沙门氏菌.患儿确诊为艾滋病伴鼠伤寒沙门氏菌感染(肠炎型),且该分离菌株呈现多重耐药.此病例少见,应引起临床重视.

青岛市流行性出血热的汉坦病毒检测和其基因型的研究

目的探讨引起青岛市流行性出血热的汉坦病毒(Hantavirus,HV)的感染类型,以明确基因亚型和进化特点。方法免疫胶体金法检测126份临床怀疑急性期病人血清中汉坦病毒的抗体。RT-PCR扩增病毒的S基因段,并经测序获得基因序列。病毒的核苷酸序列分析和构建系统进化树应用DNASta软件,并以确定病毒的型别。结果 126份血清标本中,112份汉坦病毒IgM和(或)IgG抗体阳性。经RT-PCR扩增获得7株汉坦病毒S基因序列,与汉滩型(Hantaan virus,HTN)和汉城型(Seoul virus,SEO)毒株比较,其中2株为HTN型,5株为SEO型,相互间序列达到68%-98.9%同源性。结论引起青岛市流行性出血热的汉坦病毒为汉滩型和汉城型的混合感染,以汉城型为主。

医院感染常见革兰阴性杆菌的耐药性分析

目的了解我院2003-2004年间临床分离的常见革兰阴性杆菌的耐药状况,为临床抗感染治疗和合理选择抗菌药物提供依据。方法VITEA-32全自动细菌鉴定仪对临床分离菌株进行鉴定,kirby-Bauer法对临床分离菌株进行药物敏感试验。结果两年间共分离革兰阴性杆菌3262株,占临床细菌总分离率的68.6%。常见的革兰阴性杆菌依次为大肠埃希菌(1021株)、铜绿假单胞菌(609株)、不动杆菌属(575株)、肺炎克雷伯菌(423株)、肠杆菌属(382株)。在大肠埃希菌中,检出产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)349株,产酶率为34.2%;在肺炎克雷伯菌中,检出产ESBLs菌株149株,产酶率为35.2%。药敏结果显示,革兰阴性杆菌对亚胺培南和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率较低,对氨苄西林、头孢唑啉、庆大霉素等抗生素具有较高的耐药率,并且多重耐药现象比较严重。结论革兰阴性杆菌的分离率较高,耐药现象严重。临床医生在抗感染治疗中应根据药敏实验结果,合理选择抗菌药物,以提高抗感染的治疗效果。

荧光RT-PCR对乙型流感病毒爆发的检测

目的探讨荧光RT-PCR方法对乙型流感病毒爆发的诊断价值。方法采集暴发性疫情的流感样病例的咽拭子,提取病毒RNA,PCR方法分别检测甲型和乙型流感病毒的核酸。然后,对核酸检测阳性标本进行MDCK培养,经红细胞凝集和凝集抑制试验对病毒进行鉴定和分型。结果 18份咽拭子中15份乙型流感病毒核酸呈阳性,甲型流感病毒未检出;15份乙型流感病毒核酸阳性标本经MDCK培养,9份标本发生细胞病变,经鉴定和分型,都属于乙型流感病毒Victoria系。结论 RT-PCR方法对乙型流感病毒爆发的检测具有快速、敏感和高度特异性的特点。本地区爆发的乙型流感病毒为乙型流感病毒Victoria系,提示在今后决定我国疫苗成份时应考虑地区流行的特点。

结直肠癌患者外周血CEA-mRNA表达的研究

目的检测结直肠癌患者外周血中的循环肿瘤细胞癌胚抗原(CEA)mRNA的表达,并分析其临床价值。方法40例有明确临床肿瘤病灶存在的结肠癌患者,20例结肠息肉患者和40例健康志愿者,分别以逆转录PCR(RT-PCR)检测其外周血中CEA mRNA的表达。结果40例结肠癌患者外周血中CEA mRNA表达的阳性率为45.0%(18/40),而健康对照组均为阴性,两者比较有显著性差异(P<0.001);20例结肠息肉患者中CEA mRNA表达阳性率为10%(2/20);CEA mRNA阳性表达率与肿瘤分期相关,而与肿瘤细胞分化程度并不相关。结论结直肠癌患者外周血中CEA mRNA的表达的检测对肿瘤的分期、决定治疗手段、判断疗效和预后有着重要的临床价值。

人白细胞介素-15克隆的构建及表达

从经脂多糖刺激的外周血单核细胞中提取mRNA,RT-PCR扩增出白细胞介素-15(IL-15)成熟肽前体蛋白基因,将其插入到质粒pGEX-4T-2编码谷胱肽转移酶(G ST)的多克隆位点(M CS),构建原核表达克隆(PGEX-4T-2/IL-15);重组质粒经酶切、测序鉴定后转化大肠杆菌,IPTG诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白图谱,W estern b lot鉴定表达蛋白。结果成功构建了pGEX-4T-2/IL-15原核表达克隆,经IPTG诱导,转化的大肠杆菌表达出相对分子质量(M r)为42×103D a ltons的融合蛋白,且该蛋白能与抗IL-15抗体发生特异性结合反应。本研究可为进一步研究IL-15的生物学功能和临床应用奠定基础。

几种常见牙周致病菌对羧甲基壳聚糖的降解效应

背景:近年来,羧甲基壳聚糖的体内降解已成为牙周组织工程和材料学领域中的研究热点,但在涉及羧甲基壳聚糖酶解的文献中,尚未找到关于牙周致病菌能够产酶降解羧甲基壳聚糖的报道。目的:研究几种常见牙周致病菌对羧甲基壳聚糖的降解作用。方法:制备质量分数1%和2%的羧甲基壳聚糖厌氧微生物培养基。采用透明圈法,分别挑取牙龈卟啉单胞菌、伴放线放线杆菌和黏性放线菌菌落划线接种于羧甲基壳聚糖厌氧微生物培养基中,置于厌氧培养袋中37℃恒温培养,观察结果,如果菌落周围出现明显的透明圈,即为阳性,说明细菌能够分解羧甲基壳聚糖,反之则为阴性,并测量菌落直径。结果与结论:牙龈卟啉单胞菌在1%羧甲基壳聚糖厌氧微生物培养基上生长良好,培养18d后菌落周围出现明显的透明圈;在2%羧甲基壳聚糖培养基上,牙龈卟啉单胞菌的生长受到抑制,未形成形态规则的菌落;伴放线放线杆菌和黏性放线菌在两种质量分数羧甲基壳聚糖厌氧微生物培养基中,菌落周围均未出现透明圈,培养2周后菌落干枯失去活性。提示牙龈卟啉单胞菌可降解较低质量分数的羧甲基壳聚糖,伴放线放线杆菌和黏性放线菌均不能降解羧甲基壳聚糖。

青岛地区革兰阴性杆菌的分布及耐药性监测

目的了解青岛地区常见革兰阴性杆菌的种类、分布及耐药状况,为临床用药提供依据。方法收集青岛地区4所医院临床分离的2362株革兰阴性杆菌,采用ATB Expression自动细菌鉴定系统对菌种进行鉴定,用K-B法进行药物敏感性实验。结果分离出的革兰阴性杆菌中,主要以大肠埃希菌（ECO）、铜绿假单胞菌（PAE）、肺炎克雷伯菌（KPN）、不动杆菌属（AC-）、阴沟肠杆菌（ECL）多见;大多数革兰阴性杆菌对广谱青霉素、第三代头孢菌素、氨基糖苷类和喹诺酮类抗菌药物的耐药率高;头孢吡肟（FEP）对革兰阴性非发酵菌抗菌作用差,对肠杆菌科细菌耐药率较低,为17.5%-33.9%;头孢哌酮/舒巴坦（CFS）和哌拉西林/他唑巴坦（TZP）对革兰阴性杆菌的抗菌作用强,耐药率分别为9.9%-24.6%和9.3%-29.2%;亚胺培南（IMP）对革兰阴性杆菌的抗菌活性最强,除PAE外,细菌耐药率均〈5%。结论革兰阴性杆菌对常用抗菌药物耐药性较高,开展地区性细菌耐药监测十分重要。

多重耐药鲍曼不动杆菌中16SrRNA甲基化酶基因的检测及耐药分析

目的了解医院分离的多重耐药鲍曼不动杆菌16SrRNA甲基化酶基因分布情况,为临床合理应用抗菌药物提供依据。方法采用Phoenix100微生物全自动鉴定系统进行菌株鉴定及药敏试验;采用PCR方法检测armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD基因。结果 46株鲍曼不动杆菌中armA基因阳性36株,阳性率78.3%,未检出rmtA、rmtB、rmtC、rmtD基因。药敏试验结果显示医院分离的多重耐药鲍曼不动杆菌对多黏菌素全部敏感,对四环素、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、甲氧苄啶-磺胺甲唑耐药率分别为13.0%、80.4%、91.3%、95.7%、95.7%,对其他测试药物耐药率100%。结论医院分离鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗菌药物耐药性已非常严重,携带armA基因是导致氨基糖苷类耐药的原因之一,延缓鲍曼不动杆菌多重耐药性已刻不容缓。

携带NDM-1基因ST571型肺炎克雷伯菌引起新生儿医院感染暴发的研究

目的调查某医院儿科分离的6株对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因型和相互间的同源性,为控制医院感染提供依据。方法采用梅里埃Vitek-2Compact对6株肺炎克雷伯菌进行鉴定及药敏试验。改良Hodge试验和金属酶E条检测菌株是否产碳青霉烯酶。聚合酶链式反应扩增菌株是否携带碳青霉烯酶、超广谱β-内酰胺酶和Ampc等耐药基因,并测序确定其基因型。多位点序列(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)验证菌株之间的同源性。结果 6株肺炎克雷伯菌表现为多重耐药性,对临床常用的抗生素耐药。所有菌株改良Hodge和金属酶E条试验均阳性,且携带多个耐药基因。其中5株菌,分别携带NDM-1、SHV-11、DHA-1、oqxA和fosA3基因。另外1株ST11型肺炎克雷伯菌携带KPC-2、CTX-M-65、TEM-1和OXA-1基因。5株携带NDM-1基因的肺炎克雷伯菌中,有4株的PFGE带型相同,且都为ST571型,另一株为ST76型,带型与前4株不同。结论新生儿病房中存在携带NDM-1、SHV-11、DHA-1、oqxA和fosA3基因的ST571型肺炎克雷伯菌引起的医院感染暴发。

唑类耐药白色念珠菌羊毛甾醇14α-去甲基化酶基因的研究

目的探讨白色念珠菌羊毛甾醇14α-去甲基化酶(CYP51)基因突变与对唑类抗真菌药物耐药的关系,从分子水平了解其耐药机制。方法纸片扩散法和NCCL公布的M-27方案测定耐药株对氟康唑和伊曲康唑的MIC;设计引物,PCR扩增唑类耐药白色念珠菌的CYP51基因;扩增产物测序并与Genbank序列相比较分析。结果扩增产物测序分析表明,成功扩增到白色念珠菌CYP51基因。与X13296株序列相比较,两个耐药株都存在有意义突变和无意义突变。两株菌共有22个碱基突变。与以往报道的相同,突变发生氨基酸替换的有F105L、K128T、Y133H、T199I、R267H、G464S和G467K。其中,两株菌都有Y132H和G467K突变。F71L、W244R、T311N和T352I为新发现的突变,未见报道。同时,也发现了9个未发生氨基酸替换的突变。结论白色念珠菌对唑类抗真菌药物的耐药与CYP51基因突变有关,且为多位点突变。

亚胺培南耐药铜绿假单胞菌的整合子检测及其与多重耐药相关性的研究

目的调查亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌携带整合子情况,了解其与多重耐药的相关性。方法采用Mi-cro Wlkway-96全自动细菌鉴定仪进行细菌鉴定和药敏试验,PCR法对临床分离的120株亚胺培南耐药和80株亚胺培南敏感的铜绿假单胞菌进行整合子检测。结果 120株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌中Ⅰ类整合子的检出率为81.7%(98/120)、Ⅲ类整合子检出率为1.7%(2/120),未检出Ⅱ类整合子;80株亚胺培南敏感的铜绿假单胞菌中Ⅰ类整合子的检出率为21.3%(17/80),未检出Ⅱ、Ⅲ类整合子。整合子阳性的铜绿假单胞菌对临床常用抗菌药物的耐药率明显高于整合子阴性的铜绿假单胞菌,并且前者多重耐药现象较为严重。结论Ⅰ类整合子广泛存在于亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌中,并与其多重耐药性密切相关。

胶东地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性的研究

目的了解胶东地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的耐药情况。方法采用VITEK2compact微生物分析仪进行细菌鉴定和药物敏感试验;头孢西丁Kirby-Bauer法和青霉素结合蛋白2a胶乳凝集(PBP2a)试验对分离出的金黄色葡萄球菌进行MRSA确认;酸测定法和D试验测定MRSA产β-内酰胺酶和红霉素诱导克林霉素耐药实验。结果头孢西丁纸片扩散法与PBP2a胶乳凝集法对MRSA检出率无统计学上差别(P>O.05);331株MR-SA产β内酰胺酶率和克林霉素诱导试验阳性率分别为91.14%和16.62%;全部菌株对万古霉素、替加环素和利奈唑胺敏感,但对红霉素、克林霉素耐药率高达82.19%和77.34%。结论 MRSA耐药机制复杂,呈现多重耐药,应根据药敏结果选用抗生素。