MLVA方法在军团菌分子分型中的应用评价

目的探讨MLVA方法在军团菌分型中的可应用性。方法选用文献报道的9个军团菌VNTR位点,对我国环境水中分离的81株Lp1型军团菌菌株和2株参考菌株进行分子分型研究,并与PFGE和SBT分型结果进行了比较。结果 81株分离菌株9个VNTR位点的等位基因型别数分别为6,3,4,2,3,3,2,4和7,其中部分菌株的某些位点无扩增产物或产物为非目的片断。7个位点PCR产物具有重复单元;Lpms3位点PCR产物无重复单元;Lpms31位点部分菌株PCR产物有重复单元,另一些菌株无重复单元。对于具有重复单元的序列,不同菌株间以及同一菌株内各重复单元的序列变异均较大,3个位点存在不完整的重复单元。根据8个位点的PCR产物电泳结果,81株Lp1型分离菌株分为19个MLVA型。通过PFGE和SBT方法,81株Lp1型分离菌株分别分为46种PFGE带型和21种ST型。结论 MLVA方法的分型能力不及PFGE方法,而与SBT方法分型能力相当。但是,MLVA方法操作简单、成本低廉,而且可对培养阴性的标本进行分型,因此,该方法适合在基层推广应用。

颠覆您的传统思维——强大而恐怖的“人肉搜索引擎”

文章从一个图情人的角度介绍了"人肉搜索引擎"的概念及来由,并通过两个"人肉搜索"事例论述了它的运行特点,在将"人肉搜索引擎"与普通搜索引擎的对比后,阐述了"人肉搜索引擎"如此强大的原因,认为这种"人肉搜索"精神对图书馆信息服务和资源共建共享有一定的启示借鉴作用。

离心泵三维设计的研究

在离心泵的水力设计、结构三维造型设计以及内部三维流动分析计算 3方面进行了综合分析。结果表明 ,在已知离心泵设计参数情况下 ,可以实现水力设计的 CAD、结构设计的三维造型、实体模型装配以及检查其干涉情况 ,然后利用 Fluent流动计算软件进行流场的分析与校核 ,检验水力设计的优劣 ,预测其产品的性能。

“巴山峡川”茶园自然环境与茶叶品质的调查研究

本文研究了中国古老的“巴山峡川”茶区的气象条件及其 7个茶场的土壤条件、茶树生长和茶叶品质状况 ,调查表明 ,“巴山峡川”夜雨多 ,伏旱严重。茶园土壤主要为黄壤 ,有酸化的趋势 ,黄壤有机质含量比紫色土高。永川新胜茶场砂岩黄壤有机质、氮素、速效磷含量高 ,茶样游离氨基酸、咖啡碱含量高。万源砾岩黄壤交换性钙镁含量高 ,茶样茶多酚含量高 ;酸性紫色土钾素状况良好 ,茶样水浸出物含量高。值得注意的是 ,万盛灰岩黄壤水溶性硫含量最高 ,茶样硫含量。

嗜肺军团菌血清I型菌株随机扩增多态性DNA指纹图谱研究

目的采用随机扩增多态性DNA(RAPD)方法研究我国58株嗜肺军团菌血清1型(Lp1)菌株的基因型特征。方法58株嗜肺军团菌血清1型菌株来自北京和深圳市的集中空调冷却塔水和温泉水,随机引物采用5’-CGGCGGCG-GCGG-3’序列,分析Lp1型军团菌RAPD基因型和温度、pH值的关系。结果58株Lp1型菌株共分为17个RAPD基因型。与集中空调冷却塔水Lp1型菌株相比,温泉水分离的菌株基因型具有较高的多态性。深圳市29株集中空调冷却塔水分离的Lp1菌株,共呈现出3个RAPD基因型,北京市24株来自温泉水的Lp1菌株分为12个RAPD型,5株来自集中空调冷却塔水的Lp1型菌株分为两个RAPD型。温泉水Lp1菌株的基因型差异和水温度和pH值无明显的关联。结论RAPD分型方法可用于我国Lp1菌株的基因分型,不同地区和来源的Lp1型军团菌菌株具有特征性的RAPD基因型,温泉水中分离的Lp1菌株较集中空调冷却塔水分离菌株基因型呈现较高的基因多态性。

军团菌KatB毒力基因聚合酶链反应检测技术的建立及应用

为建立军团菌KatB毒力基因聚合酶链反应([PCR)检测方法,根据GenBanK公布的嗜肺军团菌核苷酸序列合成军团菌毒力基因KatB的特异引物,采用PCR方法对2005—2007年天津市中央空调冷却塔分离的嗜肺军团菌、杜氏军团菌、博氏军团菌、长滩军团菌等菌株进行了军团菌毒力基因KatB的检测。结果显示,本室分离的16株致病军团菌中有9株嗜肺军团菌和1株杜氏军团菌扩增出了2.7 kb的KatB基因片段,其余菌株未扩增出该基因片段。本研究成功建立了军团菌毒力基因KatB的PCR检测方法,为军团菌的毒力研究奠定了基础。

图书馆微信服务长效工作模式探析——基于移动互联网思维

图书馆微信移动服务是图书馆服务的扩展和补充。从移动互联网思维出发,对图书馆微信移动服务进行了解读,对微信服务的长效工作模式进行了设计。从该模式的工作理念、工作流程展开到将该模式应用于日常图书馆微信图文推送、接口开发工作案例。实践证明,转变思维是图书馆移动服务创新的前提,创新微信工作模式是提高服务质量和效率的正确选择。

自建数据库评价体系及其数学模型的研究

建立一个科学、合理的自建数据库评价体系,有助于指导高校图书馆特色数据库的开发与建设。本文在确定了自建数据库评价指标体系总体框架后,建立了可以对评价结果进行量化的数学模型。

对图书馆灾难管理的思考

对国内外灾难管理研究现状进行了分析,并结合四川"5.12"汶川大地震,分别对灾难管理的应急预案、应变举措和组织协同三方面的相关问题进行了思考。

杜莫氏军团菌对上皮细胞A549粘附侵袭和胞内生长能力的研究

目的探明杜莫氏军团菌(Legionella dumoffii,L.dumoffii)对上皮细胞A549的粘附、侵袭和胞内生长能力。方法实验使用菌株为L.dumoffiiTEX-KL(ATCC 33343)、L.dumoffiiNY23(ATCC 33279)和嗜肺军团菌L.pneumophila philadelphila-1(ATCC 33155)。配制1×108菌悬液,将其以100 MOI(Multiplicity of Infection)的比例与肺泡上皮细胞A549相互作用。通过吉曼尼兹染色和菌落计数的方法,测定菌株的粘附、侵袭和胞内生长能力。结果杜莫氏军团菌L.dumoffiiTEX-KL、L.dumoffiiNY23和嗜肺军团菌L.pneumophila philadelphila-1三株细菌在体外生长能力和体内对A549细胞的粘附能力方面无明显差别。L.dumoffiiTEX-KL侵袭进入细胞内的菌数是其他两株菌的1 000倍,差异有统计学意义。结论 L.dumoffiiTEX-KL与L.dumoffiiNY23和嗜肺军团菌L.pneumophila philadelphila-1相比,对A549细胞具有更高的侵袭力,因此也具有较高的上皮细胞内生长能力。

杜莫氏军团菌对上皮细胞A549粘附侵袭和胞内生长能力的研究(英文)

目的探明杜莫氏军团菌(Legionella dumoffii,L.dumoffii)对上皮细胞A549的粘附、侵袭和胞内生长能力。方法实验使用菌株为L.dumoffii TEX-KL(ATCC 33343)、L.dumoffii NY23(ATCC 33279)和嗜肺军团菌L.pneumo-phila philadelphila-1(ATCC 33155)。配制1×108菌悬液,将其以100MOI(Multiplicity of Infection)的比例与肺泡上皮细胞A549相互作用。通过吉曼尼兹染色和菌落计数的方法,测定菌株的粘附、侵袭和胞内生长能力。结果杜莫氏军团菌L.dumoffii TEX-KL、L.dumoffii NY23和嗜肺军团菌L.pneumophila philadelphila-1三株细菌在体外生长能力和体内对A549细胞的粘附能力方面无明显差别。L.dumoffii TEX-KL侵袭进入细胞内的菌数是其他两株菌的1 000倍,差异有统计学意义。结论 L.dumoffii TEX-KL与L.dumoffii NY23和嗜肺军团菌L.pneumophila philadelphila-1相比,对A549细胞具有更高的侵袭力,因此也具有较高的上皮细胞内生长能力。

传染性非典型肺炎临床诊断病例血清标本不同非典型肺炎病原体抗体检测

目的研究传染性非典型肺炎(SARS)临床诊断病例血清标本中常见的不同非典型肺炎病原体感染抗体分布情况。方法选取2003年SARS流行期间90份SARS临床确诊病例血清标本和40份健康志愿者血清标本进行血清抗体检测。结果90份临床诊断的传染性非典型肺炎(SARS)病例急性期血清标本中,21.1%(19/90)标本SARS抗体阳性,79.9%(71/90)标本SARS抗体阴性。肺炎支原体、呼吸道合胞病毒、腺病毒、军团菌、肺炎衣原体等抗体检测呈现不同的分布。结论2003年SARS流行期间,SARS抗体阴性的传染性非典型肺炎临床确诊病例可能存在或合并其它病原体感染。

TaqMan荧光定量PCR检测和鉴别不同血清群脑膜炎奈瑟菌方法的建立及应用

目的建立TaqMan荧光定量PCR检测方法，用于脑膜炎奈瑟菌不同血清群菌株的检测和鉴别。方法设计合成7对引物和TaqMan探针，脑膜炎奈瑟菌种属特异性的基因为ctrA；不同血清群的脑膜炎奈瑟菌特异性基因分别为A群（sacB）、B群（siaD）、C群（siaD）、X群（xcbB）、Y群（synF）、W135群（synG）。检测和确定不同探针和引物用于脑膜炎奈瑟菌荧光定量PCR检测的特异性、敏感性，并同时将荧光定量PCR和乳胶凝集方法应用于121份疑似脑膜炎奈瑟菌感染患者的脑脊液标本的检测。结果ctrA、sacB、siaD（B群）、siaD（C群）、xcbB、synF、synG等7对引物和探针能准确检测和鉴定79株不同血清群的脑膜炎奈瑟菌菌株，检测灵敏性比相应的普通PCR高10^2～10^3倍，每对引物和探针反应体系中，能检测的最低全基因组DNA拷贝数分别为8、8、80、8、8、80、8；检测121份疑似脑膜炎奈瑟菌感染患者的脑脊液标本，TaqMan荧光定量PCR检测11份阳性，乳胶凝集方法检测6份阳性。结论TaqMan荧光定量PCR方法能特异地检测和鉴定不同血清群脑膜炎奈瑟菌，具有较高的灵敏性和快速检测的特点，能提高临床疑似脑膜炎奈瑟菌感染病例的阳性检出率。

TaqMan荧光定量PCR检测流感嗜血杆菌和肺炎链球菌方法的建立及应用

目的建立TaqMan荧光定量PCR检测方法，用于流感嗜血杆菌和肺炎链球菌的检测和鉴别诊断。方法针对流感嗜血杆菌种属特异性基因bexA和肺炎链球菌种属特异性基因lytA，设计合成引物和TaqMan探针，研究不同引物和探针荧光定量PCR检测的特异性和灵敏度，确定标本检测中循环阈值（Ct）的临界值（cut-off值）。将荧光定量PCR、乳胶凝集和细菌培养3种检测方法同时应用于278份细菌性脑膜炎患者脑脊髓液标本的检测。结果bexA基因引物和探针能特异性检测流感嗜血杆菌a、b、c、d血清型的菌株，检测灵敏度为每个反应10个基因组DNA拷贝；易叫基因引物和探针能特异性检测肺炎链球菌常见致病的血清型肺炎链球菌菌株，检测灵敏度为每个反应90个基因组DNA拷贝。通过荧光定量PCR方法，278份脑脊髓液标本中共检测出4份流感嗜血杆菌阳性和7份肺炎链球菌阳性，其中各有2份培养出相应的病原菌，另有1份流感嗜血杆菌和2份肺炎链球菌乳胶凝集结果阳性。结论TaqMan荧光定量PCR方法能特异地检测和鉴定流感嗜血杆菌和肺炎链球菌，具有较高的灵敏度和快速检测的特点，能提高临床流感嗜血杆菌和肺炎链球菌感染患者标本的阳性检出率。

我国九省（市、区）82株嗜肺军团菌血清1型菌株的序列分型

目的了解我国环境水中嗜肺军团菌血清1型（Lp1）菌株的序列分型特征，并初步建伊我国军团菌序列分型数据库。方法采用序列分型（SBT）方法，对我国9个省（市、自治区）2005--2008年问环境水中分离的82株如1菌株进行分型，同时采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型方法对这些菌株进行分型，并采用BioNumerics5．1软件对2种方法的分型结果进行聚类分析和比较。结果82株Lp1菌株分为22种序列（sT）型，其中17种ST型是新序列型，新发现1个等位基因；ST-1型为主要的序列型，在8个省（市、自治区）均有发现，该型菌株占所有菌株的46．3％（38／82）；ST．1、ST．150、ST-154、ST-159、ST-160和ST-630出现于2个以上的分离地点，5个分离位点（B4、B5、B6、S3和S8）发现2种以上ST型；通过聚类分析，15种ST型被分为3个序列群（ST-1序列群、ST-154序列群和ST-149序列群），其余7种ST型没有序列群归类。采用PFGE分型方法，这些菌株可被分为46种带型。SBT和PFGE两种方法结合可将82株菌株分为54种分子型别。两种方法的聚类分析结果具有良好的-致性。结论我国环境水中Lp1菌株具有独特的SBT分布；通过研究，初步建立了我国军团菌序列分型数据库。

中国B群脑膜炎奈瑟菌分子流行病学特征分析

目的分析中国B群脑膜炎奈瑟菌分子流行病学特征。方法485株B群脑膜炎奈瑟菌为1968—2016年分离和收集于29个省份的菌株,包括流行性脑脊髓膜炎(流脑)病例脑脊液或血液标本分离菌株100株,健康带菌者鼻咽部分离菌株385株。根据多位点序列分型(MLST)网站公布的方法,对菌株进行PorA外膜蛋白分型和MLST分型,采用Bionumerics软件分析序列型(ST型),构建最小生成树;针对B群脑膜炎奈瑟菌蛋白疫苗的主要成分FHbp、NadA和NHBA蛋白进行分子型别分布和序列特征分析。结果485株B群脑膜炎奈瑟菌分为270种ST型,其中107种ST型(211株菌)可归入已知的10个克隆群,163种ST型(274株)不能归入任何克隆群;CC4821为主要流行的克隆群(28.7%,139株)。病例分离菌株的主要PorA型为P1.5-2,2-2(10.0%,10株)、P1.5-1,2-2(9.0%,9株)和P1.5-1,10-4(9.0%,株)。421株含有完整的FHbp氨基酸序列,其中变异1型(v1)、2型(v2)和3型(v3)菌株分别占12.8%(54株)、85.0%(358株)和2.2%(9株)。432株完成nadA基因测序,其中10株(2.3%)含有完整的nadA基因。172株完成nhba基因测序,均具有完整的nhba基因序列,其中170株的NHBA氨基酸序列共分为68个型,呈现出多态性特征。结论中国B群脑膜炎奈瑟菌优势克隆群为CC4821;其疫苗相关蛋白多态性较强。中国应该根据本国菌株的特征慎重选择B群流脑疫苗候选蛋白。

血清杀菌试验和酶联免疫吸附试验测定C群脑膜炎奈瑟菌血清抗体滴度比较

目的比较血清杀菌试验（SBA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）N定两种C群脑膜炎奈瑟菌（Nm）疫苗免疫后血清抗体滴度的差异。方法采用SBA测定75名未免疫健康成年人（40-70岁）血清、143名3-8月龄婴儿及194名3-5岁儿童NmA和C群结合疫苗或A＋C群多糖疫苗免疫前后血清中Nm杀菌抗体水平，然后用ELISA测定相应血清的Nm特异性IgG含量，并利用线性相关与回归分析两种测定结果的相关性。结果未免疫健康成年人血清中Nm杀菌抗体水平和特异性IgG含量之间的相关性较高（r=0．81433，P〈0．001）；3-8月龄婴儿和3-5岁儿童接种结合／多糖疫苗前，Nm杀菌抗体水平和特异性IgG含量之间相关性较差（3-8月龄：r=0．14064，P〉0．100／r=0．2899，P〈0．05；3-5岁：r=0．54040，P〈0．05／r=0．19436，P〈0．05），接种1剂结合疫苗后，杀菌抗体水平和特异性IgG含量之间的相关性较好（r=0．80938，P〈0．001和r=0．83723，P〈0．001）；接种多糖疫苗后，杀菌抗体水平和特异性IgG含量之间的相关性较差（r〈0．50000）。结论健康成年人血清和结合疫苗免疫后的婴幼儿血清中特异性C群NmIgG含量可以间接反映血清杀菌抗体水平，ELISA方法可以替代SBA。但ELISA检测方法不适用于3-8月龄婴儿多糖疫苗免疫后的效果评价。

荧光PCR检测军团菌方法的优化及应用

军团菌病（Legionellosis）是由军团菌（Legionella）引起的一种急性呼吸道疾病。有超过20个血清型的军团菌可以引起人类疾病。目前军团菌检测方法主要是培养检测法和针对嗜肺军团菌检测的PCR法，

中国7株W135群脑膜炎奈瑟菌基因特征分析

我国流行性脑脊髓膜炎（流脑）的暴发与流行主要由A群和C群引起，W135群脑膜炎奈瑟菌在本世纪初曾引起暴发与流行。目前我国仅从健康人群中分离到W135菌株。我们对健康人群分离的W135群菌株进行多位点序列基因型（MLST）、PorA基因亚型和多位点串联重复序列分析（MLVA）基因特征分析，并与致病性W135群菌株的基因特征进行比较，初步探讨我国W135群菌株是否具有致病性。