脐带间充质干细胞对早产大鼠支气管肺发育不良肺组织DNA甲基化的影响

目的探讨脐带间充质干细胞(U-MSCs)对早产大鼠支气管肺发育不良(BPD)肺组织DNA甲基化的影响。方法提取U-MSCs进行培养,并行表型鉴定与三系分化能力检测。将早产大鼠随机分为BPD建模组(含体积分数0.95氧处理)和对照组(C组,含体积分数0.21氧处理)。处理9 d后将BPD建模组大鼠随机分为PBS治疗组(A组)和U-MSCs治疗组(B组),正常空气中的大鼠作为C组。A组每只大鼠通过尾静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)100μL,B组每只大鼠通过尾静脉注射含2×108个U-MSCs的悬液100μL,C组每只大鼠通过尾静脉注射PBS 100μL,每隔3 d注射1次,共注射2次。治疗8 d以后收集A、B、C组的肺组织进行DNA甲基化的检测。结果提取的U-MSCs高度表达U-MSCs表面标记物CD29、CD44、CD73、CD90、CD105和CD166,而不表达CD31、CD45和HLA-DR,并且具有成骨、成脂和成软骨的能力。B组大鼠生长发育水平和活动度明显高于A组,肺组织损伤程度和炎细胞浸润水平显著低于A组。与C组相比较,A组中A1bg、Guca1b、Hoxa6、LOC500331、Alox12、Arid4b、Btnl8、Cldn18、Clstn1、Defb22、Gpatch11、Lep、Lsm4、Mboat7、Mgat5、Olr1689、Olr1707、Olr556、Psmb8、Rbm14、RGD1561039 DNA甲基化水平明显下降(F=24.98~1546.46,P<0.05),B组与A组相比,以上DNA的甲基化水平明显回升,差异有显著性(P<0.05);而B组与C组相比除Hoxa6、LOC500331 DNA甲基化水平下降外,其他基因的甲基化水平比较差异无显著性(P>0.05)。结论BPD模型中存在DNA甲基化情况。U-MSCs可能通过影响BPD肺组织DNA的甲基化水平影响疾病的发展。

丹参新酮对白血病THP-1细胞增殖与凋亡的影响

研究丹参新酮(miltirone)对人急性髓系白血病THP-1细胞的细胞毒作用及其机制。通过中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)筛选出丹参新酮活性成分及其对应靶点,利用UniProt数据库将靶蛋白转化成基因;利用GeneCards和DisGeNET数据库收集急性白血病疾病相关基因;运用Venny 2.1构建韦恩图并得到交集靶点;利用STRING数据库和Cytoscape 3.8.2软件构建蛋白相互作用(PPI)网络;选取对数生长期的THP-1细胞,用DMSO,2.5、5、10、15及20μmol·L^(-1)miltirone处理24 h;采用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)标记法检测细胞增殖;Annexin V-PE/7AAD双染流式细胞术检测凋亡率,吖啶橙染色观察细胞形态;实时荧光定量PCR(qPCR)检测NCOA2、PARP1、Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA的表达;检测caspase抑制剂Z-VAD-FMK对miltirone诱导凋亡的影响。筛选出26个miltirone靶蛋白,急性白血病疾病相关基因1046个,6个潜在作用靶点与急性白血病相关。流式结果显示,10μmol·L^(-1)miltirone可显著抑制THP-1细胞增殖并促进凋亡;吖啶橙染色可见细胞萎缩、细胞核碎裂、染色体聚集等典型的凋亡形态学改变;NCOA2、PARP1 mRNA表达水平降低,Bax/Bcl-2比例增大,促凋亡蛋白caspase-3活性增强。Z-VAD-FMK能减弱miltirone诱导凋亡的作用。研究结果表明miltirone能抑制THP-1细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调NCOA2、PARP1基因的表达,Bax/Bcl-2比值增大,激活促凋亡因子caspase-3有关。

人脐血单个核细胞对大鼠腓肠肌失神经损伤的治疗作用

目的制备大鼠坐骨神经离断后的腓肠肌萎缩模型,研究人脐血单个核细胞(CB-MNCs)肌肉多点注射对损伤的治疗效果。方法采集并制备新鲜人CB-MNCs;将30只4～6周龄Wistar大鼠随机分为正常对照组(Normal组,n=10)、CB-MNCs治疗组(Therapy组,n=10)和生理盐水治疗组(NS组,n=10),Therapy组和NS组大鼠离断坐骨神经,建立腓肠肌萎缩模型;在造模后第7天、第14天和第21天,分3次将CB-MNCs或等体积生理盐水多点注射到腓肠肌损伤局部,观察大鼠行动能力改变和足弓坏疽发展情况,并于第28天取样测定腓肠肌湿重比、肌肉横截面积,以及血液和腓肠肌中氧化应激相关指标、炎性因子水平和凋亡相关基因的表达,观察肌肉组织中血管内皮生长因子-α(VEGF-α)、α-肌动蛋白(α-actin)和肌营养不良蛋白(Dystrophin)的表达变化。结果 Therapy组大鼠足部坏疽面积和水肿程度明显比NS组减轻(P=0. 002),而且Therapy组中腓肠肌湿重比较NS组升高(P <0. 001);病理切片显示,Normal组、NS组和Therapy组肌肉横截面积分别为(12 452. 0±202. 8)、(6 287. 0±142. 2)和(8 193. 0±115. 5)μm2,差异有统计学意义(P <0. 001)。与NS组相比,Therapy组血清和肌肉肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)含量明显降低,超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)含量明显增高(P <0. 001)。Therapy组较NS组半胱天冬酶-3(Caspase-3)、促凋亡基因Bax、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达量降低,抑凋亡基因Bcl-2、白细胞介素-10 (IL-10)、α-actin、Dystrophin和VEGF-α的mRNA表达量增高(P <0. 05)。与NS组相比,Therapy组α-actin、Dystrophin和VEGF-α蛋白表达均增高(P <0. 05)。免疫组化发现,NS组和Therapy组Dystro-phin表达均增加,但Therapy组明显高于NS组(P <0. 05)。结论肌肉注射CB-MNCs可有效促进腓肠肌失神经损伤的伤口愈合,缓解萎缩、促进肌肉修复,并降低凋亡细胞比例。