二甲双胍减轻阿霉素诱导的心脏毒性:基于AMPK通路

目的探究AMPK通路是否以及如何影响二甲双胍调节体内阿霉素心脏毒性的能力。方法临床研究:以123例使用阿霉素进行阶段性化疗的髓系白血病、非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌患者为研究对象,其中80例未联用二甲双胍(对照组),43例联用二甲双胍(200 mg/d,试验组)治疗。首先对两组患者进行基线资料对比,再使用自身对照及组间对照方法,回顾分析两组患者用药前后心肌损伤指标[血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平、乳酸脱氢酶(LDH)]水平及心衰相关指标[血浆B型钠尿肽(BNP)、左心室射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS)]等的变化。基础研究:以24只6周龄AMPKα2基因敲除小鼠(AKO)为研究对象,24只6周龄C57BL/6野生型小鼠(WT)为对照,将AKO组和WT组小鼠组内再随机分为4组,分别是对照组(Con)、二甲双胍组(MET)、阿霉素组(DOX)及二甲双胍联合阿霉素组(MET+DOX),6只/组。对上述各组小鼠行血清LDH、肌钙蛋白I(cTnI)、心肌细胞凋亡水平检测,心功能FS测定。结果临床研究结果:两组患者化疗前血CK-MB、LDH、BNP水平及左心室EF、FS值无差别。化疗后对照组血CK-MB、LDH及BNP水平显著高于化疗前,EF及FS显著低于化疗前(P<0.05);而试验组血CK-MB、LDH及BNP水平明显低于化疗前(P<0.05),EF及FS较化疗前无明显变化(P>0.05)。比较两组患者化疗后上述指标发现,试验组患者化疗后血CK-MB、LDH及BNP水平明显低于对照组,EF值及FS值明显高于对照组(P<0.05)。基础研究结果:心功能检测结果显示,阿霉素单药干预可使两组小鼠FS均显著降低,但AKO组FS降低程度轻于WT组(P<0.05);二甲双胍与阿霉素共同干预,可使WT组降低的FS有所提高(P<0.05),但对AKO组降低的FS无明显改善;血清学指标检测结果显示,阿霉素单药干预可使两组小鼠LDH和cTnI均显著升高,但AKO组升高程度轻于WT组(P<0.05);二甲双胍与阿霉素共同干预,可使WT组小鼠升高的LDH和cTnI有所降低(P<0.05),但对AKO组升高的LDH和cTnI无明显改善(P>0.05);心肌细胞凋亡水平检测结果显示,阿霉素单药干预可使两组小鼠心肌细胞凋亡水平显著升高(P<0.01),但AKO组细胞凋亡程度轻于WT组(P<0.05)。结论阿霉素在临床应用时可能引起患者心脏毒性作用,阿霉素联合二甲双胍后在一定程度减轻了心脏毒性,AMPK可能在二甲双胍抗阿霉素心脏毒性时发挥作用。

多部位起搏的急性血流动力学对比研究

目的 :比较右心室双部位起搏、双心室同步起搏、右心室心尖部起搏、右心室流出道起搏、左心室基底部起搏等 5种不同起搏模式对血流动力学的影响。方法 :15例患者男 10例 ,女 5例 ,年龄 6 6± 6 4岁。其中病态窦房结综合征 8例 ;Ⅲ度房室传导阻滞 7例。分别行右心室心尖部、右心室流出道、右心室双部位起搏、左心室基底部及双心室同步起搏 (VVI ,6 0～ 90次 /分 ) ,测定心输出量(CO)、心脏指数 (CI)、肺毛细血管嵌顿压 (PCWP)、QRS波群宽度和电轴。结果 :①与右心室心尖部起搏相比 ,右心室流出道、右心室双部位、左心室基底部、双心室同步起搏的CO、CI显著增加 ,PCWP明显降低 (P均 <0 0 1) ;②右心室双部位、双心室同步起搏较右心室流出道、左心室基底部起搏的CO、CI增高而PCWP降低 (P均 <0 0 5 ) ;③右心室双部位与双心室同步起搏、右心室流出道与左心室基底部起搏之间CO、CI和PCWP无显著差异 ;④右心室双部位、双心室同步起搏的QRS波群宽度较右心室心尖部、右心室流出道、左心室基底部起搏显著缩短 (P均 <0 0 1) ,而左心室基底部起搏与右心室心尖部起搏间无显著差异。结论 :右心室双部位起搏和双心室同步起搏的急性血流动力学效果无明显差异 ,但双部位起搏的效果明显优于单部位起搏 ;

参附注射液联合阿司匹林、氯吡格雷治疗急性心肌梗死的疗效观察

目的:探讨参附注射液联合阿司匹林、氯吡格雷治疗急性心肌梗死的疗效。方法:选取2017年6月至2018年6月西安交通大学第二附属医院收治的急性心肌梗死患者160例,以随机数字表法分为对照组与观察组,每组80例。对照组患者给予阿司匹林联合氯吡格雷治疗,观察组患者在对照组基础上加用参附注射液。观察两组患者的临床治疗效果(包括临床症状疗效与心电图疗效),记录患者的病死情况。结果:观察组患者的临床症状总有效率为90.0%(72/80),明显高于对照组的57.5%(46/80),差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者的心电图总有效率为82.5%(66/80),明显高于对照组的52.5%(42/80),差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者的病死率为10.0%(8/80),明显低于对照组的37.5%(30/80),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:参附注射液联合阿司匹林、氯吡格雷治疗急性心肌梗死的疗效显著,可提高患者生存率。

PBL教学模式在高等医学教学改革中的应用分析

目的探讨PBL教学模式在高等医学教学改革中的应用及其效果。方法选取我学院2015级临床医学专业的学生50名,随机分成对照组以及研究组各25名,对照组学生进行常规教学,研究组学生采用PBL教学模式进行教学,采用考试成绩以及教学成果方法进行教学评估。结果研究组教学质量优良率高于对照组(P <0.05),研究组学生学习成绩总分优于对照组(P <0.05)。结论 PBL教学模式是一种跨学科的学习方式,突出了学生为主体的教学理念,更好的训练医学生的临床思维,使之成为更加成熟的教学模式。

替格瑞洛对冠心病患者血浆内脂素、血清氧化应激标志物水平及疗效的影响

目的探讨替格瑞洛对冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者血浆内脂素、血清氧化应激标志物水平及疗效的影响。方法选择2015年9月至2017年9月于西安交通大学第二附属医院收治的冠心病患者95例,随机分为观察组(n=48)和对照组(n=47)。对照组给予常规氯吡格雷治疗,观察组为替格瑞洛治疗,其他治疗方案两组相同,干预时间均为12周。治疗结束后比较两组患者血浆内脂素、血清氧化应激标志物水平、疗效及不良反应的发生情况。结果治疗后,观察组总有效率89.58%,高于对照组的70.21%(P<0.05);两组治疗后的晚期蛋白质氧化产物(AOPP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和晚期糖基化终末产物(AGEs)水平比较,观察组均显著优于对照组(P<0.01);观察组治疗后的血浆内脏脂肪素水平显著低于对照组(P<0.01)。观察组不良反应发生率为6.25%;对照组为21.28%,观察组不良反应发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论在冠心病患者中应用替格瑞洛治疗效果显著,可有效改善血浆内脂素、血清氧化应激标志物水平,减少不良反应。

尿酸对高血压糖尿病合并冠心病患者冠脉狭窄程度的相关性研究

探讨尿酸对高血压糖尿病合并冠心病患者的冠状动脉狭窄程度的影响。方法 选取2020年-2021年间在我科就诊的高血压糖尿病中疑似冠心病的患者为研究对象,采集空腹血脂、血清尿酸等生化指标,记录其一般临床资料。以SYNTAX积分SS=20对于冠脉狭窄程度分为低风险组以及高风险组。采用SPSS25进行数据分析,比较各组之间的差异性以及相关尿酸水平与SYNTAX积分的相关性。结果 最终纳入研究对象101例,其中男性77例,女性24例。SS≤20低危险组43例,SS>20高危险组58例。两组间对比其尿酸及低密度胆固醇水平具有显著性差异,分别为﹙360.02±65.96mmol/LVS439.43±92.22mmol/L,t=4.81,p<0.01);﹙2.6±0.85mmol /LVS3.6±1.03mmol/L,t=5.42,p<0.01﹚;与Syntax积分行双变量Pearson相关分析,相关系数分别为﹙r=0.628,p<0.01;r=0.637,p<0.01﹚。多因素logistic回归分析显示:尿酸OR=1.013,95%可信区间为(1.004-1.021);低密度脂蛋白胆固醇OR=3.23,95%可信区间为(1.65-6.32);p<0.01。ROC曲线显示低密度脂蛋白胆固醇联合尿酸在高血压糖尿病合并冠心病患者中对其冠脉SYNATX积分大于20的灵敏度为74.1%,特异度为83.7%,AUC=0.84,p<0.01,95%可信区间(0.762-0.918)约登指数为(Youden’sindex)0.579。结论 高尿酸及低密度脂蛋白胆固醇对高血压糖尿病合并冠心病患者冠脉狭窄程度具有显著影响,与Syntax积分正相关,可预测患者冠脉病变程度。

右室单双部位起搏对心功能和QRS宽度的影响

目的 :比较右室双部位 (RV- Bi)起搏与右室心尖部 (RVA )、右室流出道 (RVOT)起搏对心功能的影响及 RQS宽度的变化。方法 :患者 15 (男 10 ,女 5 )例 ,年龄 66± 6岁 ,其中病态窦房结综合征 (SSS) 8例 ,三度房室阻滞 ( °AVB) 7例。分别行 RVA,RVOT,RV- Bi起搏 (VVI,60～ 90· min- 1 ,测定心排出量 (CO)和心脏指数 (CI)、平均肺动脉压 (m PAP)和肺毛细血管嵌顿压 (RCWP) ,QRS宽度 (QRSd)和电轴 (QRSa)。结果 :1与 RVA起搏 (CO:4.16±0 .5 1L/ min;CI:2 .3 9± 0 .3 4L· min- 1 · m- 2 ;PCWP:17.5± 3 .7mm Hg)相比 ,RVOT起搏 (CO:4.42± 0 .63 L/min;CI:2 .5 7± 0 .45 L· min- 1· m- 2 ;PCWP:14.9± 3 .7m m Hg)和 RV- Bi起搏 (CO:4.77± 0 .69L/ min;CI:2 .76± 0 .5 3 L· m in- 1 · m- 2 ;PCWP:13 .7± 3 .1mm Hg) CO,CI显著增加、PCWP明显降低 (P<0 .0 5～ 0 .0 1) ;2 RV - Bi起搏较 RVOT起搏的 CO,CI增高 (P<0 .0 1)而 PCWP降低 (P<0 .0 5 ) ;3 RVOT,RV- Bi起搏的 QRSd(分别为12 8± 11ms;111± 16m s)较 RVA起搏时 (146± 18m s)显著缩短 (P<0 .0 5～ 0 .0 1) ;RV - Bi起搏又比 RVOT起搏明显缩短 (P<0 .0 1)。结论 :右室双部位 (RV- Bi)起搏的心功能明显优于 RVA,RVOT等单部位起搏 ;

右室双部位起搏与双室同步起搏的急性血液动力学对比研究

比较右室双部位 (RV Bi)起搏和双室 (BiV)同步起搏对血液动力学的影响 ,并与右室心尖部 (RVA)、右室流出道 (RVOT)、左室基底部 (LVB)起搏相比较 ,明确双部位起搏是否优于单部位起搏。 15例患者中病窦综合征 8例、Ⅲ度房室阻滞 7例。分别行RVA、RVOT、LVB、RV Bi、BiV起搏 (VVI,6 0～ 90次 /分 ) ,测定心输出量 (CO)和心脏指数(CI)、肺毛细血管嵌顿压 (PCWP)和QRS波时限 (QRSd)。结果 :①与RVA起搏相比 ,RVOT、LVB、RV Bi、BiV起搏CI分别增加了 7.5 %、11.3%、15 .5 %和 17.2 % ,PCWP分别降低了 14.9%、10 .3%、2 1.7%和 2 0 .0 % (P均 <0 .0 1)。②RV Bi、BiV起搏较RVOT、LVB起搏的CO、CI增高而PCWP降低 (P均 <0 .0 5 )。③RV Bi与BiV起搏、RVOT与LVB起搏之间CO、CI和PCWP无显著差异。④RVOT、RV Bi、BiV起搏的QRSd(分别为 12 8± 11,111± 16 ,10 3± 13ms)较RVA起搏 (146± 18ms)时显著缩短 (P≤ 0 .0 0 1) ,而LVB起搏 (142± 15ms)与RVOT、RVA起搏时无显著差异。结论 :RV Bi起搏和BiV同步起搏的急性血液动力学效果无明显差异 ,但双部位起搏的效果明显优于单部位起搏 ;

美托洛尔联合阿托伐他汀治疗对心肌梗死患者心功能、凝血功能的影响

目的美托洛尔联合阿托伐他汀治疗对心肌梗死患者心功能、凝血功能的影响。方法选取2017年10月-2019年1月我院收治的心肌梗死患者72例,按随机数字表法分为对照组和观察组,各36例。两组患者均给予常规基础治疗,对照组联合美托洛尔治疗,观察组在对照组治疗基础上联合阿托伐他汀治疗。比较两组治疗前、治疗后4周心功能和凝血功能指标及不良反应发生情况。结果治疗后4周,两组心功能指标较治疗前均改善,且观察组LVEF、LVEDV、LVESV水平均高于对照组,LVEDD水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组凝血功能指标较治疗前均改善,且观察组APTT、PT均高于对照组,FIB、PLT水平均低于对照组(P<0.05)。两组治疗过程中肝功能受损、肌球蛋白血症、胃肠道反应、头痛眩晕及失眠多梦等不良反应发生率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论美托洛尔联合阿托伐他汀治疗可重塑心肌梗死患者的心功能,改善患者凝血功能,且安全性高。

新媒体的特点及其在医学教育中应用

新媒体不仅是技术平台,也是媒体机构,促进了传统媒介的深度融合,展现出平民化、泛化、碎片化的特点,并具有和跨越时空互动性和智能媒体学习能力。大量的新媒体平台,如慕课、微型学习、微信群、医学公众平台、易班等与传统教育资源地充分融合正在从根本上丰富和改善了原有教学模式,从而在推进学历教育、继续医学教育和科学知识普及、专业期刊出版等方面发挥重要作用。

基质金属蛋白酶2,9基因多态性与早发冠心病遗传易感性的研究

目的探讨中国陕西地区汉族人群基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)基因rs2285053及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因rs3918242单核苷酸多态性与早发冠心病(premature coronary artery disease,PCAD)发病的关联性。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法 ,检测92例PCAD患者(PCAD组)和95例年龄及性别相匹配的非冠心病者(对照组)的rs2285053(-735C/T)、rs3918242(-1562C/T)基因的单核苷酸基因多态性,判定其基因型并统计各基因型及等位基因的频率。ELISA法检测血浆MMP-9的水平。结果 MMP-2rs2285053位点多态性在PCAD组和对照组中的基因型分布和等位基因频率差异无统计学意义(χ2=1.33,P=0.249)。MMP-9rs3918242位点PCAD组C/T+T/T型高于对照组(χ2=6.22,P=0.013),T基因频率亦高于对照组,有显著性差异(χ2=7.75,P=0.005,OR=2.66)。早发急性冠脉综合征组(premature acute coronary syndrome,PACS)C/T+T/T型高于对照组,与早发稳定性心绞痛相比差异无统计学意义(χ2=9.11,P=0.003;χ2=2.29,P=0.13),早发稳定性心绞痛与对照组相比差异亦无统计学意义(χ2=1.3,P=0.254)。Logistic回归分析显示,MMP-9rs3918242位点携带T等位基因为PCAD发病的独立危险因素。结论 MMP-2rs2285053(-735)位点多态性可能与PCAD的发病无相关性,MMP-9rs3918242位点可能与PCAD及PACS发病相关,rs3918242(-1562)T等位基因可能是PCAD的遗传易感基因。

CYP2C9和VKORC1基因多态性对华法林稳态治疗剂量及个体化抗凝疗效的影响

目的探讨非瓣膜病房颤患者华法林CYP2C9和VKORC1基因多态性对药物稳态治疗剂量及个体化抗凝疗效的影响。方法收集2015-06~2017-03在西安交通大学第二附属医院心内科门诊及住院的非瓣膜病房颤患者,应用CHA2DS2-VASc和HAS-BLED评分系统进行评估。将接受口服抗凝治疗患者分为传统对照组(从小剂量1.5-3.0 mg/d开始的传统给药方案)和个体化治疗组(采用国际权威推荐的华法林个体化剂量预测模型计算华法林初始抗凝治疗剂量),进行华法林CYP2C9和VKORC1基因多态性检测,监测国际标准化比值(INR),计算服药后INR达标时间,观察华法林稳态治疗剂量与初始推荐治疗剂量的相关性,以及药物相关不良事件发生。结果共纳入非瓣膜病房颤患者678例,134例患者接受口服华法林抗凝药物治疗方案,约占19.8%。传统对照组(n=65)和个体化治疗组(n=69)患者在年龄(P=0.016)、华法林初始推荐治疗剂量(P<0.001)和达标时间(P<0.001)方面差异具有统计学意义,随访期间均未观察到药物相关不良事件的发生。CYP2C9*2(R144C,C>T)野生CC型,杂合突变CT型和纯合突变TT型分别为100%,0%和0%;CYP2C9*3(I359L,A>C)野生AA型,杂合突变AC型和纯合突变CC型分别为95.7%,4.3%和0%;VKORC1(1639,G>A)野生GG型,杂合突变GA型和纯合突变AA型分别为0%,17.4%和82.6%。计算的华法林推荐治疗剂量CYP2C9*2 CC型为(3.24±0.91)mg/d,CYP2C9*3 AA型和AC型分别为(3.31±0.90)mg/d和(2.24±0.16)mg/d,VKORC1 GA型和AA型分别为(3.81±1.34)mg/d和(3.10±0.75)mg/d。线性相关分析显示华法林稳态治疗剂量与年龄呈显著负相关(r=-0.589,P<0.001),与身高(r=0.384,P=0.033)和基于公式计算的华法林初始推荐治疗剂量(r=0.935,P<0.001)呈显著正相关。多元线性回归分析结果显示,年龄、CYP2C9*3和VKORC1是华法林推荐治疗剂量的独立影响因素。两组患者均未观察到药物相关血栓栓塞及出血事件的发生。结论在非瓣膜病房颤患者中进行华法林CYP2C9和VKORC1基因多态性的检测,能够缩短达标时间、指导确定药物抗凝治疗剂量,有助于更好地指导华法林药物个体化抗凝治疗策略。

ABCG1在肿瘤坏死因子α诱导的氧化应激中的机制研究

目的探讨三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ABCG1)在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的氧化应激中的作用及可能的机制。方法人脐静脉内皮细胞被特异性ABCG1 si RNA或ABCG1过表达质粒转染或使用LXR(肝X受体)激活剂T0901317预处理,随后给予肿瘤坏死因子(TNF-α)干预12 h。采用DCFHDAAM(2’7’-二氯荧光双乙酸盐)荧光探针检测细胞内活性氧簇(ROS)的水平,分光光度仪测量还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷(NADPH)氧化酶活性,实时荧光定量聚合酶链反应法(q RT-PCR)和Western blot检测内皮细胞NADPH氧化酶亚型非吞噬细胞氧化酶4(NOX4)表达及超氧化物歧化酶(SOD)的表达。结果 ABCG1表达上调抑制TNF-α诱导的氧化应激,同时抑制促氧化应激的NADPH氧化酶的活性和NOX4的表达,促进抗氧化的SOD表达。相反,ABCG1表达下调进一步诱导ROS的产生,诱导NADPH氧化酶的活性和NOX4的表达,抑制SOD1表达。结论 ABCG1通过调节NADPH氧化酶/SOD抑制TNF-α诱导的氧化应激。

N末端脑钠肽及基质金属蛋白酶-9与非ST段抬高急性冠脉综合征的早期心室重构的关系

目的:探讨N末端脑钠肽(NT-proBNP)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在判断非ST段抬高急性冠脉综合征早期心室重构中的作用及相互关系。方法:选择连续住院的非ST段抬高急性冠脉综合征患者57例,分为高危组(n=17)、中危组(n=15)及低危组(n=25),并设正常对照组(n=29)。冠状动脉造影前抽取股动脉血,测定NT-proBNP及MMP-9浓度。分别于造影前后3天内及造影后10～14天内行超声心动图检查。结果:各组间NT-proBNP、MMP-9水平及射血分数、左心室质量指数(LVMI)差异具有统计学意义(除射血分数在中危组和低危组之间P>0.05外,其余P均<0.05)。在高危组,NT-proBNP与MMP-9呈正相关(r=0.574,P=0.025),NT-proBNP与LVMI呈正相关(r=0.617,P=0.014);MMP-9与射血分数呈负相关(r=-0.542,P=0.025)。结论:联合检测NT-proBNP及MMP-9对判定高危非ST段抬高急性冠脉综合征早期心室重构具有重要意义。

人Na^+、K^+-ATPase α1亚单位M1～M2膜外区片段结合活性的研究

目的研究包含人Na+、K+-ATPaseα1亚单位M1～M2膜外区的多肽片断(HES1衍生物),是否具有与哇巴因结合的能力。方法采用Fmoc固相合成法进行多肽合成,产物经HPLC纯化,并进行质谱分析。然后采用放射性配体受体结合法检测其与哇巴因的结合能力。结果人Na+、K+-ATPaseHES1衍生物与3H-哇巴因具有一定的结合能力。3H-ouabain与Na+,K+-ATPaseHES1衍生物结合的平衡解离常数为24.58nmol·L-1,受体密度为492.43fmol·mg-1蛋白。IC50=3.078×10-7mol·L-1。结论人Na+、K+-ATPaseHES1衍生物具有与哇巴因结合的活性,为其作为一种新型药物奠定实验基础。

不稳定型心绞痛患者应用小剂量尿激酶前后内皮源性血管活性物质的变化(英文)

目的分析不稳定型心绞痛患者应用小剂量尿激酶治疗前后内皮源性血管活性物质的变化,探讨小剂量尿激酶治疗心绞痛的机理。方法选择104例心电图负荷试验阳性、动态心电图出现缺血性改变的不稳定型心绞痛患者,于小剂量尿激酶治疗前后分别测定内皮素-1、组织型纤溶酶原激活物及其抑制剂的变化。结果小剂量尿激酶治疗后与治疗前相比较,组织型纤溶酶原激活物升高,内皮素-1及组织型纤溶酶原激活物抑制剂下降,其变化均具有显著性。结论小剂量尿激酶可明显调节不稳定型心绞痛患者常测定的内皮源性血管活性物质如内皮素-1、组织型纤溶酶原激活物及其抑制剂的活性,从而有效的治疗冠心病。

抗哇巴因鸡蛋黄抗体IgY的制备

目的制备出高特异性的抗哇巴因多克隆抗体,为进一步提高内源性哇巴因的检测的敏感性和特异性提供实验基础。方法采用不同剂量哇巴因-牛血清白蛋白耦联物(0.5 mg/kg;1.0 mg/kg)免疫母鸡,收集鸡蛋;采用聚乙二醇法分离、纯化鸡蛋黄中抗哇巴因抗体;用酶联免疫吸附法检测IgY(yolk immunoglobulin)的抗体效价。SDS-PAGE电泳分析IgY纯度。结果免疫后1周,鸡蛋黄中可检测出IgY;免疫后6周,鸡蛋黄中IgY的效价迅速升高,最高效价达到1∶10 240,持续至少4周。结果还显示,大剂量免疫母鸡获得高效价抗体持续时间较长。结论采用大剂量哇巴因-牛血清白蛋白耦联物免疫母鸡,可以获得较高效价的抗哇巴因IgY。该方法简单,高效价抗体持续时间长,是制备抗体较为有效的方法。

家兔颈动脉内支架置入后细胞凋亡的动态观察

目的 观察兔颈动脉内支架置入后细胞凋亡的动态变化 ,探讨细胞凋亡在再狭窄形成中的作用。方法 采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法 (TUNEL)及透射电镜 ,检测兔颈动脉内支架置入后 7、1 4、30、90d的细胞凋亡。结果 支架术后 7、1 4d未观察到平滑肌细胞凋亡 ,术后 30d在新生内膜中观察到明显的细胞凋亡 ,90d时单位面积内凋亡细胞数显著高于 30d〔(4 .5 0± 1 .2 9)vs (1 3.5 0± 1 .91 )个 /0 .1mm2 ,P <0 .0 0 1〕。透射电镜下凋亡细胞表现为胞浆浓缩 ,染色质浓缩成团 ,边聚于核膜形成新月体。结论 细胞凋亡是支架置入后再狭窄形成中一个重要的病理学特征 ,在后期明显增多 ,调节着新生内膜中平滑肌细胞的数量。

In-fusion技术构建表达、纯化钠泵α3亚单位膜外区截断性片段重组质粒

目的构建重组pGEX-6P-1原核表达载体，表达和纯化大鼠钠泵α3亚单位M1～M2和M3～M4膜外区的截断性片段。方法利用In-fusion技术将钠泵α3亚单位M1～M2和M3～M4膜外区基因片段插入线性化的pGEX-6P-1载体中，转化，提取质粒，PCR鉴定；用阳性重组质粒pGEX-Trf-α3转化大肠杆菌，IPTG诱导、表达融合蛋白GST—Trf-α3。采用Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化融合蛋白，SDS-PAGE电泳分析表达产物的可溶性及含量。采用放射性配体结合法检测其生物活性。结果PCR和基因测序分析显示大鼠钠泵a3亚单位M1～M2和M3～M4膜外区被成功插入pGEX-6P-1载体GST基因3’端，蛋白序列分析表明GsT-Trf-α3融合蛋白总长度262个氨基酸，理论相对分子质量应约为33．22×10^3。IPTG诱导后，GST-Trf-α3融合蛋白的表达量为10％，多以可溶性形式存在，可溶性蛋白表达量为80．8％。SDS-PAGE结果显示其纯度〉95％。生物活性实验结果显示GST—Trf-α3融合蛋白与^3H-哇巴因具有一定的结合能力，但结合能力较弱。结论采用In-fusion技术成功构建了表达GST-Trf-α3融合蛋白的原核表达载体，建立了纯化方法，获得高纯度的融合蛋白，为钠泵α3亚单位M1～M2和M3～M4膜外区功能以及其潜在的药理学作用研究获得了实验数据。