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猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立
被引量:
6
1
作者
朱吕昌
陈义平
+3 位作者
李明义
郭玉广
马爽
周洁
《中国动物检疫》
CAS
北大核心
2008年第11期22-25,共4页
目的建立可以同时检测猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速而可靠的PCR检测方法。方法和结果根据胸膜肺炎放线杆菌的Apx-VIA基因序列、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的16SrRNA基因序列设计5条引物。猪胸膜肺炎放线...
目的建立可以同时检测猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速而可靠的PCR检测方法。方法和结果根据胸膜肺炎放线杆菌的Apx-VIA基因序列、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的16SrRNA基因序列设计5条引物。猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌模板的PCR扩增产物大小分别为342bp,485bp和1258bp。复合PCR对1~12型猪胸膜肺炎放线杆菌标准株,6株多杀性巴氏杆菌标准株,1~15型副猪嗜血杆菌以及25株经生化鉴定确认为上述三种细菌的分离株的基因组DNA作为模板进行检测,均获得预期大小的扩增产物。以猪放线杆菌、吲哚放线杆菌等14种常见细菌作为阴性对照进行PCR检测,结果仅有支气管败血波氏杆菌产生了可以和上述三个特异性条带明显区分的PCR产物。复合PCR针对胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的敏感性分别为14pg、34pg和37pg。结论本研究建立的复合PCR特异性好,敏感性高,可以用于猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速检测。
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关键词
猪胸膜肺炎放线杆菌
多杀性巴氏杆菌
副猪嗜血杆菌
复合PCR
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职称材料
F18大肠杆菌黏附素受体结合域鉴定新方法
被引量:
4
2
作者
葛兆宏
陆广富
+7 位作者
朱军
郁磊
羊扬
原志伟
朱吕昌
吴圣龙
包文斌
朱国强
《扬州大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期1-5,共5页
运用DNA重组技术将F18ab和F18ac大肠杆菌黏附素fedF亚单位内的第60~109位氨基酸残基区段(fedF1)和fedF全基因克隆入V型分泌系统MisL的载客结构域上,经DNA测序确证其正确阅读框后,含重组菌质粒pnirBMisL-fedF或pnirBMisL-fedF1经厌氧诱...
运用DNA重组技术将F18ab和F18ac大肠杆菌黏附素fedF亚单位内的第60~109位氨基酸残基区段(fedF1)和fedF全基因克隆入V型分泌系统MisL的载客结构域上,经DNA测序确证其正确阅读框后,含重组菌质粒pnirBMisL-fedF或pnirBMisL-fedF1经厌氧诱导后,与断奶仔猪小肠上皮细胞进行体外黏附试验。结果表明:FUT1基因M307位点中GG型和AG型仔猪小肠上皮细胞均能黏附上述重组菌,而AA型个体小肠上皮细胞则不能黏附。上述重组菌均能与兔抗F18ab菌毛FedF亚单位单因子高免血清发生玻板凝集反应。而FedF突变体FedF(M)的重组质粒菌则失去上述凝集和黏附特性。证明F18大肠杆菌黏附素fedF基因及其基因片段fedF1在大肠杆菌表面得到了功能性表达,F18ab和F18ac黏附素FedF直接介导F18大肠杆菌与易感仔猪小肠上皮细胞表面大分子受体黏附结合,fedF1为黏附素FedF的受体主要结合域,其His88、His99是FedF黏附素受体结合域的重要氨基酸残基。
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关键词
F18大肠杆菌
黏附素FedF
V型分泌系统
自主转运蛋白
受体结合域
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职称材料
猪细小病毒结构蛋白VP2主要抗原表位区基因的克隆及原核表达
被引量:
4
3
作者
周洁
陈义平
+3 位作者
楚电峰
朱吕昌
罗飞
张秀娟
《中国动物检疫》
CAS
2009年第2期42-44,共3页
本文参照GenBank发表的猪细小病毒结构蛋白VP2基因序列,设计一对引物,通过PCR方法扩增出一段包含VP2主要抗原表位编码区的片段,产物克隆到pGEM-T载体上,酶切后插入原核表达载体pET-32(a)的T7启动子下游,构建的重组质粒pET-VP2经IPTG诱导...
本文参照GenBank发表的猪细小病毒结构蛋白VP2基因序列,设计一对引物,通过PCR方法扩增出一段包含VP2主要抗原表位编码区的片段,产物克隆到pGEM-T载体上,酶切后插入原核表达载体pET-32(a)的T7启动子下游,构建的重组质粒pET-VP2经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达。SDS-PAGE结果显示,表达产物分子量为39.1KDa,主要以包涵体形式存在。BandScan分析,表达量约占菌体蛋白的65.2%。表达产物用His亲和层析柱纯化。Western blotting结果显示,该种蛋白能与阳性血清发生特异性反应。结果说明,该重组蛋白具有抗原性,可以作为鉴别诊断用抗原。
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关键词
猪细小病毒
结构蛋白VP2
主要抗原表位
原核表达
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职称材料
新城疫病毒LaSota疫苗株的蚀斑纯化
被引量:
2
4
作者
楚电峰
杜元钊
+3 位作者
刘相娥
周洁
刘思思
朱吕昌
《畜牧与兽医》
北大核心
2009年第5期45-47,共3页
通过蚀斑克隆技术,对新城疫病毒LaSota疫苗株进行连续纯化,在原病毒株的基础上筛选到1株免疫原性较好的病毒纯化株,血凝效价从9log2提高到11log2,鸡胚半数感染量(EID50)从10^-9.1/0.1mL上升到10^-9.5/0.1mL。通过对纯化株的F...
通过蚀斑克隆技术,对新城疫病毒LaSota疫苗株进行连续纯化,在原病毒株的基础上筛选到1株免疫原性较好的病毒纯化株,血凝效价从9log2提高到11log2,鸡胚半数感染量(EID50)从10^-9.1/0.1mL上升到10^-9.5/0.1mL。通过对纯化株的F基因和HN基因进行测序,并与GenBank中已发表的新城疫病毒LaSota株基因序列进行比较发现,F和HN基因核苷酸序列的同源性分别在99.5%和98.6%,氨基酸同源性分别为99.1%和96.9%;F基因裂解位点区(112—117)氨基酸组成与原疫苗株完全一致。纯化株的鸡胚平均死亡时间(MDT)在109h、1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为0.375,与原疫苗株进行生物学特性比较,表明该纯化株比原疫苗株更适合用于疫苗生产。
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关键词
新城疫病毒
LaSota株
蚀斑
纯化
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职称材料
题名
猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立
被引量:
6
1
作者
朱吕昌
陈义平
李明义
郭玉广
马爽
周洁
机构
中国动物卫生与流行病学中心
扬州大学兽医学院
青岛易邦生物工程有限公司
出处
《中国动物检疫》
CAS
北大核心
2008年第11期22-25,共4页
基金
十一五国家科技支撑计划项目(2006BAD06A12)
文摘
目的建立可以同时检测猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速而可靠的PCR检测方法。方法和结果根据胸膜肺炎放线杆菌的Apx-VIA基因序列、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的16SrRNA基因序列设计5条引物。猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌模板的PCR扩增产物大小分别为342bp,485bp和1258bp。复合PCR对1~12型猪胸膜肺炎放线杆菌标准株,6株多杀性巴氏杆菌标准株,1~15型副猪嗜血杆菌以及25株经生化鉴定确认为上述三种细菌的分离株的基因组DNA作为模板进行检测,均获得预期大小的扩增产物。以猪放线杆菌、吲哚放线杆菌等14种常见细菌作为阴性对照进行PCR检测,结果仅有支气管败血波氏杆菌产生了可以和上述三个特异性条带明显区分的PCR产物。复合PCR针对胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的敏感性分别为14pg、34pg和37pg。结论本研究建立的复合PCR特异性好,敏感性高,可以用于猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速检测。
关键词
猪胸膜肺炎放线杆菌
多杀性巴氏杆菌
副猪嗜血杆菌
复合PCR
Keywords
Actinobacillus pleuropneumoniae
Pasteurella muhocida
Haemophilus parasuis
multiplex PCR
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
F18大肠杆菌黏附素受体结合域鉴定新方法
被引量:
4
2
作者
葛兆宏
陆广富
朱军
郁磊
羊扬
原志伟
朱吕昌
吴圣龙
包文斌
朱国强
机构
江苏畜牧兽医职业技术学院
扬州大学兽医学院
中华人民共和国荣成出入境检验检疫局
扬州大学动物科学与技术学院
出处
《扬州大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期1-5,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30571374
30771603)
+1 种基金
江苏省高校自然科学重大基础研究项目(08KJA230002)
科技部转基因生物新品种培育重大专项项目(2009ZX08006-004B)
文摘
运用DNA重组技术将F18ab和F18ac大肠杆菌黏附素fedF亚单位内的第60~109位氨基酸残基区段(fedF1)和fedF全基因克隆入V型分泌系统MisL的载客结构域上,经DNA测序确证其正确阅读框后,含重组菌质粒pnirBMisL-fedF或pnirBMisL-fedF1经厌氧诱导后,与断奶仔猪小肠上皮细胞进行体外黏附试验。结果表明:FUT1基因M307位点中GG型和AG型仔猪小肠上皮细胞均能黏附上述重组菌,而AA型个体小肠上皮细胞则不能黏附。上述重组菌均能与兔抗F18ab菌毛FedF亚单位单因子高免血清发生玻板凝集反应。而FedF突变体FedF(M)的重组质粒菌则失去上述凝集和黏附特性。证明F18大肠杆菌黏附素fedF基因及其基因片段fedF1在大肠杆菌表面得到了功能性表达,F18ab和F18ac黏附素FedF直接介导F18大肠杆菌与易感仔猪小肠上皮细胞表面大分子受体黏附结合,fedF1为黏附素FedF的受体主要结合域,其His88、His99是FedF黏附素受体结合域的重要氨基酸残基。
关键词
F18大肠杆菌
黏附素FedF
V型分泌系统
自主转运蛋白
受体结合域
Keywords
Escherichia coli F18
adhesin FedF
type V secretion system
autotransporter
receptor binding domain
分类号
S852.612 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
猪细小病毒结构蛋白VP2主要抗原表位区基因的克隆及原核表达
被引量:
4
3
作者
周洁
陈义平
楚电峰
朱吕昌
罗飞
张秀娟
机构
中国动物卫生与流行病学中心诊断试剂室
扬州大学兽医学院
出处
《中国动物检疫》
CAS
2009年第2期42-44,共3页
基金
"十一五"国家科技支撑项目(2006BAD06A12)
文摘
本文参照GenBank发表的猪细小病毒结构蛋白VP2基因序列,设计一对引物,通过PCR方法扩增出一段包含VP2主要抗原表位编码区的片段,产物克隆到pGEM-T载体上,酶切后插入原核表达载体pET-32(a)的T7启动子下游,构建的重组质粒pET-VP2经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达。SDS-PAGE结果显示,表达产物分子量为39.1KDa,主要以包涵体形式存在。BandScan分析,表达量约占菌体蛋白的65.2%。表达产物用His亲和层析柱纯化。Western blotting结果显示,该种蛋白能与阳性血清发生特异性反应。结果说明,该重组蛋白具有抗原性,可以作为鉴别诊断用抗原。
关键词
猪细小病毒
结构蛋白VP2
主要抗原表位
原核表达
Keywords
porcine parvovirus
structural protein VP2
major eptiope domain
Prokaryotic Expression
分类号
S852.659.2 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
新城疫病毒LaSota疫苗株的蚀斑纯化
被引量:
2
4
作者
楚电峰
杜元钊
刘相娥
周洁
刘思思
朱吕昌
机构
扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病重点开放实验室
青岛易邦生物工程有限公司
出处
《畜牧与兽医》
北大核心
2009年第5期45-47,共3页
文摘
通过蚀斑克隆技术,对新城疫病毒LaSota疫苗株进行连续纯化,在原病毒株的基础上筛选到1株免疫原性较好的病毒纯化株,血凝效价从9log2提高到11log2,鸡胚半数感染量(EID50)从10^-9.1/0.1mL上升到10^-9.5/0.1mL。通过对纯化株的F基因和HN基因进行测序,并与GenBank中已发表的新城疫病毒LaSota株基因序列进行比较发现,F和HN基因核苷酸序列的同源性分别在99.5%和98.6%,氨基酸同源性分别为99.1%和96.9%;F基因裂解位点区(112—117)氨基酸组成与原疫苗株完全一致。纯化株的鸡胚平均死亡时间(MDT)在109h、1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为0.375,与原疫苗株进行生物学特性比较,表明该纯化株比原疫苗株更适合用于疫苗生产。
关键词
新城疫病毒
LaSota株
蚀斑
纯化
分类号
S852.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立
朱吕昌
陈义平
李明义
郭玉广
马爽
周洁
《中国动物检疫》
CAS
北大核心
2008
6
下载PDF
职称材料
2
F18大肠杆菌黏附素受体结合域鉴定新方法
葛兆宏
陆广富
朱军
郁磊
羊扬
原志伟
朱吕昌
吴圣龙
包文斌
朱国强
《扬州大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010
4
下载PDF
职称材料
3
猪细小病毒结构蛋白VP2主要抗原表位区基因的克隆及原核表达
周洁
陈义平
楚电峰
朱吕昌
罗飞
张秀娟
《中国动物检疫》
CAS
2009
4
下载PDF
职称材料
4
新城疫病毒LaSota疫苗株的蚀斑纯化
楚电峰
杜元钊
刘相娥
周洁
刘思思
朱吕昌
《畜牧与兽医》
北大核心
2009
2
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
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引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
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