利用SSH技术分析盐胁迫下甜菜M14品系的差异基因

甜菜M14品系是利用野生白花甜菜(Beta corolliflora Zoss.)与栽培甜菜(Beta vulgaris L.)进行种间杂交及回交获得的附加有野生白花甜菜第9号染色体的单体附加系,具有野生白花甜菜的一些优良性状。本研究利用抑制消减杂交技术,以未处理的甜菜M14品系叶片作为Driver,以500 mmol·L-1NaCl处理的甜菜M14品系叶片作为Tester,构建了盐胁迫下甜菜M14品系抑制消减cDNA文库;以地高辛为标记物,进行反向Northern Blot杂交筛选并测序,共获得盐胁迫下甜菜M14品系特异ESTs序列449个,组装后共得到58条Unigenes,并将测序所得结果进行了GO分类。该研究为进一步鉴定和挖掘甜菜M14品系新的优质基因资源奠定了基础。

甜菜M14品系BvM14-SAMS2基因的克隆及表达特异性分析

甜菜M14品系富含丰富的优质基因资源,对盐、寒冷、干旱等非生物胁迫具有极强的耐受性,是研究逆境胁迫极为难得的材料。课题组前期以甜菜M14品系为试验材料,在500mmol/L NaCl胁迫下,从蛋白质水平筛选获得了76个差异蛋白质点,在转录水平筛选获得了58个Unigenes序列,二者匹配得到了蛋白质点——BvM14-SAMS2。试验采用RACE技术,克隆获得甜菜M14品系BvM14-SAMS2基因cDNA全长1 538bp,包含最大开放阅读框ORF 1 182bp,编码393个氨基酸。采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术对甜菜M14品系BvM14-SAMS2基因的表达特异性进行分析,结果表明,在正常生长条件下,BvM14-SAMS2基因在甜菜M14品系根、茎、叶、花中的表达量大小依次为:根>叶>花>茎。受盐胁迫诱导,BvM14-SAMS2基因在甜菜M14品系叶片中的表达量随着盐浓度的增大而增大,根中的表达量随着盐浓度的增大无明显变化。研究结果表明,BvM14-SAMS2基因在甜菜M14品系叶片中受盐胁迫诱导表达,该基因在胁迫下的表达量增加可能有利于植物抵御盐胁迫损伤。