老龄小鼠胸腺内皮细胞的变化

目的研究老化引起胸腺萎缩和功能减低的相关机制。方法用组织化学和免疫荧光染色方法分析胸腺皮质和髓质结构;用BrdU标记流式细胞仪方法研究胸腺内皮细胞增殖;细胞凋亡测定用TUNNEL流式细胞仪方法。结果老龄小鼠胸腺内皮细胞增殖阳性率6.7%,对照年轻小鼠为9.2%。老龄小鼠胸腺内皮细胞凋亡率为11.3%,对照年轻小鼠为2.6%。老龄小鼠胸腺结构出现退行性改变。结论老化引起胸腺内皮细胞增殖能力下降、凋亡率增加和胸腺结构出现退行性改变,可能是老年胸腺萎缩免疫力降低的原因之一。

UC-MSC经PI3K/AKT信号通路影响人肺腺癌A549细胞的凋亡和增殖

目的:探讨人脐带来源间充质干细胞(umbilical cord-derived mesenchymal stem cell, UC-MSC)经PI3K/AKT信号通路对人肺腺癌A549细胞凋亡和增殖的影响及其作用机制。方法:采用酶消化法从人脐带组织中分离UC-MSC并进行体外培养,用流式细胞术鉴定所得到的UC-MSC的免疫表型。收集UC-MSC培养上清,建立UC-MSC条件培养基与肺腺癌A549细胞株的体外间接共培养体系。采用CCK-8法检测A549细胞增殖率,通过Annexin V/PI染色流式细胞术检测A549细胞的凋亡率,通过PI染色法判断肿瘤细胞的细胞周期分布;qPCR实验检测CyclinD1、BAX、Bcl-2等PI3K/AKT通路下游凋亡与增殖相关基因的转录水平;Wb测定PI3K/AKT通路相关蛋白质表达水平。结果:人脐带组织分离培养3周后,可见纤维状细胞铺满培养瓶,平行排列或呈旋涡状生长。流式细胞术检测发现所得细胞表达MSC标志分子CD73、CD90、CD105,不表达CD45和HLA-DR。UC-MSC条件培养基与肺腺癌A549细胞株在体外间接共培养后,与对照组比较,A549细胞的增殖率明显降低、凋亡率明显升高,其细胞周期明显停滞在G1期(均P<0.01)。PI3K/AKT信号通路相关分子CyclinD1和Bcl-2转录下调、BAX的转录上调(均P<0.01);UCMSC条件培养基培养的A549细胞总AKT水平不变,p-AKT蛋白表达呈剂量性依赖下降(P<0.01)。结论:UC-MSC明显影响肺腺癌A549细胞的增殖和凋亡能力,细胞周期停滞在G1期,其主要作用机制是UC-MSC抑制A549细胞PI3K/AKT信号通路,为探索UC-MSC临床应用的安全性和有效性提供实验依据。

Foxn1在小鼠胸腺增龄性萎缩中的作用

目的探讨Foxn1在小鼠胸腺增龄性萎缩中的作用。方法 SPF级C57BL/6小鼠分成老龄组(18个月)、中龄组(12个月)、中青龄组(6个月,4个月)、青龄组(1个月),每组雌雄各6只。无菌取胸腺,比较小鼠胸腺重量、胸腺指数及胸腺细胞数;应用Real-time PCR技术检测胸腺组织中Foxn1基因的表达。结果小鼠胸腺重量及胸腺细胞数随年龄增长显著减少(P<0.05,P<0.01);C57BL/6小鼠胸腺Foxn1相对表达量分别为:1月龄(0.909±0.119),6月龄(0.689±0.108),12月龄(0.240±0.063),18月龄(0.047±0.010),表现为随年龄增长显著下调(P<0.05)。结论Foxn1参与了胸腺的发育、成熟和退化萎缩各个阶段,Foxn1表达降低破坏了胸腺微环境,导致胸腺增龄性萎缩。

肿瘤免疫逃逸机制的研究新进展

目的:探讨肿瘤免疫逃逸的机制,指导肿瘤治疗理论研究。方法:应用NCBI的PubMed文献数据库,以"肿瘤免疫逃逸、T淋巴细胞、髓源性抑制性细胞,免疫抑制因子,胸腺萎缩"等为关键词,检索2005至2010相关文献。最后纳入分析40余篇文献。结果:肿瘤细胞可通过多种途径逃避机体免疫系统的监视,包括肿瘤对T淋巴细胞的功能抑制,诱导分化出免疫抑制细胞如髓源性抑制细胞,调节性T细胞等。同时肿瘤可导致免疫抑制因子如IL-10,IL-4、TGF-β、VEGF、IDO、COX-2的上调。促进免疫器官胸腺的萎缩。结论:肿瘤免疫逃避机制十分复杂,深刻认识肿瘤免疫逃逸机制,有助于肿瘤防治研究的深入。

HDL-c和LDL-c同时测定法——Dextran-Mg^(2+)法的研究

用硫酸葡聚糖和氯化镁作沉淀剂分离脂蛋白,以酶法同步测定HDL-c和LDL-c,VLDL-c及TC,经脂蛋白电泳鉴定证明本沉淀剂沉淀效果符合要求。检测HDL-c及LDL-c重复性好。检测健康成人180例,结果与国内外报道一致。

X射线对肺癌细胞系p57^(kip2)转录表达的影响

目的:研究X射线对肺癌细胞系NCI-H226和A549的印记基因p57kip2转录表达的影响。方法:对数生长期的肺癌细胞系NCI-H226和A549,分别予以2、4、8和12GyX射线照射,并于照射前和照射后6、12、24、36和48h分别提取RNA,采用RT-PCR技术检测各时相p57kip2mRNA的含量,分析不同剂量X射线照射后对其转录水平的影响。结果:两组肺癌细胞p57的转录表达在不同照射剂量和不同时间水平间差异有统计学意义,P<0·05,A549经过X射线照射后,p57kip2的mRNA含量明显升高,且与照射剂量呈线性依赖关系;NCI-H226虽然未见明显规律,但在X射线照射后的峰值mR-NA含量均明显升高。结论:X射线照射后能够上调肺癌细胞p57kip2的mRNA的表达,预示着p57可能参与了放射线所致细胞周期重新分布和细胞凋亡的过程,并且可能预测肺癌细胞的放射敏感性,但其表达与时间剂量的关系尚需要进一步研究。

急性白血病血清与白细胞内乳酸脱氢酶及其同功酶的研究

本文采用EncoreⅡ型离心式全自动生化分析仪和聚丙烯酰胺凝胶电泳法对67例未经治疗的急性白血病血清LDH和其中48例血清LDH同功酶、7例白细胞内LDH同功酶进行了同步测定;并对部分患者治疗前后进行了动态观察。结果表明:急性白血病患者的血清LDH明显高于正常;血清与白细胞内的LDH_3/LDH_1>1;血清LDH及其同功酶,特别是LDH同功酶可作为疗效观察、复发早期诊断的辅助指标。

LDL和HDL对培养的人血管内皮细胞的影响

本文以不同胆固醇浓度的低密度脂蛋白和高密度脂蛋白或将其混合,施加于培养呈融合状态的人脐带静脉血管内皮细胞。通过相差显微镜、扫描电镜和透射电镜观察,发现LDL对内皮细胞有损伤作用,并随所含胆固醇浓度的增高,其损伤程度加重,损伤机制可能与脂质过氧化物的增加有关。HDL对内皮细胞有保护作用,可使其免遭LDL的损伤,可能与HDL可阻止LDL所引起内皮细胞膜中胆固醇的过多或毒性堆积等有关。

癫痫与微小RNA和生酮饮食的研究进展

微小RNA(microRNA,miRNA)与癫痫的发生发展过程有重要关系,可通过调控其靶基因参与信号传导通路,发挥着类似于癌基因或抑癌基因的作用,目前已发现多种miRNA与癫痫关系密切。生酮饮食(ketogenic diet,KD)是一种用来治疗儿童癫痫的方法,其有效性和安全性已经得到全世界的公认,目前认为KD治疗癫痫的可能机制有KD影响脑组织的能量代谢和神经递质以及KD具有抗氧化和抗凋亡作用。全面研究KD治疗癫痫的miRNA调控机制将可能对研发新型抗癫痫药物提供理论依据。

人染色体11p15.5 BWS致病位点新基因C11orf21的初步功能分析

目的研究人染色体11p15.5Beckwith-Wiedemann综合征致病位点新基因C11orf21的生物学功能。方法用RT-PCR和Northern印记方法分析C11orf21基因的表达;研究C11orf21蛋白功能用Western印记和细胞培养方法。结果检测到C11orf21基因在成人和胎儿心脏和肝脏等组织转录,在心脏有较强的表达并有0.9和3.1kb两个转录物。C11orf21蛋白在COS-1和Hela细胞细胞质表达,蛋白相对分子质量为14kDa。结论初步分析显示C11orf21是11p15.5Beckwith-Wiedemann综合征致病位点的一个非印记基因,在成人心脏有较强表达的局限细胞质蛋白。

脂肪来源的间充质干细胞与乳腺癌关系研究进展

脂肪来源的间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)对乳腺癌细胞的影响备受关注。尽管大部分基础实验研究证明ADSCs具有"促肿瘤"的作用,但是临床病例调查分析结果却有所不同。本文系统性回顾了ADSCs的生物学特性,ADSCs在乳腺癌肿瘤微环境中的作用,ADSCs对乳腺癌细胞的影响以及自体脂肪填充或移植的临床现状,对实验室基础研究及临床现状进行综述。

生酮饮食对海人酸点燃癫癎模型大鼠海马神经元保护作用研究

目的探讨生酮饮食对海人酸点燃癫癎模型大鼠海马神经元的保护作用。方法经海人酸制备SD大鼠癫癎模型,分别给予生理盐水+正常膳食(C组)、生理盐水+生酮饮食(K组)、海人酸+正常膳食(E组)和海人酸+生酮饮食(EK组),连续观察21 d后记录不同处理组大鼠体重、观察Ⅳ或Ⅴ级癫癎发作频率和持续时间,并通过HE染色和Nissl染色计数E组和EK组大鼠海马CA3区正常锥体神经元数目。结果 C组和K组大鼠均无癫癎发作,且海马CA3区锥体神经元数目正常。E组和EK组大鼠在观察过程中均出现Ⅳ或Ⅴ级癫癎发作,但EK组大鼠在饲养第21天时与E组相比,癫癎发作频率减少[(17.90±4.12)次对(30.50±4.40)次,P=0.000]、发作持续时间缩短[(212.70±17.75)s对(335.00±14.21)s,P=0.000],差异有统计学意义;EK组海马CA3区正常锥体神经元数目与E组相比增加[(117.67±7.51)个对(71.33±6.11)个,P=0.000],差异亦有统计学意义。结论生酮饮食对海人酸点燃癫癎模型大鼠海马神经元具有保护作用。

恶性黄疸的血清生化学改变及肝脏电镜观察

本文对恶性黄疸患者血清生化学(直接胆红素、间接胆红素、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰移换酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶等六项指标)的变化及其机理进行探讨。并以光镜和透射电镜对肝脏进行病理组织学观察,结果表明:六项生化指标均明显高于正常;此改变与胆道阻塞时间的长短及胆道压力增高有关;恶性黄疸血清生化学改变并非由胆道系统感染所致;胆道压力增高引起的病理组织学改变是发生血清生化学改变的主要原因。

各年龄段小鼠胸腺TEC中IL-7表达的变化

目的探讨IL-7在小鼠胸腺增龄性萎缩中的作用。方法 SPF级C57BL/6小鼠分成老龄组(18月)、中龄组(12月)、中青龄组(6月)、青龄组(1月),每组雌雄各6只。无菌取胸腺,比较小鼠胸腺重量、胸腺指数及胸腺细胞数;应用RTPCR技术检测胸腺组织中IL-7基因的表达。结果小鼠胸腺重量及胸腺细胞数随年龄增长显著减少;C57BL/6小鼠胸腺IL-7相对表达量分别为:(1.052±0.137)、(0.578±0.040)、(0.441±0.171)、(0.184±0.139),表现为随年龄增长显著下调,各年龄组间存在显著差异。结论 IL-7参与了胸腺的形成、发育、成熟和退化萎缩各个阶段,其表达水平在TECs不同的发育时期呈现不同的特点,IL-7对胸腺维持和萎缩衰老具有显著影响,IL-7表达随着年龄的增长呈显著减少,从而影响到TECs分化和增殖,造成胸腺微环境恶化引起胸腺萎缩。

含吐温α-萘磷酸盐速率法测定酸性磷酸酶

应用国产酸性磷酸酶测定试剂添加吐温增溶,使反应呈色试液透明,从而确立了结果可靠的血清酸性磷酸酶测定法。本法酶反应产物的显色化合物最大吸收波长仍为405nm,批内CV=2.2%～3.6%;批间CV=3.2%～3.4%;线性范围至少在0～42u L。正常参考值(X±2s).男性为5.7～9.7u/L,女性4.9～8.4u/L,本法(Y)与Bessey·Lowry法(X)法比较结果相一致(Y=1.026X+1.5,n=30)。本法反应液完全透明。准确性可靠,重复性好。

层粘蛋白α链基因突变对神经组织发育影响的研究

目的研究层粘蛋白α链在神经系统发育中的作用。方法用乙基甲磺酸盐(ethyl m ethane-su lphonate,EMS)诱发线虫C.elegans层粘蛋白α链基因突变,通过DNA测序确定突变部位,用在C.elegans神经系统特异表达的启动子和绿色荧光蛋白报告基因构建的表达载体,注入生殖腺来观察后代正常和突变体的神经组织。结果诱导层粘蛋白α链基因突变产生四种突变体,其中两种即第803位和第2074位的突变形成终止密码,为无义突变,绿色荧光蛋白标记的神经纤维荧光图象显示呈锯齿状,且有纤维断裂。另外两种分别位于第98位、第1415位突变,是错义突变,二者引起的神经纤维改变不明显。结论层粘蛋白α链基因第803位和第2074位的无义突变引起神经纤维异常发育。

脑胶质瘤患者脑脊液及血清LDH等酶活性的改变

许多学者认为:脑肿瘤时,CSF中AST、LDH、CPK等酶活性增高,并可作为脑肿瘤的标志物。目前国内这方面的报告不多,我们对37例脑胶质瘤CSF及血清中的6种酶进行了测定,现报道如下:

巨大舌-脐膨出综合征与基因组印记

基因组印记 (genomic imprinting)是不符合孟德尔遗传定律的特殊遗传现象。巨大舌 -脐膨出综合征 (Beckwith- Wiedemann syndrome,BWS)的致病基因位于印记基因聚集的 11p15 .5 ,并且其发病与基因组印记的机理有关 ,印记基因 p5 7KIP2 、IGF2 / H19、L IT1在 BWS时出现了变异或印记丢失 (loss of im-printing,L OI)。作者对最近几年国内外在这方面的最新研究进展进行了综述。这些研究结果为最终阐述BWS的发病机理和基因组印记的遗传学特征与生物学意义提供了重要依据。

胸腺发育与衰老相关基因调控的研究进展

胸腺是人体内重要的中枢免疫器官，是T淋巴细胞成熟的场所。在骨髓中产生的淋巴造血祖细胞通过血液进入胸腺，与胸腺基质细胞相互作用，最终形成成熟的CD4^＋／CD8^＋T细胞，返回到血液中参与细胞免疫。现在已发现许多基因参与胸腺发育、衰老，如Foxn1、Hox、Writ4等。这些基因在胸腺组织内形成一个网络，相互制约影响，调控着胸腺的发育及衰老。到目前为止，发育衰老的机制还不完全清楚，其在胸腺发育衰老过程中扮演着重要角色，因而研究胸腺发育衰老过程相关基因的调控机制非常必要。