应用微环DNA技术体外诱导和制备重组的乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)是病毒慢性感染的分子基础。本课题组前期研究通过Cre/loxP介导的位点特异性DNA重组策略,在细胞核内由前体质粒诱导重组cccDNA(rcccDNA^(loxP))产生,首次建立了HBV cccDNA的体外培养细胞和小鼠实验模型。本研究基于大肠埃希菌ZYCY10P3S2TPhiC31重组酶诱导表达系统,建立了一种体外诱导HBV rcccDNA(rcccDNAattR)微环产生和纯化的策略。纯化的rcccDNA^(attR)微环具有超螺旋结构,细胞培养实验证实其能支持功能性的HBV复制和抗原表达。与普通的线性HBV复制子编码质粒相比,rcccDNA^(attR)尾静脉高压注射小鼠模型能诱导显著延长的病毒抗原血症。因此,本研究在原核表达系统和实验小鼠水平提供了一种更为简化的HBV cccDNA实验模型系统,并再次显示rcccDNA具有显著的稳定性,能作为一种基本策略在小鼠模型中诱导病毒持续感染。

CRL4在增殖的肝细胞系中上调乙型肝炎病毒抗原的分泌表达

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)编码的X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对HBV感染的启始和维持至关重要。HBx可能作为病毒来源的接头分子,介导Cullin-RING E3泛素连接酶4(CullinRING ubiquitin E3ligase 4,CRL4)复合物对染色体外DNA限制因子SMC5/6的降解。最近研究发现,CRL4接头分子DNA损伤结合蛋白1(DNA damage-binding protein 1,DDB1)可不依赖与HBx的相互作用而直接上调病毒的表达和复制。本研究基于HBx基因删除(X-null)的HBV重组共价闭合环状DNA(recombinant covalently closed circular DNA,rcccDNA)模型系统,在多种体外培养肝细胞系中证实上述发现。有意思的是,CRL4刺激rcccDNAX-null转染细胞抗原分泌表达的效应能被血清饥饿实验抵消。应用尾静脉高压注射小鼠模型,同样发现CRL4并不上调rcccDNAX-null在非增殖小鼠肝脏细胞中的表达。以上结果提示,细胞增殖特征与CRL4不依赖HBx上调病毒抗原分泌表达的效应密切相关,有助于HBx生物学意义的准确分析和理解。

元认知研究的发展及在教学中的应用

本文介绍元认知的起源、概念、结构、实质,及其与其他相关概念之间的关系,将元认知的内涵界定为"自己对自身拥有的知识和认识情况的理解和操作",对国内外已有的关于元认知的研究进行梳理和总结;介绍了国内外关于元认知训练的方法以及在教学中为了提高元认知能力应做的工作。

我国幼儿园教师评价制度实施的现状与对策--基于14省市19区县的实证调查

学前教育是基础教育的基础,幼儿园教师评价的有效性、科学性和创新性是提高学前教育质量的关键。课题组在我国14个省市的19个区县幼儿园调查发现,当前的评价以园长、园内考核为主体,评价主体和形式相对单一,评价内容看重教师的奖项、课题科研论文等“成果”,仍有教师没有参与过任何评价,评价的效果反馈和结果运用不强。因此,幼儿园教师评价改革的突破点在于:关注区域差异,完善幼儿园教师评价制度;强调儿童本位观,创新师德师风评价的指标与方式;减少评价指标,突出教师保教行为的情境性与示范性;发挥评价的激励功能;健全园外及第三方机构等评价主体队伍的建设与参与机制;增强评价结果的反馈及应用。

场域理论在中小学教师育德意识与能力培训中的实践探索

《上海市学生民族精神教育指导纲要（试行）》和《上海市中小学生生命教育指导纲要（试行）》（以下简称“两纲”）回答了学校教育发展的根本命题：“要培养什么样的人？应当怎样培养？需要怎样的教师来培养？”实施“两纲”的成效如何,关键在于教师,因此,“两纲”实施中的一项重要任务是提升全体教师的育德意识和育德能力。在此分享上海市师资培训中心朱园飞老师对此所作的研究与实践。

高校新教师培训的新进展

新时代的教师队伍建设事关党和国家事业发展全局,新教师培训是加强教师队伍建设的重要途径。本文结合国内外高校新教师培训的进展,及上海市5年来新教师“三位一体”脱产培训的成效,分析了国内外高校新教师培训的现状、问题及发展。

猴痘的流行现状及防控

猴痘(monkeypox)是由猴痘病毒感染所致的人兽共患病,主要发生在非洲中部、西部地区。猴痘病毒可感染多种哺乳类动物,主要在动物中流行,人接触感染动物后可被传染。猴痘的临床表现与天花相似(发热、皮疹等),但症状较轻。天花疫苗接种可提供预防猴痘的免疫保护力。然而,因全球天花被消灭而停止接种天花疫苗后,猴痘成为最可能威胁人类的正痘病毒性疾病。近期,其散发病例在欧洲多地出现。2022年5月7日英国报道了猴痘疫情。随后,欧洲报道猴痘确诊和疑似病例超过100例。猴痘主要传播途径包括接触感染动物、与患者直接接触或间接接触。2022年5月20日,世界卫生组织就此次猴痘疫情召开了紧急会议,旨在提高对猴痘的认识,做好防范应对准备。世界卫生组织、美国疾病预防控制中心、英国卫生部门报告了相关疫情并制定了相应的防控措施。截至2022年5月28日我国尚无输入性猴痘报道,但因国际交往频繁等仍须提高警惕。本文介绍了猴痘流行现状及有关防控信息,以供借鉴。

HBV cccDNA的体外细胞模型和实验小鼠模型

HBV慢性感染仍然是世界性公共健康问题。现有抗病毒药物能够有效抑制HBV复制,却无法使之完全治愈。共价闭合环状DNA(cccDNA)是HBV复制的原始模版,具有显著的稳定性,是HBV持续感染的分子基础,也是实现感染治愈的关键靶点。由于较低的细胞内拷贝数,以及缺乏灵敏可靠的检测方法,限制了对HBV cccDNA生物合成、代谢和调控等方面的相关研究。建立合适的cccDNA研究模型有助于了解这些生物学过程。综述了近年来HBV cccDNA细胞培养模型和实验小鼠模型等方面的主要进展,以期为进一步研究HBV病毒学和抗病毒药物研发提供帮助。

教师如何做到懂学生

为了每一个学生的终身发展,已经成为教育核心理念。我国教育部提出要发展学生核心素养,因此,育人的导向应更加注重学生理想信念和核心素养的培养,更加关注学生的学习体验、动手实践及创新意识的培养,使学生的课业负担进一步减轻,学校课程更贴近学生的生活。作为一名懂学生的教师,建立良好的师生关系,营造和谐的师生氛围,应基于对学生需求把握的理解、尊重和引导。

“双减”背景下学生的学习习惯培养生态圈建构与实践

本文结合学生身心发展特点,从学习习惯的心理学内涵出发,围绕学习习惯意识、学习兴趣、学习自信心和自主学习等关键要素,初步构建学生学习习惯培养的生态圈并进行实践。

绿色荧光蛋白分裂肽基因重组乙型肝炎病毒复制子模型的建立

为构建一种重组乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制子模型,使其能够在病毒感染的细胞中表达可视化报告基因蛋白,本研究删除HBV基因组核心蛋白(HBV core,HBc)编码区部分序列,构建HBV1.1-ΔHBc113复制子载体。利用内含肽(intein)介导蛋白拼接的特性,选取加强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)和超级折叠绿色荧光蛋白(super folder green fluorescent protein,sfGFP)作为外显肽,建立EGFP^(N1-8)/EGFP^(C9-11)和sfGFP^(N1-10)/sfGFP^(C11)蛋白分裂系统。基于ΔHBc113载体,分别构建EGFP^(C9-11)和sfGFP^(C11)重组HBV复制子;应用DNA印迹法(Southern blotting)验证两种rHBV载体的细胞内复制能力。结果显示,构建的HBV1.1-ΔHBc113复制子载体能够在HBc反式互补条件下在转染细胞中形成病毒复制。构建的EGFP^(C9-11)和sfGFP^(C11)重组HBV复制子能够支持HBc互补条件下的细胞内病毒复制,并产生子代病毒颗粒;HBV重组复制子表达的EGFP^(C9-11)或sfGFP^(C11)蛋白在共表达氮端蛋白EGFP^(N)/sfGFP^(N)细胞中,通过intein介导的蛋白质高效拼接,能够形成完整的、有功能的GFP。结果表明,构建的荧光蛋白重组HBV复制子系统能够为HBV高通量药物筛选和HBV易感性研究提供实验工具,具有重要的病毒学意义和应用前景。

教师评价机制的历史沿革及启示

文章梳理了教师评价机制发展沿革,提出深化教师评价改革的启示。新时代教师评价应聚焦核心素养,指向未来,更新和落实先进的评价理念;完善评价内容,分层设置,明晰指标;发挥多元主体的责任,提高相关评价者自身的评价能力;丰富评价技术方法,坚持多维、分层、灵活和大数据取值;重视反馈机制,加强评价反馈的及时性和持续化;构建教师评价的信任文化。

高职院校“双师型”教师发展的制度现状与困境突破——基于上海地区的访谈研究

“双师型”教师队伍建设是职业教育能力现代化的具体体现,是高质量职业教育发展的保障。本研究对10所高职院校的管理者和教师开展访谈,并借助社会学的制度分析方法,对高职院校“双师型”教师发展的制度建设现状进行研究,结果发现,高职院校的“双师型”制度建设取得了一定的成效,表现为建立基于“双师”素养的评价和激励政策、形成了多元发展与共同体合作的培养机制、“双师型”发展得到管理者和教师的认可。但是,“双师型”教师发展制度的建设同样存在困境,表现为评价的非标准化和非强制性、多元主体的参与机制存在障碍、“双师型”价值认知的浅表化。根据访谈结果,本研究建议需要进一步强制规定“双师型”的评价和认定政策、深度打造多元参与的“双师型”教师培养机制,以及构建“双师型”教师发展的的理念文化。

成熟度分级在急诊护理管理中的应用效果

目的:探讨成熟度分级在急诊护理管理中的应用价值。方法:将浙江省中医院下沙院区急诊科的36名护士,按照不同的工作能力和工作意愿等分成不同级别的成熟度,分别对其应用参与、说服、授权、命令等不同的领导方式,比较分析实施成熟度分级管理前后的护理质量,以及护士自我评价、患者满意度、其他员工满意度。结果:实施成熟度分级管理后,急诊各区域护理质量及护士自我评价、患者满意度、其他员工满意度均明显提高(P<0.01)。结论:急诊护理应用成熟度分级管理,可以彰显个性化护理管理,有利于提高临床护理水平。

新时代高校新教师岗前培训的问题及对策——以上海市属高校新教师岗前培训为例

高校新教师培训是加强教师队伍建设的重要途径。我们调研上海的各所高校后发现,新教师在完成从学生到教师身份转变、站稳讲台过程中所必要的教育学、心理学知识以及教育教学技能方面还不够系统和全面。如何扣好教学的"第一粒扣子"?本文结合上海市自2013年以来对2166名教师进行岗前3个月脱产培训的情况,剖析了当前新教师培训存在的问题,并提出了相应的解决策略。

乙型肝炎病毒cccDNA体外实验模型研究进展

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是一种小的DNA包膜病毒,属于嗜肝DNA病毒科.在细胞核内,HBV部分双链的DNA基因组修复为共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA),后者作为HBV复制的原始模板起始病毒转录.cccDNA具有显著的稳定性,是HBV持续感染的分子基础,也是抗病毒药物设计的关键靶点.HBV cccDNA研究常受限于细胞内较低的拷贝数,以及缺乏灵敏、可靠的检测方法,因此,建立合适的cccDNA实验模型具有重要意义.本文对近年来HBV cccDNA体外实验模型方面的主要研究进展进行综述,以期为深入研究HBV病毒学和抗病毒药物研发提供帮助.

原卟啉Ⅸ和维替泊芬在细胞水平和小鼠体内有效抑制新型冠状病毒的感染

新型冠状病毒(新冠病毒)引起的疫情当前仍在全球蔓延,因而研究有效的新冠病毒疫苗和抗病毒药物成为当务之急.本研究发现原卟啉Ⅸ(ProtoporphyrinⅨ)和维替泊芬(Verteporfin)这两种FDA批准的药物分别在1.25和0.31μmolL-1的浓度下,能在Vero E6细胞上完全抑制新冠病毒的感染,并阻止新冠病毒感染造成的细胞病变.同时,原卟啉IX和维替泊芬的选择性指数(Selectivity indices,SI)分别为952.74和368.93,表明其具有很广的安全用药范围.进一步利用表达人源ACE2(hACE2)的腺病毒(Ad5-h ACE2)建立新冠病毒小鼠感染模型后,发现原卟啉IX和维替泊芬可以完全阻断小鼠感染新冠病毒.通过药物–蛋白分子对接模拟、药物-蛋白互作实验,发现原卟啉IX和维替泊芬这两个具有卟啉环结构的化合物能够直接结合新冠病毒受体——ACE2,并干扰病毒S蛋白与受体ACE2之间的相互作用.本研究表明,原卟啉IX和维替泊芬在细胞水平和动物水平均能有效抗新冠病毒感染,为开发新型抗新冠病毒药物提供了新的思路.