冷杉梢斑螟化学感受蛋白DabiCSP8的配体结合特性分析

采用分子生物学和荧光竞争性结合测定等技术,研究了冷杉梢斑螟Dioryctria abietella雌虫性腺和雌、雄成虫足中高表达的化学感受蛋白DabiCSP8基因的表达特征和功能。定量分析结果表明,DabiCSP8基因在雌虫性腺中显著高表达,表达量分别是雌、雄虫触角的1232.27倍和3130.64倍;此外,该基因在雌、雄成虫足中表达量也较高。通过原核表达系统及亲和层析技术获得了13.64 kD的目的蛋白DabiCSP8。结合测定结果表明,DabiCSP8与探针N-苯基-1-萘胺(1-NPN)具有强的结合能力,结合常数(K_(1-NPN))为(1.61±0.02)μmol/L。β-紫罗兰酮是DabiCSP8的最佳结合配基,解离常数(K_(d))为(11.43±0.62)μmol/L。DabiCSP8结合腔内的极性氨基酸精氨酸46(Arg46)能够与β-紫罗兰酮形成两个氢键,暗示Arg46在该化合物的结合中起着重要作用。此外,DabiCSP8与部分杀虫剂具有中等强度的结合能力。