目的:比较不同长度的hTERT启动子以及Survivin启动子在肺癌A549细胞中的启动活性,为肺癌靶向性基因治疗提供依据。方法:用PCR法扩增1084 bp hTERT启动子、980 bp Survivin启动子和红色荧光蛋白基因;在真核表达质粒pGL3-hTERT基础上分别...目的:比较不同长度的hTERT启动子以及Survivin启动子在肺癌A549细胞中的启动活性,为肺癌靶向性基因治疗提供依据。方法:用PCR法扩增1084 bp hTERT启动子、980 bp Survivin启动子和红色荧光蛋白基因;在真核表达质粒pGL3-hTERT基础上分别构建3种启动子调控的、以红色荧光蛋白CDS为目的基因的真核表达质粒pGL-H-RED、pGL-LH-RED和pGL-S-RED。将重组质粒用脂质体分别转染A549和MRC-5细胞,72h后用Imagepro-Plus6.0分析3种启动子在相同时间内启动红色荧光蛋白的表达水平。结果:重组质粒在A549细胞中观察到了红色荧光,在MRC-5细胞中无红色荧光。pGL-S-RED质粒在A549细胞中表达最强,pGL-LH-RED次之,pGL-H-RED最弱,3种质粒在A549细胞中的荧光强度(IOD)分别为201.17、171.70和136.34。结论:所克隆的hTERT启动子和Survivin启动子均表现出肿瘤特异性,其中Survivin启动子在肺癌A549细胞中具有最好的启动效应,可望开发成为肺癌靶向性基因治疗工具。展开更多
目的通过基因分型探讨重庆市结核分枝杆菌分子流行病学特点,建立适合重庆市结核病基因分型的体系。方法复苏培养2019—2021年重庆市丰都县、奉节县2个国家级耐药监测点结核病患者痰培养菌株268例,提取菌株DNA,采用24位点可变串联重复序...目的通过基因分型探讨重庆市结核分枝杆菌分子流行病学特点,建立适合重庆市结核病基因分型的体系。方法复苏培养2019—2021年重庆市丰都县、奉节县2个国家级耐药监测点结核病患者痰培养菌株268例,提取菌株DNA,采用24位点可变串联重复序列(variable number of tandem repeats,VNTR)分型方法对菌株进行基因分型,并对成簇的菌株进行流行病学调查,分析2个监测点菌株的成簇率并比较其传播差异。结果2个地区菌株中奉节县的分辨率指数(Hunter-Gaston index,HGI)HGI指数从0到0.85,HGI 0.6以上的位点有10个;0.3≤HGI≤0.6的位点有11个;HGI<0.3的位点有3个。分辨力最高的位点为MIRU31,分辨力最低的位点为MIRU24。丰都县的HGI指数从0到0.81,HGI 0.6以上的位点有12个;0.3≤HGI≤0.6的位点有9个;HGI<0.3的位点有3个。分辨力最高的位点为MIRU26,分辨力最低的位点为MIRU23。在成簇性分析中,丰都县140例菌株中成簇的样本为10例,成簇数目为4簇,最大的1簇为4例样本,成簇率为4.1%。奉节县128例菌株中成簇的样本数为10例,成簇的数目为5簇,成簇率为4.2%。结论重庆市丰都县、奉节县发病的主要人群为独立的基因型,近期传播率较低。患者发病主要是内源性复燃即潜伏感染者发展为活动性肺结核,防控机构在对结核病患者进行规范化管理的同时,还应加大2个监测点潜伏感染者的筛查力度,对潜伏感染者进行预防性治疗,这是降低两地结核病疫情发病率的关键。展开更多
文摘目的:比较不同长度的hTERT启动子以及Survivin启动子在肺癌A549细胞中的启动活性,为肺癌靶向性基因治疗提供依据。方法:用PCR法扩增1084 bp hTERT启动子、980 bp Survivin启动子和红色荧光蛋白基因;在真核表达质粒pGL3-hTERT基础上分别构建3种启动子调控的、以红色荧光蛋白CDS为目的基因的真核表达质粒pGL-H-RED、pGL-LH-RED和pGL-S-RED。将重组质粒用脂质体分别转染A549和MRC-5细胞,72h后用Imagepro-Plus6.0分析3种启动子在相同时间内启动红色荧光蛋白的表达水平。结果:重组质粒在A549细胞中观察到了红色荧光,在MRC-5细胞中无红色荧光。pGL-S-RED质粒在A549细胞中表达最强,pGL-LH-RED次之,pGL-H-RED最弱,3种质粒在A549细胞中的荧光强度(IOD)分别为201.17、171.70和136.34。结论:所克隆的hTERT启动子和Survivin启动子均表现出肿瘤特异性,其中Survivin启动子在肺癌A549细胞中具有最好的启动效应,可望开发成为肺癌靶向性基因治疗工具。
文摘目的通过基因分型探讨重庆市结核分枝杆菌分子流行病学特点,建立适合重庆市结核病基因分型的体系。方法复苏培养2019—2021年重庆市丰都县、奉节县2个国家级耐药监测点结核病患者痰培养菌株268例,提取菌株DNA,采用24位点可变串联重复序列(variable number of tandem repeats,VNTR)分型方法对菌株进行基因分型,并对成簇的菌株进行流行病学调查,分析2个监测点菌株的成簇率并比较其传播差异。结果2个地区菌株中奉节县的分辨率指数(Hunter-Gaston index,HGI)HGI指数从0到0.85,HGI 0.6以上的位点有10个;0.3≤HGI≤0.6的位点有11个;HGI<0.3的位点有3个。分辨力最高的位点为MIRU31,分辨力最低的位点为MIRU24。丰都县的HGI指数从0到0.81,HGI 0.6以上的位点有12个;0.3≤HGI≤0.6的位点有9个;HGI<0.3的位点有3个。分辨力最高的位点为MIRU26,分辨力最低的位点为MIRU23。在成簇性分析中,丰都县140例菌株中成簇的样本为10例,成簇数目为4簇,最大的1簇为4例样本,成簇率为4.1%。奉节县128例菌株中成簇的样本数为10例,成簇的数目为5簇,成簇率为4.2%。结论重庆市丰都县、奉节县发病的主要人群为独立的基因型,近期传播率较低。患者发病主要是内源性复燃即潜伏感染者发展为活动性肺结核,防控机构在对结核病患者进行规范化管理的同时,还应加大2个监测点潜伏感染者的筛查力度,对潜伏感染者进行预防性治疗,这是降低两地结核病疫情发病率的关键。
