永川地区慢性乙型肝炎患者病毒基因分型及耐药性研究

目的探讨永川地区慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒类型分布、耐药情况及其临床意义。方法采用基因芯片法对605例慢性乙型肝炎患者经核苷(酸)类似物治疗后,进行耐药情况分析,并对发生耐药的乙型肝炎DNA进行分析。结果永川地区605例慢性乙型肝炎患者的基因分型以B型为主63.1%,116例慢性乙型肝炎患者出现不同位点耐药,耐药率为19.17%。耐药突变型以B型为主,其中对阿德福韦酯耐药占所有耐药突变的49.14%且以B型逆转录酶236T为主,为35.09%;拉米夫定耐药以B型逆转录酶108 M为主,占34.29%,荧光定量PCR仪检测发现发生耐药患者的病毒复制数与未发生耐药患者病毒复制数存在差异(P<0.05)。结论监测慢性乙型肝炎患者HBV耐药基因突变情况,有助于早发现临床乙型肝炎耐药患者,指导临床合理应用抗病毒药治疗乙型肝炎,提高治疗效果。

反向杂交检测23种人乳头瘤病毒型别在宫颈病变中的临床应用

目的探讨反向杂交法(two-hybrid system techniques)检测23种人乳头状瘤病毒(HPV)的感染频率在快速诊断宫颈病变中的临床应用价值。方法将23种HPV型别特异性探针固定于尼龙膜条上,生物素标记的通用引物PCR(GP-PCR)扩增HPVDNA,扩增产物与膜条经反向杂交检测HPV型别,此方法用于门诊就诊的67例女性患者进行下生殖道HPV分型检测。结合24例宫颈病变病理诊断结果,对检测结果进行评价。结果67例门诊妇女中HPV阳性率为35.8%(24/67),在慢性宫颈炎症中HPV6的感染最高,占HPV感染阳性率的29.2%(7/24);在宫颈癌中HPV16感染率最高,占HPV感染阳性率的33.3%(8/24)。结论反向杂交能一次性检测23种HPV具体型别,敏感度高、特异性强、操作简便、结果易于判读,适于临床应用。

汽车电子锁发展综述

汽车电子锁是采用电子电路控制，以电磁铁、微型电动机和锁体（或继电器）作为执行机构的机电一体化的安全装置。它经历了由机械式向电气化直至电子化的发展过程。按照输入密码方式的异同，汽车电子锁可分为按键式、拨盘式、电子钥匙式、触摸式的生物特征式。指出发展我国汽车电子锁必须注意选型、筛选紧急开启接口的最佳方案和备用电源的选择３个问题。介绍了国外电子遥控汽车门锁、无线电遥控门锁和汽车电子点火钥匙３种先进结构的功能。

结核蛋白芯片法检测结核分枝杆菌的临床评价

目的 采用结核蛋白芯片法检测结核分枝杆菌感染，分析重庆市永川地区的结核感染现状以及流行病学趋势。方法 2014年7月至2015年6月来重庆医科大学附属永川医院感染科门诊就诊患者，对635例疑似结核分枝杆菌感染患者采用临床常用结核分枝杆菌检测方法进行检测，通过结核蛋白芯片法检测永川地区结核分枝杆菌感染情况。共计215例患者被临床确诊为结核分枝杆菌感染，其中肺结核162例，肺外结核53例。采用卡方检验，对检测结果进行统计学分析。结果 162肺结核患者，蛋白芯片法阳性率为81.5%，T－SPOT.BT为90.7%，DNA微阵列芯片89.5%,金标法为63.5%，抗酸染色法为38.3%。5种检测方法在临床肺结核诊断上差异有统计学意义（P〈0.05）。53例肺外结核患者，蛋白芯片法阳性率90.6%、T－SPOT为94.3%、金标法为47.2%。3种检测方法在阳性率比较上差异有统计学意义（P〈0.05）。蛋白芯片法、T－SPOT.BT在肺外结核阳性率上差异无统计学意义（P〉0.05）。结核蛋白芯片法LAM抗体阳性出现概率最大为94%。结论 结核蛋白芯片法对肺结核和肺外结核的诊断较为可靠。

BMP9通过BMPs/SMAD信号通路抑制肺腺癌A549细胞的增殖

目的 :探讨骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)是否可以通过BMPs/SMAD信号通路抑制人肺腺癌细胞A549的增殖。方法 :采用慢病毒感染的方式将外源性BMP9转入人肺腺癌A549细胞中,并应用半定量RT-PCR及蛋白质印迹法检测病毒感染后A549细胞中BMP9表达的改变。采用MTT法和FCM法检测BMP9过表达对A549细胞增殖和周期的影响。蛋白质印迹法检测BMPs/SMAD信号通路中总SMAD1/5/8和磷酸化SMAD1/5/8蛋白表达水平的改变。半定量RT-PCR及蛋白质印迹法检测BMP9过表达对分化抑制因子3(inhibitor of dif erentiation 3,ID3)m RNA和蛋白表达的影响。将构建有BMP9的慢病毒和构建有SMAD4-sh RNA的慢病毒共感染A549细胞,以阻断BMPs/SMAD通路的激活,采用蛋白质印迹法检测磷酸化SMAD1/5/8和ID3表达的改变。结果 :与空白对照组和阴性对照组相比,感染BMP9慢病毒后A549细胞中BMP9 m RNA和蛋白表达水平明显升高(P值均<0.05)。MTT法和FCM法检测结果显示,病毒感染3 d后,BMP9过表达组吸光度(D)值均较空白对照组的和阴性对照组明显降低(P值均<0.05);细胞周期阻滞在G2/M期,G2/M期细胞所占的比例均较空白对照组和阴性对照组明显提高(P值均<0.05)。蛋白质印迹法检测结果提示,BMP9过表达可使磷酸化SMAD1/5/8和ID3蛋白的表达水平明显上调,激活BMPs/SMAD通路。当干扰BMPs/SMAD信号通路关键分子SMAD4的表达后,可抑制BMP9激活的BMPs/SMAD通路,下调磷酸化SMAD1/5/8和ID3蛋白的表达水平(P值均<0.05)。

引物原位标记联合核型分析快速检测克氏综合征

目的探索PRINS技术联合G显带核型分析检测克氏综合征染色体。方法对1034例男性不育患者外周血用常规G显带核型分析方法进行分析,对检出的克氏综合征(Klinefelter综合征)患者用引物原位标记(PRINS)技术进行染色体检测,比较分析染色体异常的检出情况。结果用常规G显带核型分析方法检出核型异常患者134例,核型异常比例为12.96%;其中染色体数目异常70例占异常总数的52.23%(Klinefelter综合征患者56例占41.79%),余下为染色体结构异常64例占47.77%;采用PRINS技术对Klinefelter综合征患者的染色体进行检测,结果与G显带核型分析结果一致。结论与常规核型分析方法相比,PRINS技术可快速、准确检测染色体数目异常。

BMP9结合ALK2受体激活BMPs/SMAD抑制乳腺癌MDA-MB-231增殖侵袭和迁移

为探讨骨形态发生蛋白9是通过结合受体ALK1还是ALK2来抑制人乳腺癌癌细胞MDA-MB-231的增殖、侵袭和迁移,本研究采用RT-PCR检测ALK1、ALK2在MDA-MB-231中内源性表达,同时用RT-PCR检测显性负性突变ALK2腺病毒和BMP9腺病毒共感染MDA-MB-231后,DNALK2表达。采用MTT、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验检测DNALK2对BMP9作用下MDA-MB-231增殖、侵袭、迁移的影响。RT-PCR检测DNALK2和BMP9腺病毒共感染MDA-MB-231后CTGF m RNA表达,Western blot检测BMPs/SMAD信号通路中SMAD1/5/8总的蛋白和磷酸化蛋白以及CTGF表达。结果显示,MDA-MB-231只存在ALK2表达,DNALK2和BMP9腺病毒共感染MDA-MB-231后,DNALK2 m RNA表达明显升高;MDA-MB-231/GFP/DNALK2组吸光度值(0.392±0.044)较MDA-MB-231/BMP9/DNALK2组(0.433±0.045)吸光度值无明显改变(p>0.05);MDA-MB-231/GFP/DNALK2组划痕愈合率(67.3±8.6)%与MDA-MB-231/BMP9/DNALK2组划痕愈合率(59.9±6.4)%无明显改变(p>0.05),MDA-MB-231/GFP/DNALK2组穿膜细胞数为(21.7±3.4)个与MDA-MB-231/BMP9/DNALK2组穿膜细胞数为(17.4±5.4)个无明显改变(p>0.05)。Western blot显示:DNALK2能阻断BMP9上调磷酸化SMAD1/5/8和下调人结缔组织生长因子CTGF表达。由此得出结论,BMP9可通过结合ALK2受体激活BMPs/SMAD信号通路来抑制MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移。

骨形态发生蛋白9调节乳腺癌细胞中长链非编码RNA的表达

目的:筛选出与骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein-9,BMP-9)表达相关的长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA),为探讨BMP-9通过调节LncRNA表达水平参与乳腺癌细胞生长、分化、迁移和凋亡等的作用机制提供实验依据。方法 :将携带有BMP-9全基因的重组腺病毒Ad-BMP-9和携带有绿色荧光蛋白(greenuorescent protein,GFP)基因的空载体腺病毒Ad-GFP(对照组)分别感染MDA-MB-231细胞。应用微阵列芯片技术分别检测BMP-9过表达组(MDA-MB-231/BMP-9细胞)和对照组(MDA-MB-231/GFP细胞)中Lnc RNA表达谱的差异,并通过实时荧光定量PCR法验证筛选获得的14条LncRNA(LINC00443、LINC00638、LINC00486、RHNO1、SERHL、HOXA11-AS、IQCA1、LINC00461、LOC440173、LHFPL、ANKRD36BP2、BVES-AS1、LINC00937和LINC00608)在MDA-MB-231/BMP-9和MDA-MB-231/GFP细胞中的表达情况。通过基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析发生表达水平变化的Lnc RNA涉及的功能及通路。结果 :重组BMP-9腺病毒感染的MDA-MB-231细胞中BMP-9 mRNA的表达水平较对照组明显升高。与对照组相比,BMP-9过表达的MDA-MB-231/BMP-9细胞中LncRNA表达水平发生明显变化。实时荧光定量PCR检测结果显示,LINC00443、LINC00638和LINC00486的表达水平上调(P值均<0.05),IQCA1、LINC00461、LOC440173、LHFPL和ANKRD36BP2的表达水平下调(P值均<0.05)。发生表达改变的LncRNA参与了细胞骨架和细胞膜等的形成,或作为细胞间信号转导的信号分子发挥作用。结论 :BMP-9过表达的MDA-MB-231细胞中LncRNA表达谱较对照组出现显著变化,提示部分LncRNA可能参与了BMP-9调控乳腺癌MDAMB-231细胞增殖和侵袭等生物学过程,并发挥关键作用。

BMP9/PI3K/Akt信号通路抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长

探讨骨形态发生蛋白9是否可通过其它非经典BMPs/SMAD信号通路来抑制人乳腺癌癌细胞MDA-MB-231的生长。本研究采用免疫组化方法检测临床乳腺癌患者癌组织和癌旁组织中BMP9、Akt总蛋白和Akt磷酸化蛋白表达,采用Western blot检测过表达BMP9或靶向干扰BMP9后,对乳腺癌细胞中PI3K/Akt信号通路中Akt总蛋白和Akt磷酸化蛋白表达的影响,通过裸鼠异位移植瘤动物模型证实BMP9可抑制乳腺癌生长,及其对细胞增殖核抗原PCNA表达改变。结果显示,临床乳腺癌患者癌组织中BMP9表达明显低于癌旁组织,癌组织中存在BMP9表达,Akt磷酸化蛋白表达明显降低;BMP9腺病毒感染MDA-MB-231后,MDA-MB-231/BMP9组的Akt磷酸化蛋白表达明显低于MDA-MB-231/GFP,干扰掉MCF7中内源性BMP9后,MCF7/si BMP9组Akt磷酸化蛋白表达明显高于MVF7/si NC组;裸鼠移植瘤动物模型在成瘤后的第21天,MDA-MB-231/BMP9瘤体大小为(0.329±0.047)明显小于MDA-MB-231/GFP(3.102±0.027),PCNA染色显示MDA-MB-231/BMP9的PCNA阳性率为(26.3±3.1)%,明显低于MDA-MB-231/GFP(57.8±5.3)%。由此得出结论,BMP9抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长还可以通过抑制PI3K/Akt信号通路激活来发挥作用。

Martin公式对渝西地区成人低密度脂蛋白胆固醇估算能力的评价

目的:评价Martin公式对渝西地区成人低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的估算能力。方法:共995例患者纳入研究,以过氧化氢酶清除法直接检测LDL-C水平,以其为参照,采用线性回归分析、Bland-Altman散点图、配对资料χ~2检验评价Friedewald公式与Martin公式估算的LDL-C水平与直接检测的LDL-C水平的相关性及风险分层的一致性。结果:Friedewald公式估算的LDL-C水平(FLDL)及Martin公式估算的LDL-C水平(MLDL)均与直接检测的LDL-C水平(DLDL)有显著的相关性(r=0.96、0.94,均P<0.001)。Bland-Altman散点图分析显示,两种公式均倾向于高估LDL-C水平,但FLDL与DLDL的一致性优于MLDL。FLDL总体风险分层符合率高于MLDL(69.1%∶66.3%,P=0.016)。在三酰甘油(TG)<150 mg/dl时,MLDL分层符合率高于FLDL(65.1%∶67.6%,P=0.047);TG分别为150~199 mg/dl与200~399 mg/dl时,FLDL风险分层符合率均高于MLDL(83.3%∶71.5%,P<0.001;69.8%∶55.5%,P=0.011)。结论:Martin公式对渝西地区成人LDL-C水平估算能力不足。