一种基于SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR的温州病毒检测方法的建立

目的建立一种温州病毒(Wenzhou virus,WENV)的SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测方法。方法分析WENV保守区域并设计特异引物,以特异扩增产物构建的阳性重组质粒为标准品,建立SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR反应的扩增曲线和溶解曲线,获得标准曲线。结果建立的WENV的荧光定量PCR标准曲线在1×10~1~1×10~8拷贝/μl的浓度时呈现良好线性关系,其扩增相关系数为0.999,熔解曲线只出现1个特异峰,无引物二聚体,检测下限可达10拷贝。利用WENV的样本对本检测方法进行验证,结果良好,组内变异系数为1.47%。讨论本实验建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性好,可用于WENV的诊断及病原的定量分析。

一种基于实时荧光定量PCR的寨卡病毒检测方法的建立

目的建立一种基于实时荧光定量PCR技术的寨卡病毒检测方法。方法根据代表性亚洲型、非洲型寨卡病毒株NS5基因序列,设计特异性引物ZK-1F/R、ZK-2F/R;利用PCR、Real-time PCR方法对引物特异性、灵敏度、可重复性进行评价和优化;利用寨卡病毒感染细胞对本方法进行验证。结果 PCR结果表明两对引物的特异性良好,其Real-time PCR检测灵敏度分别为1.0×103copies/μL和1.0×101copies/μL,扩增效率分别为0.68和0.90,说明引物ZK-2F/R的综合效果优于ZK-1F/R,通过优化实验条件建立基于引物ZK-2F/R的实时荧光定量PCR检测方法,对含有寨卡病毒PRVABC59株和MR766株的样本进行检测,结果分别为9.0×104copies/μL、8.5×104copies/μL。结论本研究建立了一种检测寨卡病毒的方法,可用于临床患者ZIKV感染的检测和预防。