单核细胞增生李斯特菌新型转录调节因子lmo2486的分子特征及原核表达研究

克隆目的基因LM lmo2486,分析目的基因及其编码蛋白的分子特征,并验证其编码蛋白的反应原性,为进一步研究LM lmo2486的生物学特性奠定前期的基础。通过PCR扩增单核细胞增生李斯特菌(LM)新型转录调节因子lmo2486基因,对该基因进行测序,预测分析其编码蛋白质的二、三级结构、理化特性、蛋白结构域等分子特征,并进行遗传进化分析。PCR克隆lmo2486基因的抗原集中区lmo2486K,构建重组载体pET-32a(+)-lmo2486K转化至大肠埃希氏菌感受态细胞BL21(DE3)并使用IPTG低温诱导表达,利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测重组蛋白。结果显示,LM lmo2486基因全长1212 bp,共编码403个氨基酸;lmo2486基因编码的蛋白具有亲水性和跨膜结构,无信号肽,预测发现lmo2486含有PspC和DUF4097结构域。序列同源对比发现,LM lmo2486测序所得的核苷酸序列与LM不同分离株属于同一分支,亲缘关系较近,表明lmo2486基因在LM中高度保守。SDS-PAGE检测表明,重组蛋白Lmo2486K的分子质量约为64.6 ku,Western blot分析发现,Lmo2486K蛋白具有一定的反应原性。