胸腺素α_1 基因的克隆表达及其生物活性

胸腺素α1(thymosinalpha 1 ,Tα1)作为一种免疫增强剂 ,临床用途广泛 .为大量制备Tα1,按大肠杆菌惯用密码子合成Tα1基因 ,克隆于质粒pUC1 9的EcoRⅠ和PstⅠ位点 .经测序证明序列正确后 ,串联为 4串体 (Tα1④ ) ,经再次测序确认后克隆入pThioHisA的EcoRⅠ和PstⅠ位点 .转化大肠杆菌T0P1 0 ,酶切鉴定正确后 ,经 1mmol LIPTG诱导 4h ,获得硫氧还蛋白与Tα1④的融合表达 ,用离子交换层析纯化融合蛋白 .溴化氰裂解融合蛋白 ,释放出Tα1单体 ,经离子交换色谱纯化出Tα1.采用3 H TdR参入法进行生物活性测定 ,证实融合蛋白和Tα1均具有刺激小鼠脾淋巴细胞分裂增殖的能力 .

应用基因工程方法制备新型重组人肿瘤坏死因子-α

目的 应用基因工程技术 ,制备一种新型的重组人肿瘤坏死因子 α (novelrecombinanthumantumornecrosisfactor α ,nrhTNF α) ,并对其生物学活性、理化性质进行鉴定 ,为进入临床前研究提供基础。方法 应用PCR技术 ,将hTNF α基因的 5′端 17个氨基酸的编码序列删除 ,基因中Pro8Ser9Asp10 的编码序列用Arg Lys Arg的编码序列取代 ,同时Leu157的密码子被Phe的密码子所取代。将hTNF α突变基因 ,插入原核高效表达载体pBV2 2 0中 ,构建高表达工程菌株。纯化表达产物 ,对连续 3批制备的新型rhTNF α,按人用《重组DNA制品质量控制要点》检定要求进行鉴定。结果DNA序列分析和蛋白质N末端、C末端部分氨基酸序列分析表明 ,nrhTNF α与天然的hTNF α相比较 ,N末端缺失了 7个氨基酸 ,13位氨基酸为Arg Lys Arg ,其后为天然hTNF α 11位以后的氨基酸。 15 7位Leu的密码子被Phe的密码子所取代。产物表达量占菌体蛋白的 6 7.4 %。经 (NH4) 2 SO4沉淀、Q SepharoseF .F .及S SepharoseF .F .柱层析分离纯化后 ,产品的纯度达 99% ,比活性达 1× 10 9IU/mg蛋白。结论成功地制备了nrhTNF ,对连续 3批制备的nrhTNF α按人用《重组DNA制品质量控制要点》检定要求进行鉴定 。

热休克蛋白CpkB对nrhTNF体外复性的促进作用

目的：探讨嗜热菌热休克蛋白CpkB在体外与新型重组人肿瘤坏死因子（nrhTNF）蛋白质复性的关系．方法：在原核细胞中表达并纯化CpkB蛋白;将nrhTNF在8mol／I-W中变性，然后在不同浓度的CpkB存在下进行体外复性，以复性后nrhTNF活性检测指标进行分析结果：在一定浓度下CpkB对nrhTNF的复性有明显的促进作用，最高复性率达到75％，而不使用CpkB的nrhTNF复性率最高仅引％结论：CpkB具有分子伴侣作用，可促进变性蛋白恢复正常结构与功能。

大肠杆菌表达人新型肿瘤坏死因子的纯化

目的：制备符合临床要求的高纯度新型人肿瘤坏死因子（ｎｈＴＮＦ），建立简单、高效的纯化途径．方法：用本室构建的ｎｈＴＮＦ基因工程菌，经发酵、收菌、裂菌、硫酸铵盐析，Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ及Ｓ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ层析，得到高活性、高纯度的ｎｈＴＮＦ单一色谱峰，比活性达１×１０９Ｕ／ｍｇ蛋白．结果：ｎｈＴＮＦ纯度达９８％以上，活性回收率为７９％．结论：纯化方法简单，且达到较好效果，为ｎｈＴＮＦ的大规模制备和临床应用打下基础．

生物课堂教学中学生发散思维能力的培养

发散思维能力是创造能力的核心成分;培养发散思维能力的主要方法有头脑风暴法和戈登技术;生物课堂教学中培养学生发散思维能力的途径包括导课时发散思维能力的培养、讲授新课时发散思维能力的培养和巩固新课时发散思维能力的培养.

疏水色谱对重组人白细胞介素2疏水性及活性影响的研究

疏水色谱对重组人白细胞介素２疏水性及活性影响的研究王增禄，张英起，赵宁，石继红，李波，朱宝娥，颜真（西安生物技术中心７１００３３）关键词重组人白细胞介素２；疏水性；色谱法中图号Ｑ７１白细胞介素－２（ＩＬ－２）具有促进Ｔ细胞增殖和分化、调节ＮＫ细胞活性...

常压色谱分离纯化重组人白细胞介素2

作者采用７ｍｏｌ／Ｌ盐酸肌直接裂解重组人白细胞介素２（ｒｈＩＬ－２）工程菌，溶解包含体蛋白，利用疏水色谱、凝胶过滤、离子交换分离纯化ｒｈＩＬ－２，各步收率分别为１４０％，８５％，７０％。终产品比活性为１．９×１０￣６Ｕ／ｍｇ，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为单一条带，得到高比活高纯度的ｒｈＩＬ－２．本方法利用疏水色谱既能分离又能促进ｒｈＩＬ－２复性的特点，克服了包含体蛋白较难溶解又易聚合的缺点，提高了ｒｈＩＬ－２活性，简化了实验步骤，用常压色谱使ｒｈＩＬ－２的大量纯化成为可能。