重组金属硫蛋白HcMT的原核表达及其与金属离子竞争反应

[目的]在不同p H范围内和不同时间下检测重组Hc MT结合的锌、铜离子的含量,对金属离子竞争结合金属硫蛋白的特征进行分析。[方法]构建重组表达载体,将重组质粒p ET-32a-Hc MT进行原核表达,诱导时加入Zn2+,获得菌体后超声破碎,上清中添加Cu2+,分离纯化融合蛋白Trx A-Hc MT,检测金属硫蛋白溶液紫外吸收情况。样品硝化后用ICP-OES检测金属硫蛋白结合的金属离子含量。[结果]在p H 3~9的范围内,重组Hc MT上结合的Zn2+含量随着p H值升高而升高。加入Cu2+后,重组Hc MT上结合的Cu2+浓度上升,Zn2+浓度下降。在p H 3时,重组Hc MT结合金属离子的比值Cu2+/Zn2+为最小值0.68,在p H 8时Cu2+/Zn2+为最大值1.48,有利于Cu2+竞争。当p H 8时,不同时间下Zn-Hc MT与Cu2+的竞争结果表明1 h时锌铜有竞争高峰。[结论]证明了铜离子可以取代结合在重组HcMT上的锌离子,在p H 7~9范围中结合1 h竞争效率最高,该研究为重组Hc MT在重金属解毒方面的应用奠定基础。