鸡CEBPA基因CDS区克隆、表达及生物信息学分析

为了研究增强子结合蛋白α(CCAAT/Enhancer Binding Protein Alpha,CEBPA)的氨基酸序列特征,以及其编码基因在固始鸡不同组织中的mRNA表达谱。采用PCR技术克隆得到CEBPA的CDS序列全长975 bp,可编码氨基酸325个。生物信息学分析结果显示CEBPA不存在跨膜结构和信号肽,蛋白结构主要由无规则卷曲和α-螺旋结构构成,且多分布在细胞核中;蛋白互做网络构建分析表明,该蛋白与主要与TRBs家族、Runx转录因子家族等相互作用;氨基酸序列对比发现,鸡和鹌鹑的亲缘关系较近;鸡CEBPA 5'调控区-2000 bp序列上启动子和CpG岛预测发现,该序列上有13个不同的启动子和一个长度1640 bp的CpG岛;qRT-PCR表明,CEBPA在12周龄固始鸡不同组织中胸肌和腿肌的表达量显著低于其他组织(P<0.05);不同发育时期胸肌中22周龄的表达量显著低于6周龄和55周龄的表达量(P<0.05);且CEBPA在罗斯鸡胸肌的表达量显著高于固始鸡胸肌的表达量(P<0.05)。以上结果为进一步深入探讨鸡CEBPA在胸肌的脂质沉积过程中的生物学功能奠定了基础。

海兰褐蛋鸡ZP 3基因结构及其在卵泡中表达规律分析

旨在探讨ZP 3基因在海兰褐蛋鸡中的表达特性,为后期研究ZP3基因在蛋鸡卵泡发育中的作用提供理论支撑。本研究以产蛋期50周龄(50 W)海兰褐蛋鸡为试验对象,利用RACE技术克隆ZP 3基因全长,并对编码区进行生物信息学分析。选择健康、体重相近的海兰褐蛋鸡6只,分别取心、肝、肺、肾、卵巢、胸肌、腿肌和不同等级卵泡构建表达谱。卵巢颗粒细胞经不同浓度(PBS、5 ng·mL^(-1)、10 ng·mL^(-1)、20 ng·mL^(-1))促卵泡素(follicle-stimulating hormone,FSH)处理后,提取总RNA,采用实时荧光定量检测ZP 3基因在各个样品的表达水平。结果表明,鸡ZP 3基因全长1415 bp,其中编码区1341 bp,共编码446个氨基酸,位于10号染色体上,包含9个外显子;其亲缘关系与猪最远;跨膜结构预测表示,其含有一个跨膜结构域和一个信号肽区域;对其亲疏水性进行分析,预测该蛋白为弱的疏水性蛋白,蛋白质结构主要由无规则卷曲构成。组织表达谱显示,ZP 3基因在鸡的卵巢中相对表达量最高。各等级卵泡ZP3表达分析显示,随着卵泡发育,ZP 3基因在成熟卵泡(F1)颗粒细胞层表达量最高;在使用FSH处理等级颗粒细胞后,发现ZP3表达量显著上调(P<0.05),暗示ZP3基因在颗粒细胞中受到FSH激素调节。本试验对ZP 3基因的结构进行了分析并预测该基因存在跨膜结构和信号肽区域。基因表达谱分析结果显示,ZP 3基因在卵泡发育过程中表达量逐渐升高且主要在颗粒细胞中表达,可能受到FSH的调节作用,因此预测,ZP 3基因可能与海兰褐蛋鸡繁殖功能相关。

合方治胃痛

合方是在辨证论治的前提下,把两首或两首以上的方剂相合使用。笔者在跟师抄方及读书过程中,有感于治胃痛小方合用取效的神奇,故对临床常用治胃痛小方进行简要总结阐述,并介绍名医合方治胃痛经验,以期为医者治疗胃痛提供新的组方思路。

蛋鸡INHBA的克隆分析及其对卵泡发育调控的研究

试验旨在探讨INHBA(Inhibin subunit beta A)基因在鸡卵泡发育过程中的作用,为提高蛋鸡产蛋性能提供理论依据。首先从海兰褐蛋鸡各级卵泡组织中提取总RNA,经反转录后对INHBA CDS编码区进行克隆且进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR法检测鸡INHBA在不同卵泡以及卵泡膜细胞和颗粒细胞中的表达规律。结果表明:扩增片段为1547 bp,包含1275 bp的编码区,编码424个氨基酸;海兰褐蛋鸡与日本鹌鹑、黄牛、绵羊、兔、猪、人、小鼠和非洲爪蛙的INHBA同源性分别为97.7%、78.2%、78.0%、77.4%、77.0%、72.8%、79.8%和72.8%,进化分析表明海兰褐蛋鸡的INHBA在进化过程中保守性较高,与日本鹌鹑关系最近,与哺乳动物相差也不远,与非洲爪蛙等两栖类动物相差最远。INHBA蛋白质理化性质分析表明,其属于弱酸性蛋白,不稳定,流动性较好。蛋白结构分析显示,其无跨膜域,N端有信号肽,无规则卷曲为整体的主要结构。不同卵泡INHBA表达显示,INHBA随着卵泡的发育表达量逐渐升高,并且在等级卵泡颗粒细胞中表达量最高,在等级卵泡颗粒细胞中添加低浓度促卵泡素(Follicle-stimulating hormone,FSH)处理后,INHBA表达显著升高,表明其在卵泡发育过程中可能受FSH的调控。研究结果可为后期INHBA功能以及其对鸡卵泡发育调控机制的研究提供一定的参考依据。