实时荧光RT-PCR一步法检测番茄环斑病毒

根据番茄环斑病毒 (ToRSV)各株系RNA1聚合酶基因的保守序列 ,设计并合成 1对引物和 1条TaqMan荧光探针 ,建立了对ToRSV的实时荧光RT PCR检测方法。该方法利用TaqMan荧光探针实时监测目的基因的扩增 ,实现RT PCR扩增与探针检测同时进行 ,不需PCR后处理 ,消除了PCR产物的污染 ,不需电泳和EB染色 ,减少了检测步骤 ,节省了时间。这个方法具有“灵敏、准确、简便、快速”的特点适合于种传病害的快速诊断和口岸检验检疫运用。

极端嗜盐古生菌启动子序列缺失突变的微量热研究

用微量热方法和DNA缺失突变技术研究了来源于极端嗜盐古生菌R1上的一个推测的启动子片段(RM10)在大肠杆菌中的启动子功能.启动子片段融合到质粒pKK232-8上无启动子的氯霉素乙酰转移酶(CAT)基因前来检测它驱动基因表达的能力,缺失分析RM10启动子片段定位具有启动活性的重要功能区.实验结果从热动力学角度揭示,这个启动子片段上含有-35区和-10区特征的1382～1517bp(碱基对)区段是它在大肠杆菌中具有启动子功能的关键部分;在1～1382bp区段或1571～1848bp区段上还存在它的负调控区.该研究为基因启动子功能研究提供了一种新的、更加灵敏便捷的、化学与生物学相结合的方法.

梨火疫细菌实时荧光PCR和诱捕PCR-ELISA检测方法的建立

根据梨火疫细菌中独特而保守存在的质粒pEA2 9,设计了 1对引物和 3条探针 ,建立了实时荧光PCR检测方法和诱捕PCR ELISA检测方法。实时荧光PCR采用带荧光标记的核酸杂交探针 ,边扩增边检测 ,步骤简单 ,不需PCR后处理 ,可避免假阳性和交叉污染 ;诱捕PCR ELISA检测方法只需简单处理的样品就能检测 ,减少了核酸不纯出现的漏检 ,由于增加了核酸杂交探针 ,可不需凝胶电泳EB染色检测 ,不会出现假阳性问题。

重金属污染碱性底泥的自养与异养细菌协同搅拌浸出(英文)

探讨了生物浸出法处理湘江河床多种重金属污染的碱性底泥。底泥中的多种重金属对水生生物与人类有较大的毒性以及显著抑制细菌的浸出,利用自养细菌与异养细菌协作的浸出方法可以解决这个问题。结果表明,底泥中锌、锰、铜和镉的生物浸出率分别达95.2%、94.2%、90.1%和84.4%。利用连续提取法分析了浸出前、后底泥中不同形态重金属的含量变化,发现浸出后底泥中残余重金属主要以铁锰氧化态、有机结合态和残渣态的形式存在,这些存在形态的生物毒性较低。本研究说明自养菌结合异养菌的浸出法可有效提高碱性底泥重金属的浸出率和降低生物毒性。

微生物的分子生物学检测技术进展

从PCR技术到生物芯片技术系统地综述了微生物的各种分子生物学检则方法,并对各种方法的特点进行了探讨。

嗜盐古菌R1中与真核同源基因rad25启动子的序列分析和启动活性研究

在盐生盐杆菌(Halobacterium halobium)R1中分析了真核同源基因rad25的转录,分析了rad25同源基因启动子片段的序列特征,用β_半乳糖苷酶基因(bgaH)为报告基因,利用启动子探针检测技术验证了rad25同源基因启动子片段在嗜盐古生菌WFD11中的启动功能;缺失分析进一步确认了rad25同源基因启动子具有嗜盐古菌启动子典型特征。从启动子和转录水平上证明盐生盐杆菌R1中真核同源基因rad25存在生物学功能,推测其可能在核苷酸切除修复(NER)起作用。

植原体TaqMan探针实时荧光PCR检测鉴定方法的建立

本研究成功建立了植原体分类鉴定和检测的 Taq Man探针实时荧光 PCR方法 ,该方法根据植原体 16S r DNA保守区设计了 1个 Taq Man广谱探针和 3个植原体组间点突变特异性探针 ,并对 9种植原体和 5种细菌以及 3个植物样本进行实时荧光 PCR。结果表明 ,用广谱探针可检测到所有植原体产生荧光信号 ,而细菌不产生荧光信号。当用植原体组间特异性探针检测时 ,仅能检测到该组植原体产生荧光信号 ,检测的敏感性比常规的 PCR-电泳检测高约 10 0倍、检测速度有较大提高。由于PCR产物是荧光探针检测 ,本方法特异性强 ,并可以用组特异探针直接确定植原体种类。实验采用完全闭管检测 ,降低了污染机会。本研究为其它原核生物、特别是不能培养菌。

河流重金属污染底泥的修复技术研究进展

基于我国部分河流底泥的重金属污染现状,综述了国内外关于底泥重金属处理研究进展和成果,并详细阐述了重金属去除的生物修复法.同时,结合重金属污染因子去除效率、处理成本以及环境安全性等问题,笔者提出生物修复法是一种具有潜在应用前景的方法,今后的深入研究可能为河流底泥重金属的处理和后续的资源化利用提供一定的理论依据.

氧化铜矿活化硫化浮选机理及其工业应用

复杂难处理的氧化铜矿具有氧化率高、结合率高、矿物组成复杂等特点。孔雀石是一种典型氧化铜矿,其在矿浆中会与水的偶极子相互吸引形而成定向排列的水化膜,不利于浮选。孔雀石在硫化浮选过程中,其表面形成的硫化面积小、硫化物不稳定且易脱落。本文对硫酸铵增强硫化效果进行了系统研究,研究发现铵盐对氧化铜矿表面的硫化具有明显的促进作用,且能有效地提高孔雀石硫化浮选回收率。对溶液中S元素组分分析发现,在孔雀石浮选的最佳浮选pH范围内,HS^(-)为主要的含硫组分,推测HS^(-)是孔雀石硫化的主要物质。Zeta电位结果表明:硫酸铵的加入能促进HS^(-)/S^(2-)等负离子在矿物表面吸附。原子力显微镜(AFM)测试分析表明,硫酸铵提高了孔雀石表面硫化物的稳定性。X射线光电子能谱(XPS)研究表明,硫化过程是硫离子与矿物表面的铜离子发生氧化还原反应过程,硫酸铵的加入能促进这一氧化还原反应的进行,提高硫化效率。基于硫酸铵促进活化硫化浮选机理的研究,形成了先硫后氧-深度活化氧化铜矿异步浮选新工艺,并且成功地应用于华刚矿业的生产实践,大幅提高氧化铜矿浮选回收率。

草甘膦可溶性粉剂防除柑桔园狗牙根和水花生的药效试验

柑桔园狗牙根和水花生防除试验结果表明，在有效成分相同的条件下，自配的 草甘膦可溶性粉剂的效果优于草甘膦水剂，与农民乐可溶性粒剂的效果相当。对这两 种恶性杂草，用药量以７５—１００ｇ ａ．ｉ．／６６７ｍ～２为宜。

Acidiphilium属菌DX-A的分离鉴定及其浸矿功能

从江西德兴铜矿酸性矿坑水中分离得到1株嗜酸细菌（命名为DX-A）,该菌株为革兰氏阴性菌,短杆状,菌体宽×长为（0.45-0.55）μm×（1.1-2.1）μm,最适生长pH为3.5,最适生长温度为30℃。该菌能利用FeCl3及多种硫化矿和葡萄糖等多种有机物进行生长,但是不能利用FeSO4进行生长,因而该菌为兼性异养型细菌。构建该菌的系统发育树,研究表明：菌株DX-A与Acidiphilium sp.PK46（AY765995）位于系统发育树的同一分支中,相似度为99%;菌株DX-A分别浸出黄铁矿和铁闪锌矿28 d后,含菌摇瓶中Fe2＋与Zn2＋的质量浓度分别可达到2.36g/L和2.47 g/L,而对照组中Fe2＋与Zn2＋的质量浓度分别为0.60 g/L和0.39 g/L;菌株DX-A和A.ferrooxidansATCC23270混菌分别浸出黄铁矿和铁闪锌矿比A.ferrooxidans ATCC23270单菌浸出效果分别高2.7%和10.3%,表明该菌能够浸出黄铁矿和铁闪锌矿并能促进自养菌的浸矿,为进一步研究异养菌促进自养菌浸矿提供了依据。

Acidithiobacillus ferrooxidans ATCC23270与矿物吸附过程的热量变化及不同条件下代谢热的基础研究

用微量热技术研究了不同条件下Acidithiobacillus ferrooxidans ATCC23270（以下简写为A.ferrooxidans ATCC23270）与硫化矿吸附过程的热量变化以及不同细菌浓度、不同的初始pH值及不同的培养条件下细菌的代谢产热情况。研究发现,矿浆浓度0.03g/mL,细菌浓度1.7×10^8个/mL的时候细菌与矿物的吸附放热最大。不同条件培养的细菌胞外多聚物的组成不同,与矿物吸附的反应热也不相同,黄铁矿培养细菌胞外多聚物含量最高,反应热也最高,说明细菌胞外多聚物在吸附过程中起重要作用。用微量热法能够很好地反映出细菌生长代谢过程中每个微观时刻的热量变化。对于A.ferrooxidans ATCC23270,最佳的代谢产热条件为：pH值为2.0和2.3,细菌浓度为3.0×10^8个/mL。不同培养条件下的细菌的生长代谢热不同,2039＋FeSO4培养的代谢热最大、放热最快。

金属型植物的研究进展

金属型植物是治理和修复土壤重金属污染的理想材料.综述了金属型植物的耐性机理、生殖生物学及进化生态学方面的研究进展,并对目前研究中存在的问题进行了分析和展望.

转基因芸苔属作物营养生长速率等级评判模型的构建

基于模糊集重心理论及熵值法构建了转基因芸苔属作物营养生长速率等级评判模型,该模型包含确立评价指标正态隶属函数、利用模糊集重心理论计算指标重心向量集、利用熵值法计算评价指标权重向量和营养生长速率等级划分4个基本步骤.以一常规杂交组合试验的营养生长指标测量值为例对该评判模型进行了演示,论证了该模型具有可操作性.

基于Acidithiobacillus ferrooxidans介导的共沉淀对酸性体系中重金属的固定（英文）

研究Acidithiobacillus ferrooxidans对酸性水体中复合重金属共沉淀过程的促进作用。A.ferrooxidans显著地提高了共沉淀体系中Fe(II)离子的氧化速率及硫酸羟基铁氧体的形成。在A.ferrooxidans存在的条件下Cu(II)浓度降低至0.058 mmol/L,而Cd在生物体系中浓度降至最低0.085 mmol/L。Pb主要以铅矾形式沉淀,硫酸羟基铁氧体促进了残余铅离子的沉淀。通过XRD、SEM和FTIR等技术对形成产物进行系统表征。共沉淀体系中主要的组分为高结晶度的黄钾铁矾,而A.ferrooxidans促进施式矿物在一价阳离子缺乏的反应后期形成。A.ferrooxidans存在体系中较高的Fe(II)离子氧化速率和Fe(III)离子供应速度有利于多面体晶体形成及其晶粒尺径增加。复合重金属离子进入硫酸羟基铁氧体的晶体结构,通过A.ferrooxidans介导的共沉淀能够高效地将重金属离子从酸性废水中去除。

转基因甘蓝型油菜亲和性等级识别方法构建

为预测转基因甘蓝型油菜商业释放的基因流环境生态风险,基于模糊数学中模糊聚类分析与模糊模型识别,并结合生物统计学相关知识,构建了转基因甘蓝型油菜亲和性等级识别方法。该方法包含转基因甘蓝型油菜种间组合亲和性的模糊聚类分析、模糊聚类结果F检验、种间组合风险等级划分和风险等级模式识别4个基本步骤。并在等级模式识别步骤中针对样本数据收集情况的不同,构建了不同的等级识别方法,与传统聚类的硬性划分相比更具灵活性。以收集的常规油菜杂交实验数据聚类形成6个风险等级模式,将一甘蓝型油菜种间杂交实验进行亲和性等级识别为例对该方法进行了演示,论证了该方法具可操作性。

微量热法研究环境NaCl浓度对盐生盐杆菌生长代谢的影响

采用TAMair微量热系统和安瓿法测定了盐生盐杆菌在不同NaCl浓度中生长的生长产热曲线,拟合得到盐生盐杆菌在不同NaCl浓度中生长的热动力学方程和热动力学参数,并分析了盐生盐杆菌生长的各种热动力学参数与环境NaCl浓度的关系.由此发现,盐生盐杆菌生长的最适NaCl浓度并不是传统认为的一个宽泛的范围——3.5mo·lL-1至约5.2mo·lL-1(NaCl饱和),而是约3.9mo·lL-1.在环境NaCl浓度由3.9mo·lL-1逐步升高至饱和的过程中,盐生盐杆菌的生长代谢持续减弱.进一步的透射电镜观察发现在近饱和的NaCl浓度中生长的盐生盐杆菌细胞发生了质壁分离,较好地解释了微量热研究的结果.由此对NaCl浓度变化导致嗜盐古生菌表面结构改变提出了新的解释.

改性生物质材料对Cr(Ⅵ)的吸附性能

在N,N-二甲基甲酰胺中,以次磷酸钠作为催化剂,采用柠檬酸对泡桐皮、芦苇、花生叶3种生物质材料进行化学改性,制备得到生物吸附剂,并研究Cr(Ⅵ)溶液p H值、初始溶液Cr(Ⅵ)浓度、吸附时间等因素对水溶液中Cr(Ⅵ)吸附率的影响。采用红外光谱分析仪对吸附材料的分子结构及其化学键进行表征。结果表明:3种改性生物质材料在pH值为2、Cr(Ⅵ)初始浓度为30 mg/L时,吸附性能较好,吸附平衡时间为120 min。可以用准二级动力学方程很好地描述生物质材料吸附过程。改性后的泡桐皮、芦苇、花生叶对Cr(Ⅵ)的最大吸附率分别为96.78%、91.85%和89.63%,其中改性后泡桐皮具有最大的吸附量。

利用光生空穴清除剂强化光催化黄铜矿生物浸出

通过嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)研究光生空穴清除剂(抗坏血酸、草酸、腐质酸和柠檬酸)对光催化黄铜矿生物浸出的影响。设置4组生物浸出实验:(1)可见光+0 g/L光生空穴清除剂;(2)可见光+0.1 g/L不同光生空穴清除剂(抗坏血酸、草酸、腐植酸和柠檬酸);(3)黑暗+0.1 g/L不同光生空穴清除剂(抗坏血酸、草酸、腐植酸和柠檬酸);(4)黑暗+0 g/L光生空穴清除剂(对照组)。结果表明,光照条件下,抗坏血酸和草酸作为光生空穴清除剂时,能够显著促进黄铜矿生物浸出。可见光+0 g/L光生空穴清除剂组的铜离子溶出率比对照组高18.7%;可见光+0.1 g/L草酸组和可见光+0.1 g/L抗坏血酸组的黄铜矿溶出率分别比对照组高30.1%和32.5%。SEM,XRD和FT-IR分析表明,抗坏血酸和草酸作为光生空穴清除剂能够捕获光生空穴和抑制黄钾铁矾在黄铜矿表面形成,从而促进光催化黄铜矿的生物浸出。

生物淋滤结合类芬顿反应去除底泥中重金属

结合Acidithiobacillus ferrooxidans生物淋滤与类芬顿反应以高效除去污染底泥中重金属.研究了15 d生物淋滤周期中p H值和ORP的变化,以及重金属Cu,Zn,Pb和Cd的去除情况.经过2 d生物淋滤处理后,反应体系p H值下降到2.5左右,此时向体系中加入5种不同剂量的H_2O_2(1 g/L,3 g/L,5 g/L,7 g/L,9 g/L),反应3 h完成类芬顿反应.结果表明,生物淋滤过程中p H值呈现下降趋势,从5.0降低到2.0左右,并维持在2.0附近波动.ORP从250 m V上升到700 m V附近,然后保持在700 m V左右.污染底泥经过15 d生物淋滤后,重金属去除率分别为:Cu为52.1%,Zn为65.8%,Pb为42.5%,Cd为83.25%.然而2 d生物淋滤加3 h类芬顿反应的最大金属去除率达到:Cu为59.8%,Zn为70.0%,Pb为52.7%和Cd为85.3%.实验表明该方法可以提高重金属的去除率,并大大缩短反应时间,从而提供了一种相对高效的去除底泥中重金属的方法.