一种水蛭素类融合蛋白与凝血酶作用的动力学模拟

通过将凝血酶抑制剂水蛭素的C端 2 0肽片段嫁接到血小板结合蛋白AnnexinⅤ上 ,可以期望获得既具有抗凝血活性 ,同时又具有导向性的新型工程蛋白质分子 .利用计算机辅助分子设计手段模拟了该融合蛋白的分子结构 ,并对该融合蛋白对凝血酶的抑制作用进行了分子动力学模拟 ,得到了支持上述想法的结果 .

重组蛋白质纯化技术

90年代以来 ,基因重组技术得到很大的发展 ,基因工程产品的分离纯化的成本约占其全部成本的 6 0 %～ 80 %,因此重组蛋白的分离纯化技术越来越重要。着重介绍了扩张柱床吸附层析技术 ,径向膜层析技术 ,灌注层析技术 ,液液萃取技术 ,置换层析技术和金属螯合亲和层析技术近年来进展情况以及它们的优缺点和应用范围。

富勒烯的生物活性研究进展

９０年代初以来，富勒烯类化合物的生物活性逐渐引起人们的注意，初步研究表明在抗艾滋病毒、酶活性抑制、切割ＤＮＡ、光动力学治疗等方面具有独特的功效．此类化合物在生化、医学、药物学等领域有良好的应用前景．

重组人尿激酶原的工业化制备与性质研究

将含有 pET2 9a prouk重组质粒的人尿激酶原工程菌经 10L种子罐培养及 10 0L发酵 ,IPTG诱导表达 ,其表达量为占菌体总蛋白的 2 0 % ,表达产物经体外变复性 ,CM 纤维素离子交换层析 ,Superdex 75分子筛层析及Affi preppolymyxinsupport亲和层析去热源 ,每 10 0L发酵液得重组人尿激酶原纯品 6g ,纯度达 95 %以上 ,比活大于 1.2× 10 4 IU /mg ,双链含量低于0 .5 % ,内毒素及热源含量、宿主蛋白残留量、宿主DNA残留量等均达到临床使用标准 .其分子量 (质谱测定 )、氨基酸组成、N、C 端氨基酸序列分析等均与理论值相符 .

T7 启动子作用下人尿激酶原 cDNA 在大肠杆菌中的高效表达及分离纯化

化学合成的人尿激酶原ｃＤＮＡ克隆在表达质粒ｐＥＴ１１ｄ中，在Ｔ７启动子的作用下，经０１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中获得表达。其表达量占菌体总蛋白的１５％，表达产物以无活性的包涵体形式存在。经体外变复性，Ｚｎ２＋选择性沉淀，抗体亲和柱层析，及Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ亲和吸附，所表达的人尿激酶原被纯化为单一条带，其比活约１１００００ＩＵ／ｍｇ。

尿激酶原活性测定方法研究

以双链尿激酶国际标准品 (IS)为对照 ,用显色底物法和凝块溶解法测定糖基化和非糖基化的尿激酶原的酶活性 ,结果表明与凝块法相比 ,显色底物法测定两种形式的尿激酶原的酶活力相近 ,测量误差小 ,重复性好 。

人纤溶酶原Kringle 5基因的克隆、表达及产物纯化和性质鉴定

根据人纤溶酶原的cDNA序列 ,利用PCR技术获得人纤溶酶原kringle 5结构域的基因 ,并将其克隆至表达质粒 pET2 5b(+)中 .重组载体 pET2 5b(+) /kringle 5转化至大肠杆菌BL2 1(DE3)中 ,经IPTG诱导表达 ,在 12kD处可见明显的表达条带 ,表达产物大部分以无活性的包涵体形式存在 .包涵体经过体外变复性 ,SP SepharoseFF离子交换柱一步纯化 ,15%SDS PAGE鉴定考染一条带 ,纯度达 95%以上 .所得到的目标蛋白能明显的抑制bFGF诱导的牛毛细血管内皮细胞增生 .

测定血红蛋白的一种电化学分析方法

血红蛋白可以在微裸银电极上得到电流响应。蛋白质溶液中加入适量的十二烷基硫酸钠，血红蛋白峰电流明显增大，峰形对称，可直接用于血红蛋白的分析测定。实验发现，在５．０×１０－７～５．０×１０－６ｍｏｌ／Ｌ浓度范围，血红蛋白氧化峰电流与其浓度呈正比，用于人体血样中血红蛋白的测定与光度法结果一致。

重组人尿激酶原一般药理学研究

试验结果显示 :尿激酶原 (prouk) 2 2 .5万IU/kg、4 5 .0万IU/kg和 90 .0万IU/kg3个组、赋形剂组和生理盐水组动物尾静脉注射给药 ,对小鼠一般行为活动表现和自发活动次数均无明显影响 .prouk 2 2 .5万IU/kg、4 5 .0万IU/kg和 90 .0万IU/kg三个组、赋形剂组和生理盐水组动物尾静脉注射给药 ,对大鼠一般行为活动表现均无明显影响 ,均能在旋转棒上协调平衡运动 .此外 ,给药后 2 0min ,三个剂量组大鼠凝血时间虽有延长 ,但与生理盐水组或赋形剂组比较无显著性差异 (P >0 .0 5 ) .prouk 11.2 5万IU/kg、2 2 .5 0万IU /kg、4 5 .0 0万IU/kg三组静脉滴注给药 ,麻醉犬的ECG、HR、呼吸均无明显改变 ,与赋形剂组比较无显著性差异 .但prouk高剂量组动物的SAP、DAP、MAP在给药 10～ 15min时短暂下降 ,这些反应在给药 30min后均恢复正常 .结果表明 ,prouk在受试剂量范围内对小鼠、大鼠精神神经活动和大鼠的凝血时间等均无明显影响 ,在 4 5 .0

重组人尿激酶原急性毒性和长期毒性的研究

(1)重组人尿激酶原 (prouk)单剂量分别经静脉和腹腔注射给药均未测出小鼠的LD50 ,因此改作其最大给药量 .结果表明 ,prouk单剂量经静脉及腹腔注射给药小鼠的最大给药量不低于 9,0 0 0万IU /kg .(2 ) prouk 36 .0万IU/kg、6 7.5万IU/kg、135 .0万IU/kg和 2 70 .0万IU/kg四个剂量组连续给食蟹猴静脉滴注 14d ,每组 4只猴 ,雌雄各半 .实验过程中未见动物死亡 .prouk 36 .0万IU/kg剂量组的食蟹猴给药期及恢复期 ,精神状态良好 ,一般行为活动正常 ,体重、分泌物、食欲及摄食量、心电图、血常规、血液生化、体表观察、尿常规和粪便隐血试验等基本正常 ,无明显变化 .给药第 14天和恢复期的脏器系数与病理组织学检查表明 ,动物的脏器、组织均未见由药物引起的异常病理改变 ,与生理盐水组或赋形剂组之间比较均无明显差异 .而prouk 6 7.5万IU/kg、135 .0万IU/kg、2 70 .0万IU /kg剂量组的食蟹猴出现皮下出血、充血、紫癜、尿、粪便隐血反应阳性、贫血以及心率加快等症状 .给药期及恢复期 ,血清中检测出少量prouk抗体 .结果表明 ,prouk的无毒安全剂量不低于 36 .0万IU/kg .

辅酶Ⅰ在苯并咪唑修饰银电极上的还原反应

辅酶Ⅰ在苯并咪唑修饰银电极上的还原反应李根喜，陈洪渊，朱德煦（南京大学生物化学系，生物医药技术国家重点实验室，化学系，南京，２１００９３）关键词ＮＡＤ~＋，苯并咪唑，化学修饰电极还原态烟酰胺辅酶Ⅰ（ＮＡＤＨ）的氧化反应已进行了大量研究。但有关氧化态辅?..

在全量子理论下蛋白质分子中激发的孤立子的特征

用全量子力学理论代替过去的半经典半量子理论推导出了在蛋白质分子中激发的、传递生物能量和信息的孤立子的运动方程。把理论建立在可靠的量子理论基础上。并给出了在此情况下孤立子的量子力学特性。

含P_RP_L，Ptac双启动子表达载体的构建

报道了一个新的含ＰＲＰＬ，Ｐｔａｃ双启动了的大肠杆菌表达载体ｐＮＪ的构建．在ＰＲＰＬ，Ｐｔａｃ分别或共同启动下，报告基因人肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）基因获得了较好的表达．双启动共同启动时的表达水平为两启动子分别启动时的表达水平之和．

TNF-α在PMA和IFN-γ诱导U 937细胞生长和分化过程中的作用

本文报道了佛波酯(PMA)和γ-干扰素(IFN-γ)对U937细胞生长和分化的调控作用及其机制。PMA和IFN-γ能以剂量依赖的方式诱导U937细胞向成熟单核/巨噬细胞样细胞分化,同时抑制其细胞的生长。实验发现PMA和IFN-γ可诱导U937细胞表达TNF-α特异性mRNA和蛋白质。U937细胞培养中加入特异性抗TNF-α抗体可以抑制PMA和IFN-γ诱导U937细胞的分化和生长。这说明内源性的TNF-α在介导PMA和IFN-γ上述生物效应过程中起一定作用。

功率超声方法对蛋白质包涵体的解聚

用低频功率超声波辐照方法，实现了在低浓度变性剂（４ｍｏｌ／Ｌ尿素）中对大肠杆菌体系表达产物缩短的人巨噬细胞集落刺激因子（ｈＭ－ＣＳＦ）包涵体的解聚，以期改进普遍采用的强烈变性剂（８ｍｏｌ／Ｌ尿素）溶解包涵体方法，超声处理后的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ在分子量１７０００上显示了与８ｍｏｌ／Ｌ尿素溶解结果相同的条带．表现出功率超声方法在基因工程包涵体解聚中的应用前景．

白细胞介素-2加强小鼠T淋巴细胞产生白细胞介素-3

本文报道了白细胞介素-2(IL-2)刺激ConA(5μg/ml)活化的小鼠T细胞产生的条件培养液(TCM)中含有CFU-GEMM诱导活性。这种CFU-GEMM诱导活性的生成在IL-2作用后48h达到高峰。特异性抗IL-3单克降抗体可以完全中和该条件培养液中的CFU-GEMM诱导活性。进一步证明,TCM可以刺激IL-3依赖细胞系FDC-P_1细胞的增殖;在IL-2作用于ConA活化的T细胞后可促进其细胞表达高水平的IL-3mRNA。这些结果表明IL-2可以加强小鼠T细胞产生IL-3。

神经递质在聚吡咯膜中的掺入和释放

用循环伏安法比较了五种神经递质在聚吡咯膜内的掺入和释放过程,它们与聚吡咯膜结合的程度呈以下序列:天冬氨酸>5—羟色胺>谷氨酸>γ—氨基丁酸>甘氨酸。并用了一个电脉冲(1ms)制激含有天冬氨酸的聚吡咯膜,模拟了突触前膜对神经递质的释放过程,实现了在非生命体系中借助于信息分子的化学通讯。

蛋白质特异性断裂试剂研究进展

蛋白质特异性断裂试剂是近年来发展起来的一些具有特异性断裂肽键功能的化学工具．这些断裂试剂可分为两类，一类通过氧化断裂机制实现蛋白空间结构特异性切割，另一类通过水解断裂机制实现序列特异性切割．蛋白质特异性断裂试剂在蛋白质序列测定，蛋白质的结构与功能研究，蛋白质与核酸相互作用研究以及新型化学治疗药物的合成等方面有着广阔的应用前景．