miR-34a/SIRT1在重症监护病房获得性衰弱中的作用及其机制

目的探讨miR-34a/SIRT1在重症监护病房获得性衰弱(ICU-AW)中的作用及其机制。方法(1)诱导C2C12小鼠骨骼肌细胞分化成肌管,并分为ICU-AW模型组[ICU-AW组,用脂多糖(LPS)干预12 h]与正常对照组(等量无菌水干预12 h)。采用Western blotting检测两组肌肉环指蛋白1(MuRF-1)、萎缩相关基因1(Atrogin-1)蛋白、沉默调节蛋白1(SIRT1)表达水平,RT-qPCR检测两组微小核糖核酸-34a(miR-34a)及MuRF-1、Atrogin-1、SIRT1 mRNA的表达水平,并在光镜下观察两组小鼠C2C12骨骼肌细胞生长及分化情况。(2)将ICU-AW细胞分为对照组(siRNA的转染剂干预)、Scra siRNA组(转染剂和非特异性siRNA干预)、miR-34a siRNA组(miR-34a siRNA转染剂和特异性siRNA干预)、Vehicle组(SIRT1激动剂的溶剂二甲基亚砜干预)及SRT1720组(SIRT1激动剂SRT1720干预)。采用Western blotting检测各组SIRT1、Atrogin-1、MuRF-1蛋白表达水平,RT-qPCR检测各组miR-34a及MuRF-1、Atrogin-1、SIRT1 mRNA表达水平。(3)将ICU-AW细胞分为对照组(miR-34a siRNA的转染剂干预)、miR-34a siRNA组(转染剂和特异性siRNA干预)、miR-34a siRNA+Vehicle组(转染剂、特异性siRNA和二甲基亚砜干预)及miR-34a siRNA+EX-527组(转染剂、特异性siRNA和SIRT1抑制剂EX-527干预),采用Western blotting检测并比较各组Atrogin-1、MuRF-1蛋白表达水平,RT-qPCR检测并比较各组Atrogin-1、MuRF-1 mRNA表达水平。结果光镜下可见第4天C2C12小鼠骨骼肌细胞肌管分化形成,与正常对照组比较,ICU-AW组肌管明显萎缩。RT-qPCR及Western blotting检测结果显示,与正常对照组比较,ICU-AW组Atrogin-1、MuRF-1 mRNA及蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05),miR-34a相对表达水平明显升高(P<0.001),SIRT1 mRNA及蛋白相对表达水平明显降低(P<0.01)。RT-qPCR检测结果显示,与对照组(转染剂干预)比较,miR-34a siRNA组的miR-34a及Atrogin-1、MuRF-1 mRNA和蛋白相对表达水平明显降低(P<0.01或P<0.001),SIRT1 mRNA和蛋白相对表达水平明显升高(P<0.01);与Vehicle组比较,SRT1720组SIRT1 mRNA和蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05),而Atrogin-1、Mu RF-1 mRNA和蛋白相对表达水平明显降低(P<0.05)。与miR-34a siRNA组比较,Scra siRNA组miR-34a及Atrogin-1、MuRF-1 mRNA和蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05、P<0.01或P<0.001),而SIRT1 mRNA和蛋白相对表达水平明显降低(P<0.01)。RT-qPCR及Western blotting检测结果显示,与miR-34a siRNA+Vehicle组比较,miR-34a siRNA+EX-527组Atrogin-1、MuRF-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论ICU-AW状态下miR-34a过度激活,通过抑制SIRT1的表达导致骨骼肌萎缩,可能在ICU-AW发病过程中起重要作用。

软杀伤战术激光武器及作用机理的研究

光电对抗技术是随着光电技术在军事领域中的广泛应用应运而生的一门崭新学科,而软杀伤激光武器是其中的重要组成部分。软杀伤激光武器作为光电对抗的一种重要手段,在高技术战争中发挥着重要作用,它是以干扰破坏敌方光电系统或致盲、半致盲敌方人员为目的的激光武器,论述了软杀伤武器的作用机理及未来的发展方向。

百草枯通过调节Wnt/β-catenin信号通路促进肺泡上皮细胞上皮间质转化

目的探讨百草枯(PQ)诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞RLE-6TN发生上皮间质转化(EMT)的作用及其分子机制。方法将体外培养的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞RLE-6TN细胞用20μmol/L的百草枯处理24 h,采用倒置显微镜观察细胞形态学变化;RT-PCR和Western blot法检测细胞中β-catenin、上皮表型标记蛋白E-cadherin及间质表型标记蛋白Vimentin的表达;Transwell侵袭实验检测百草枯处理组与阴性对照组细胞侵袭能力变化。使用β-catenin靶向siRNA抑制其表达后,进一步采用RT-PCR和Western blot检测β-catenin、E-cadherin和Vimentin的表达水平,Transwell法检测细胞侵袭能力变化。结果体外百草枯溶液可显著诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞RLE-6TN上皮间质转化的发生,并伴随着细胞侵袭能力的显著增强。靶向沉默β-catenin基因后,百草枯诱导的上皮间质转化过程被逆转,同时细胞侵袭能力显著减弱。结论百草枯通过调控β-catenin来诱导RLE-6TN细胞上皮间质转化的发生,进而促进肺纤维化的形成。

下呼吸道感染患者血清降钙素原水平与营养状况的关系探讨

目的探讨下呼吸道感染患者血清降钙素原水平(PCT)与营养状况的关系,为临床及时预测及评估患者营养状况提供依据。方法测定175例下呼吸道感染患者入院时血清PCT、前清蛋白(PA)、清蛋白(Alb)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血清钙水平(Ca2+)和血红蛋白(Hb)水平、淋巴细胞计数(LY)等营养指标。根据PCT水平进行评分,将患者分为5组,进行营养状况比较以及PCT评分与营养指标的相关性分析。结果不同PCT组间患者血清PA、Alb、TC、HDL-C、LDL-C和Ca2+水平差异显著(F=9.815,P<0.01;F=4.812,P<0.01;F=5.604,P<0.01;F=5.367,P<0.01;F=4.642,P<0.01;F=7.159,P<0.01)。患者PCT评分与Hb、血清PA、Alb、TC、HDL-C、LDL-C和Ca2+水平具有负相关性(r=-0.169,P<0.05;r=-0.461,P<0.01;r=-0.434,P<0.01;r=-0.299,P<0.01;r=-0.358,P<0.01;r=-0.165,P<0.05;r=-0.287,P<0.01)。结论下呼吸道感染患者PCT水平与营养状况具有密切关系,可作为预测和评价患者营养状况的指标。

下呼吸道铜绿假单胞菌的多耐药现状及临床策略

目的:了解近几年医院铜绿假单胞菌(Pseu-domonas AERUGINOSA,PA)在慢性肺部疾病中的多耐药状况和病种分布,以指导合理用药。方法:收集医院呼吸科2004年1月～2007年12月分离的耐药PA,采用K-B法做药敏试验,用PEMS3.1软件包分析。结果:呼吸道1176株耐药PA中多耐药株占有率逐年升高,主要分布于慢性阻塞性肺病、呼吸机相关肺炎及支扩病人。PA对亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、头孢吡肟、阿米卡星的耐药率相对较低。结论:PA在慢性肺部疾病中的多耐药性已十分突出,应引起临床医生的重视;应着重预防,合理用药,加强监测和隔离;治疗应选择科学的联合用药方案。

热射病死亡1例临床诊疗分析

病例 男性,21岁,未婚,战士。主因训练后意识不清伴间歇抽搐11 h入院。发病时间：9月19日18时,潮热天气。患者于训练后突然晕倒,伴抽搐、呕吐。送至当地人民医院后给予补液、降温等对症治疗,无明显好转,11 h后转至我院。入院查体：T 38.9℃（腋温）,R 20次/min,P 101次/min,BP14/9 k Pa,身高175 cm,体重65 kg。

ICU获得性衰弱研究进展

对于重症监护病房（ICU）患者,不仅要维持生命,还必须最大限度地降低并发症,改善预后.由神经肌肉功能紊乱导致的ICU获得性衰弱（ICU-AW）是重症患者的严重并发症之一,它不仅影响患者的在院治疗,而且长期困扰患者出院后的日常生活,已引起国内外学者的广泛关注.

碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌分子流行病学分析

目的研究西部战区总医院碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)的流行病学特征及耐药机制。方法收集2015年1月-2018年12月临床各种标本分离出的CRE 121株,采用VITEK 2-Compact全自动微生物分析仪进行鉴定和体外药敏试验,聚合酶链反应(PCR)法及测序检测碳青霉烯酶、ESBL酶、AmpC酶和膜孔蛋白基因;肠杆菌科基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)进行同源性分析。结果121株CRE中碳青霉烯酶阳性96株,其中65株产blaKPC、25株产blaNDM-1、7株产blaOXA-48、2株产blaVIM,有2株同时产blaKPC和blaNDM-1,1株同时产blaKPC和blaVIM;未检测到blaIMP、blaGES基因;blaSHV、blaTEM和blaDHA检出率分别为46.3%、47.1%和37.2%;OMPF、OMPC缺失/突变率分别为48.1%、84.6%,OMPK35、OMPK36缺失/突变率分别为35.7%、91.1%。药敏结果分析发现121株CRE对青霉素、头孢菌素类抗生素耐药率高,对阿米卡星耐药率最低。ERIC-PCR结果显示56株碳青霉烯类耐药克雷伯菌有5种基因型;26株碳青霉烯类耐药大肠埃希菌有3种基因型;23株碳青霉烯类耐药阴沟肠杆菌有3种基因型。结论该院临床分离的CRE以blaKPC为主要耐药基因,其次为blaNDM-1;部分CRE既携带碳青霉烯酶基因,同时合并膜孔蛋白基因缺失/突变。从分型结果得出,部分菌株同源性非常高,存在克隆传播现象。

构建脓毒症大鼠ICU获得性衰弱模型的研究

目的构建ICU获得性衰弱大鼠模型。方法健康雄性SD大鼠72只,随机分成12组(对照3、6、9d组;制动3、6、9d组;LPS3、6、9d组;LPS加制动3、6、9d组),各6只,LPS组和LPS+制动组腹腔注射脂多糖内毒素(LPS),对照组和制动组腹腔注射等体积生理盐水。经上述处置后,将制动组和LPS+制动组大鼠于固定器制动至各分组时间点。于各分组时间点处死大鼠,测量实验前后大鼠体重;留取膈肌及双侧腓肠肌标本行HE染色,采用RT-PCR法检测E3泛素连接酶基因Atrogin-1、Murf1mRNA表达水平。结果LPS+制动组较其他各组体重明显下降,肌纤维横径显著减小(P<0.05);且较其他各组腓肠肌和膈肌Atrogin-1、Murf1mRNA相对表达量显著增高(P<0.05)。结论腹腔注射LPS加制动可作为一种简便的构建ICU获得性衰弱大鼠模型的方法。

舌下微循环成像系统在心肌梗死后远端微循环变化观察中的应用

目的探索舌下微循环成像系统(简称微视系统)应用于心脏微血管检测的可行性,并探讨其在冠脉微循环障碍诊断、治疗及预后评估中的临床价值。方法以正常SD大鼠作为研究对象,利用微视系统对大鼠冠脉主干及其分支微循环进行检测。另取40只SD大鼠随机分为心肌梗死组(n=20)与假手术组(n=20),心肌梗死组大鼠结扎左冠状动脉前降支制作心肌梗死模型,假手术组与心肌梗死组接受同样处理但不结扎。利用微视系统对假手术组及心肌梗死组大鼠手术前及手术后5、10、20min左前降支远端微血管进行检测和分析,检测指标包括总血管密度(TVD)、灌注血管密度(PVD)、灌注血管比例(PPV)、微血管流动指数(MFI)、异质性指数(HI)。结果微视系统下,正常大鼠心脏左右冠脉及其分支微血管清晰可见,血流灌注连续,血管密集、分布均匀。在心肌梗死组大鼠中,结扎时间越长,微血管脉络越模糊不清,血流显影中断,血管分布不均,心肌梗死20min时点微循环基本不显像,血流基本消失。与心肌梗死5min时点比较,心肌梗死10、20min的TVD、PVD、PPV、MFI均降低(P<0.05),HI升高(P<0.05)。与假手术组比较,心肌梗死组TVD、PVD、PPV、MFI均降低(P<0.05),HI升高(P<0.05)。结论微视系统可用于正常及病变状态下大鼠心脏微循环的检测。

极危重劳力型热射病1例分析

病例男,战士,18岁,因"训练后高热伴意识障碍1 d",于2018年7月19日16时入院。前一日17时患者5 km越野训练后,出现高热(腋温40.0℃),伴意识丧失,现场予以平卧、解开衣物、浇凉水、冰块外敷等处理。转运过程中出现呕吐、四肢抽搐伴大小便失禁,入外院重症医学科时体温39.0℃,予以降温、补液、抗感染、气管插管机械通气等处理后,体温波动在38.0~39.0℃,意识无好转且频繁抽搐,遂转入西部战区总医院重症医学科治疗。

早期综合康复干预脓毒症并发重症监护病房获得性衰弱一例

重症监护病房获得性衰弱(intensive care unit-acquried weakness,ICU-AW)是危重症患者最常见的神经肌肉损害,影响危重症患者的临床进程及结局[1]。ICU-AW在危重症患者中的发生率为30%~50%,在脓毒症患者中更高,超过67%[2]。ICU-AW可导致脱机困难、ICU住院时间延长、高额住院费用、增加并发症及死亡率等严重问题[3]。目前ICU医师对ICU-AW的认识程度不足,导致其常被忽视、低估甚至误诊。现报道1例脓毒症休克、多器官功能衰竭、机械通气及连续肾脏替代疗法(continuous renal replacement therapy,CRRT)支持的重症患者出现ICU-AW,并及时进行早期综合康复治疗的诊疗经过。

应用ECMO成功救治肾移植术后PJP1例并文献复习

病例男性,31岁,因咳嗽、咽痛1 w,加重并发热1 d入院。既往:3年前发现血压升高。2017年于医院诊断为"尿毒症",后规律血液透析治疗,至2020年2月行异体肾移植术,术后服用他克莫司、伐昔洛韦及泼尼松片,未行正规的抗耶氏肺孢子虫(PJ)治疗。入院时呼吸22次/min,鼻导管吸氧,3.5 L/min,白细胞偏高。

229例慢性胃炎患者幽门螺杆菌培养及耐药情况

目的了解慢性胃炎患者H.pylori感染及其耐药情况,为临床治疗提供参考。方法慢性胃炎患者胃镜活检标本培养分离H.pylori,对分离的H.pylori采用纸片扩散法进行耐药性检测。结果229例患者分离出97株H.pylori;H.pylori分离阳性率为42.36%(97/229),其中男性分离率为43.79%(67/153),女性分离率为39.47(30/76);92株H.pylori对抗生素的耐药性分别为:甲硝唑8.7%,克拉霉素7.6%,阿莫西林1.1%、呋喃唑酮1.1%,阿奇霉素4.4%,左氧氟沙星0%。结论慢性胃炎患者H.pylori感染率较高,但与性别、年龄无关;慢性胃炎H.pylori对常用抗生素敏感,建议采用左氧氟沙星、阿莫西林、呋喃唑酮进行治疗。

靶向沉默HIF-1α信号通路抑制百草枯中毒诱导的肺泡上皮细胞上皮间质转化

目的:探讨HIF-1α信号通路在百草枯(paraquat,PQ)诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用机制。方法:使用20μmol/L浓度的百草枯溶剂对大鼠Ⅱ型肺泡上皮RLE-6TN细胞干预24 h,随后在倒置光学显微镜观察各组细胞形态学变化;用real-time PCR与Western blot法检测RLE-6TN细胞中HIF-1α、上皮表型标记蛋白E-cadherin及间质表型标记蛋白Vimentin的表达,Transwell侵袭实验检测各处理组细胞侵袭能力的改变;使用HIF-1α靶向si RNA抑制其表达后,进一步采用RT-PCR和Western blot检测HIF-1α、E-cadherin和Vimentin的表达水平,Transwell法检测细胞侵袭能力变化。结果:体外百草枯溶液可显著诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞RLE-6TN细胞HIF-1α表达升高和上皮间质转化的发生,同时细胞的体外侵袭能力也增强。靶向沉默HIF-1α基因后,百草枯诱导的上皮间质转化过程被逆转,同时细胞侵袭能力显著减弱。结论:百草枯通过调控HIF-1α信号通路来诱导RLE-6TN细胞上皮间质转化的发生,进而促进肺纤维化的形成。

急性肺血栓栓塞症患者复发静脉血栓栓塞的危险因素研究

目的分析急性肺血栓栓塞症(PTE)患者复发静脉血栓栓塞(VTE)的危险因素。方法回顾性选取2017年12月至2020年12月于中国人民解放军西部战区总医院接受治疗的急性PTE患者185例。根据患者出院后12个月是否复发VTE分为复发组(n=63)和非复发组(n=122)。收集患者一般资料、实验室检查指标。采用多因素Logistic回归分析探讨急性PTE患者复发VTE的影响因素。结果复发组男性占比及年龄≥60岁、肥胖、合并高血压、合并糖尿病、接受溶栓治疗、出院前D-二聚体升高、出院前N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)升高者占比高于非复发组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,男性〔OR=1.542,95%CI(1.239,1.919)〕、年龄≥60岁〔OR=1.691,95%CI(1.336,2.140)〕、肥胖〔OR=1.482,95%CI(1.195,1.838)〕、合并高血压〔OR=1.862,95%CI(1.352,2.564)〕、合并糖尿病〔OR=1.592,95%CI(1.219,2.079)〕、接受溶栓治疗〔OR=1.711,95%CI(1.298,22.255)〕、出院前D-二聚体升高〔OR=1.352,95%CI(1.092,1.674)〕、出院前NT-proBNP升高〔OR=1.511,95%CI(1.259,1.813)〕是急性PTE患者复发VTE的危险因素(P<0.05)。结论男性、年龄≥60岁、肥胖、高血压、糖尿病、接受溶栓治疗及出院前D-二聚体≥1.0 mg/L、NT-proBNP≥450 ng/L是急性PTE患者复发VTE的危险因素。

替考拉宁药代动力学指导重症G^+菌感染患者个体化用药的临床分析

目的探讨替考拉宁药代动力学指导个体化用药在重症G^+感染患者中的优势。方法选取西部战区总医院确诊为重症G^+感染患者80例,随机分成替考拉宁标准组与优化组各40例。用高效液相色谱法(HPLC)进行血药浓度监测(TDM)。标准组按说明书给药,优化组在药代动力学指导下个体化给药。比较两组患者第3、6剂谷浓度及目标谷浓度达标率、AUC0-24/MIC≥125、345的达标率、第1、4天体温、炎性指标、细菌清除率、结局指标、药物不良反应等,评价其疗效及安全性。结果 HPLC法标准曲线方程式:Y=14.316X+2.881 (r2=0.9999,n=6)。与标准组比较,优化组第6剂谷浓度及达标率更高(11.16±3.16 mg/L vs. 8.96±4.10 mg/L,82.5%vs. 32.5%,P<0.05); AUC0-24/MIC≥345达标率更优(67.5%vs. 27.5%,P<0.05);第1、4天WBC、CRP下降更快;细菌清除率更佳(80%vs. 55%,P<0.05);治疗总有效率更好(85%vs. 65%,P<0.05)。与谷浓度密切相关的是给药剂量(kg,mg/kg)和肌酐清除率(CLcr,ml/min)。拟合方程式:Log C3=0.405+0.068 kg3-0.001 CLcr3(VIF 1.023,R2=61.8%,P<0.001),Log C6=0.92+0.042 kg6-0.004 CLcr6(VIF 1,R2=73.5%,P<0.001)。结论 HPLC法进行TDM准确、可靠。替考拉宁药代动力学指导的个体化用药治疗重症G^+感染患者疗效高,安全性好。拟合方程式可为临床用药提供参考。

NLRP3炎症小体在ICU获得性衰弱大鼠呼吸肌和下肢肌中的表达

目的探讨重症监护室获得性衰弱(ICU-AW)大鼠吸肌和下肢肌组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体的表达及作用。方法将40只健康雄性SD大鼠完全随机分为对照组(sham组)和实验组(脓毒血症组),采用盲肠结扎穿孔术在实验组大鼠中构建ICU-AW模型,对照组仅行开腹暴露盲肠手术;造模96 h后收集大鼠腓肠肌和膈肌标本,采用HE染色观察病理学变化并计算肌纤维横截面积,采用qRT-PCR和western blot的方法检测大鼠腓肠肌和膈肌中Atrogin-1、MuRF1、NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18的表达。结果盲肠结扎穿孔术96 h后,大鼠腓肠肌和膈肌纤维排列较对照组疏松,肌纤维横截面积较对照组明显减少(P<0.05),Atrogin-1、MuRF1基因和蛋白表达量较对照组明显升高(P<0.05);ICU-AW大鼠腓肠肌和膈肌中NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18基因和蛋白表达量较对照组明显升高(P<0.05)。结论盲肠结扎穿孔术制备的脓毒血症模型中,吸肌和下肢肌溶解参与ICU-AW的发生,NLRP3炎症小体相关信号通路参与上述过程。