突变型HIF-1α慢病毒载体的构建及其在常氧条件下的抗降解作用

目的构建点突变型低氧诱导因子-1α(HIF-1α)慢病毒载体,并检测其在常氧条件下的抗降解作用。方法根据人的HIF-1α基因(NM_001530),对其全长编码区序列进行如下定点突变:803位天冬酰胺突变成丙氨酸,564位脯氨酸突变成丙氨酸,402位脯氨酸突变成丙氨酸。设计并合成3对引物用以导入变异点。PCR扩增序列片段,然后将目的基因PCR产物连接到载体pEGFP-N1上,构建真核表达载体pEGFP-N1-mutant/HIF-1α。PacI和AscI酶切鉴定后,用LR重组系统将目的序列重组到慢病毒载体plenti6.3V5-DEST上,构建慢病毒载体Lenti-MT(突变型HIF-1α)及Lenti-WT(野生型HIF-1α)。将Lenti-MT、Lenti-WT及Lenti-LacZ(对照组)转染293T细胞后,采用qPCR检测目的基因的表达。转染后的细胞在低氧条件下(2%O2)培养48 h,然后常氧条件下培养48 h,采用Western blot检测HIF-1α蛋白在不同氧浓度条件下的表达情况。结果与WT测序结果对比表明MT已被完成。酶切结果证明已成功构建pEGFP-N1-mutant/HIF-1α。qPCR结果显示Lenti-MT组目的基因表达高于Lenti-WT组,且差异具有统计学意义。低氧条件下,HIF-1α在WT组和MT组中的蛋白表达差异无统计学意义。但常氧条件下培养48 h后,WT组目的蛋白的表达显著下降,而MT组变化不大。上述结果表明MT具有明显的抗降解作用。结论成功构建了突变型HIF-1α,慢病毒载体在常氧条件下,Lenti-MT具有显著的抗降解作用。

干细胞因子在大鼠下颌骨缺损修复中的表达研究

目的:探讨在SD大鼠下颌骨临界性骨缺损(critical size bone defect,CSD)与自愈性骨缺损修复过程中,各时相点干细胞因子(stem cell factor,SCF)的表达情况。方法:①分别在36只SD大鼠双侧下颌骨的下颌角部制造临界性骨缺损(直径5 mm)和自愈性骨缺损(直径2 mm)模型,实验动物分为6组,在术后第1、3、5、7、14、21天分别处死;②利用免疫组织化学方法检测骨缺损区各时相点SCF的表达情况;③利用Western印迹法检测骨缺损区各时相点SCF存在与否,并进行半定量分析。结果:成功构建了大鼠双侧下颌骨的临界性骨缺损和自愈性骨缺损模型。免疫组织化学结果显示,骨缺损愈合的各时相点SCF均有较高的表达,但SCF在临界性骨缺损组各时相点的表达,均低于自愈性骨缺损组。结论:SCF在骨缺损修复中发挥重要的作用。

压电骨皮质切开术加速正畸牙移动的临床效果研究

目的:探讨压电骨皮质切开术即Piezocision技术在解除下牙列拥挤病例中的疗效。方法:选择需减数四颗第一前磨牙进行矫正治疗的错牙合畸形患者20例,平均分为Piezocision组10例和传统正畸组10例,对两组下牙列拥挤的排齐时间、牙根吸收及术后的疼痛不适进行对比,使SPSS 16.0统计软件进行数据分析。结果:Piezocision组下牙列拥挤解除所需时间(93.10±10.20)d较传统矫正疗程(120.30±8.01)d短,差异具有统计学意义(P<0.05),牙列排齐前后两组牙根长度均无明显吸收,差异无统计学意义(P>0.05),Piezocision组术后1周内患者诉疼痛不适和术区肿胀,但不影响正常生活。结论:Piezocision技术能够加速解除下牙列拥挤,且不伴发牙根吸收发生的风险,患者对该技术在治疗中应用的接受度较高。

点突变型HIF-1α诱导犬骨髓基质干细胞骨向分化的研究

目的:检测点突变型HIF-1α对犬骨髓基质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)骨向分化的作用。方法:采用LR重组系统构建慢病毒载体Lenti-WT(wild HIF-1α)、Lenti-MT(mutant HIF-1α)及对照组Lenti-LacZ。分别用Lenti-LacZ、Lenti-WT及Lenti-MT转染犬BMSCs,以LacZ组为对照,成功转染后,分别在0、1、4、7、14及21 d提取总RNA和蛋白质,通过RT-PCR和Western印迹检测目的基因在体外常氧条件下对BMSCs成骨因子表达的调控。将带有目的基因的BMSCs按2×105/孔接种至6孔板,分别于14 d和21 d,运用茜素红染色(alizarin red-S staining,ARS)检测其钙结节的表达。采用SPSS10.0软件包对数据进行统计学分析。结果:当MOI=9时,BMSCs的转染效率达90%以上。目的基因转染后第4天,BMSCs的成骨因子在mRNA和蛋白水平表达显著提高,14～21 d时达到高峰,并维持在高表达状态(P<0.05)。ARS结果表明,目的基因在常氧条件下可诱导BMSCs向成骨方向分化。结论:体外常氧条件下,突变型HIF-1α能够稳定表达且保持高度活性,Lenti-MT可显著提高犬BMSCs的成骨活性。

血管化组织工程骨研究进展

随着材料学和分子生物学的发展，运用组织工程技术修复标准骨缺损成为当前的研究热点。但在大体积骨缺损修复重建时，组织工程骨的血管化问题是制约其最终治疗效果的关键因素。骨组织工程研究中血管化问题的重要性日益彰显，而当组织工程骨的厚度超过100μm时，在体内构建能为细胞提供氧、营养及去除代谢废物的功能性血管会面临重大挑战。因此，血运重建被认为是骨组织工程继种子细胞、支架材料、细胞因子三大要素之后的第四大要素。现就血管化组织工程骨研究的最新进展综述。

口腔临床医学硕士研究生就业问题的调查与分析

目的在分析近5年安徽医科大学口腔医学院口腔临床医学硕士毕业生就业状况的基础上，调查在读硕士生对未来就业的选择及心理压力的变化，了解其变化趋势，为开展硕士生就业指导提供依据。方法汇总口腔医学院近5年（2006—2010年）毕业的口腔临床医学硕士就业状况，对66名在读口腔临床医学硕士生（2008—2010级）进行了就业选择及心理压力的匿名问卷调查。结果毕业生近5年在省级三甲医院的就业率下降明显，而在市级三甲医院就业率逐年上涨。在读硕士生希望到市级三甲医院工作的人数减少，愿意到非三甲医院工作及继续读博的人数在增加。学生普遍存在心理压力且不能有效释放。结论随着口腔临床医学硕士毕业生就业形势的变化，在读硕士生对未来就业的选择及心理压力也发生了相应的变化。了解这些变化，可以有针对性地提出解决问题的有效途径；同时在口腔临床医学硕士生的培养方式及就业指导方面也需相应调整。