乳脆蜜枣标准化栽培技术要点

乳脆蜜枣系从山东省枣庄市地方枣良种枣庄脆枣中选育出的早熟优质鲜食枣品种,2010年通过山东省林木品种审定委员会审定,2013年列入山东省农业科技成果转化资金项目,2015年列入国家级星火计划“山东枣庄地方枣品种标准化栽培”项目。近年来,项目组对乳脆蜜枣的标准化栽培关键技术进行了试验示范,取得了较好的效果,现将有关技术总结如下,供有关方面参考。

超早红樱桃丰产栽培技术

笔者于2008～2014年，对超早红樱桃配套栽培技术进行了试验示范，结果发现，其定植翌年结果，3年内丰产，是值得推广的樱桃优良品种。同时，笔者还规范了其生产和管理标准，为超早红樱桃的栽培提供理论指导。

超早红樱桃盆栽配套技术

经过3年对超早红樱桃盆栽技术的试验研究,研制了超早红樱桃盆栽营养基质,总结出超早红樱桃盆栽配套技术。

早脆蜜枣及其丰产技术

早脆蜜枣又名脆枣子。是枣庄市渴口乡秦崖一带农家传统栽培的极早熟鲜食枣品种。该品种多系根蘖繁殖,树势强旺,树冠成形快,结果早、丰产性强,一般栽后2年株产可达5kg左右。果实圆柱形,平均单果重16.2g,最大果重27g,果面粉白色,向阳面着鲜红晕,极美观。肉质酥脆无渣,汁液丰富,鲜果含糖量为41%。

共表达人μ阿片受体与Gq蛋白的稳定细胞株的建立及功能鉴定

建立共表达人μ阿片受体(humanμ-opiatereceptor,hMOR,OPRM)与Gq蛋白的CHO-Flp In稳定细胞模型,并鉴定其药理学功能,可为体外高通量筛选靶向OPRM的药物奠定基础。该研究首先构建重组表达质粒OPRM-pcDNA5/FRT,并进行鉴定;然后通过脂质体转染法将OPRM-pcDNA5/FRT、GqG66Di5-pIRES/puro3和FLP重组酶质粒POG44共转染CHO-Flp In细胞,经抗性加压和有限稀释法挑取耐药单克隆,采用FLIPR钙信号检测方法筛选阳性克隆株;最后,通过RT-q PCR对细胞中的OPRM和GqG66Di5m RNA表达水平进行检测,并选用OPRM激动剂DAMGO和抑制剂Naloxone对稳定细胞株的药理学功能进行鉴定。结果显示:经酶切确定了重组质粒的正确构建;通过重组质粒转染、抗生素加压筛选以及钙信号测定获得22个具有活性的克隆细胞株,其中15号细胞株的荧光信号值最高,命名为Gq-OPRM1-CHO;与对照组相比,Gq-OPRM1-CHO细胞组中OPRM与GqG66Di5基因m RNA水平分别升高约400倍和120倍;在Gq-OPRM1-CHO细胞中,FLIPR钙信号检测激动剂DAMGO的EC_(50)为0.02±0.002μmol/L,抑制剂Naloxone的IC_(50)为0.04±0.003μmol/L。该研究成功建立了OPRM与GqG66Di5蛋白稳定共表达的细胞模型Gq-OPRM1-CHO,该细胞株具有对OPRM激动剂和拮抗剂特异性反应的药理学功能。

共表达人Kappa阿片受体与Gq嵌合体GqG66Di5的稳定细胞株构建与鉴定

Kappa阿片受体(Kappa Opioid Receptor,KOR)是新药研究的重要靶标之一,建立稳定表达相应受体的细胞株是实现快速高效筛选靶向化合物的前提。通过构建人KOR过表达质粒,将其分别与5种不同的Gq嵌合体质粒共转染至CHO-FlpIn细胞,筛选出最佳Gq嵌合体;通过抗生素加压筛选以及单克隆化获得稳转细胞株;采用Western Blot检测KOR表达,并进一步通过FLIPR钙信号对细胞株的药理学功能进行鉴定。基于以上途径,本研究构建了稳定共表达人KOR与Gq嵌合体GqG66Di5的稳定细胞株CHO-OPRK1-Gq。该细胞株高表达KOR,具有对特异性激动剂U-69593(EC50=0.039μmol/L±0.006μmol/L)和抑制剂Naloxone(IC50=0.43μmol/L±0.28μmol/L)响应的药理学功能,实现了基于Gq途径介导信号转导的KOR功能检测。在CHOOPRK1-Gq细胞株的基础上,建立了体外高通量筛选靶向KOR配体的新方法,为研发靶向KOR的药物奠定了基础。

苦参凝胶对小鼠慢性湿疹的治疗作用

目的制备并表征载苦参碱泊洛沙姆水凝胶,探究其对小鼠皮肤慢性湿疹的治疗作用。方法以泊洛沙姆407、188为基质制备苦参凝胶,采用流变仪表征苦参凝胶黏弹性质。通过检测耳部肿胀度、质量差,血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量,以及通过对小鼠耳部组织病理切片、蛋白酶活化受体-2(PAR-2)免疫组织化学切片的观察,考察苦参凝胶对小鼠皮肤慢性湿疹的治疗作用。结果苦参凝胶流动性、铺展性良好,在皮肤表面可快速形成透明、有黏性的均一凝胶制剂。与正常组相比,模型组小鼠在慢性湿疹模型建立后的3、5和10 d耳部质量差、肿胀度明显增高(P<0.05);与模型组相比,苦参凝胶组小鼠慢性湿疹导致的耳部质量差、肿胀度明显降低(P<0.01),血清中促炎因子TNF-α、IL-6的水平明显降低(P<0.01),慢性湿疹组织中PAR-2的表达也明显降低(P<0.01,P<0.05)。结论苦参凝胶对慢性湿疹所致的表皮层损伤、真皮层炎性浸润均有一定的治疗作用,有望成为一种良好的治疗皮肤慢性湿疹的外用凝胶制剂。

治疗痤疮用茶树油立方液晶的研究

目的制备并表征茶树油立方液晶,考察其对痤疮常见致病菌金黄色葡萄球菌的体外抑制作用。方法以单油酸甘油酯、乙醇和水为基质制备茶树油立方液晶,通过伪三元相图法筛选最佳处方。采用扫描电镜和X-小角衍射表征立方液晶性质。测定茶树油立方液晶对金黄色葡萄球菌的抑菌率。结果茶树油立方液晶的最优处方为单油酸甘油酯、乙醇和水的比例为3.2∶1.4∶0.3(w/w/w)。所制备的立方液晶在室温下为透明、有黏性、凝胶状的半固体,经小角X线测试表明符合立方液晶的晶胞特征。扫描电镜观察其为棱角发亮的规则长方体。在偏光显微镜下为暗视野,符合立方液晶各向同性的光学性质。0.4 mg/ml茶树油立方液晶对金黄色葡萄球菌的抑菌率可达30%以上。结论茶树油立方液晶有望成为一种治疗痤疮用新制剂。

阿莫达非尼纳米晶体的制备与表征

目的制备阿莫达非尼纳米晶体,并进行性质表征、体外释放度考察。方法采用反溶剂沉淀技术制备其纳米晶体,以平均粒径为评价指标,采用正交设计实验优化其纳米混悬液的处方及制备工艺,通过冷冻干燥技术将纳米混悬液制备成纳米晶体。测定阿莫达非尼纳米晶体的粒径和多分散系数;采用X线粉末衍射法考察阿莫达非尼晶型转变情况;采用浆法比较其纳米晶体及原料药的溶出行为。结果制备阿莫达非尼纳米晶体粒径较小且均一,粒径约为100 nm,呈无定型形态;制成纳米晶体后,溶解度和溶出度明显提高;纳米化后阿莫达非尼晶型较纳米化前发生明显改变。结论粒径小且均匀的阿莫达非尼纳米晶体,可明显提高阿莫达非尼的溶出性能,有利于改善药物的生物利用度。

未经沙藏处理的文冠果种子清水浸种育苗试验

3月下旬对未进行沙藏处理的文冠果种子用清水浸泡20d左右,间隔1～2d换水1次,使其充分吸水,4月上中旬采用点播法常规育苗,当年平均发芽率88.67%,成苗率83%,苗木高度30～191cm,地径0.5～2.0cm,苗木复叶数22～93个,复叶长度为14～30cm,苗干节间距为1.11～2.00cm。折合每1hm2产苗26.60万株,其中一级苗18.80万株,占70.68%；二级苗3.32万株,占12.48%；三级苗2.78万株,占10.45%；等外苗1.70万株,占6.39%。

山东枣庄仲秋红油桃秋冬季管理关键技术

仲秋红油桃是枣庄市果树科学研究所2003年选育的晚熟油桃品种，2003年11月通过山东省科技厅组织的鉴定，2007年通过山东省林木品种审定。该品种果实圆球形，果皮全面着鲜红色，白肉型，硬溶质，含可溶性固形物12％，风味浓甜，黏核，平均单果重202克，在枣庄地区9月中旬成熟，具有白花结实特性，丰产稳产。

柿新品种‘应秋红’的选育

自1996年起对当地柿种质资源进行调查,1999年发现1个不完全甜柿单株,经2000~2011年多点多代高接换种试验和‘君迁子’（软枣）砧木嫁接苗建园试验,证明其遗传性状稳定、适应性较强。2011年通过枣庄市科技局组织鉴定,2012年获枣庄市科技进步奖三等奖,2013年通过山东省林木品种审定并定名为‘应秋红’柿（Diospyros kaki‘Ying Qiu Hong’）。

四种载药水凝胶预防缺氧性脑损伤的作用

目的探讨葛根素、葛胺酮(G20)、知母皂苷BⅡ、大麻二酚(CBD)的鼻用水凝胶对小鼠缺氧性脑损伤的预防作用。方法以泊洛沙姆407和泊洛沙姆188为基质,制备葛根素、G20、知母皂苷BⅡ、CBD的水凝胶。SPF级健康雄性BALB/c小鼠随机分为7组(n=5),分别为正常组、生理盐水组、空白凝胶组、葛根素组、G20组、知母皂苷BⅡ组、CBD组。采用常压密闭缺氧实验,连续鼻腔给药8 d后,以小鼠标准缺氧耐受时间、外周血细胞计数、脑组织病理变化、缺氧诱导因子(HIF-1α)表达水平为指标,考察4种受试药物的抗缺氧活性。结果G20和CBD水凝胶可显著延长常压密闭缺氧小鼠标准缺氧耐受时间(P<0.01,P<0.05);与生理盐水组比较,G20和CBD水凝胶组小鼠外周血中红细胞计数(P<0.01,P<0.05)和血红蛋白含量(P<0.05,P<0.05)显著提高,表明二者可增加小鼠外周血携氧能力。G20和CBD水凝胶可减少小鼠脑组织中炎性细胞数量,改善核固缩深染现象,表明二者可缓解缺氧导致的脑损伤。小鼠脑组织切片免疫组化结果显示,G20水凝胶组小鼠海马区HIF-1α表达水平显著降低(P<0.01),与正常组表达水平相近。结论鼻用G20水凝胶在小鼠常压密闭缺氧模型中具有良好的抗脑缺氧效果,其机制可能与其提高机体抗氧化能力、清除自由基和神经细胞保护作用有关。

雌三醇微球的制备及体外缓释效果评价

目的制备雌三醇微球,考察其外观形态、粒径、载药量、包封率及体外释放度,为萎缩性阴道炎治疗提供一种新制剂。方法用可生物降解的聚乳酸-羟基乙酸为微球材料,采用O/W单乳法制备雌三醇微球。分别用光学显微镜、扫描电镜观察外观形态,用激光粒度仪测定粒径。用无水乙醇溶解微球后,涡旋破碎,提取雌三醇,用紫外分光光度法测定药物含量,计算载药量、包封率。测定雌三醇微球体外释放率,评价其缓释效果。结果雌三醇微球呈圆整的球形粒子,粒径约3μm。载药量为19.1%,包封率为95.5%,在体外主要以扩散机制释药。结论将雌三醇制备成微球后,能实现缓释、降低给药频率,可应用于治疗萎缩性阴道炎。

特早熟耐贮甜油桃新品种——早艳脆油桃

1 品种特点 早艳脆油桃品种树姿开张,1年生枝条阳面暗红色,背面绿色,斜生.花芽起始节位低,为1～2节,复花芽较多.花量大,花粉多,自花授粉.果为大果型,果个较整齐,果形圆球形,果顶内凹,平均单果重173克,最大果重257克,果皮底色黄绿色,完全成熟时全面着鲜艳红色,果肉金黄色,硬而脆,含可溶性固形物12.60%,微香,品质极上.极耐贮运,常温下货架期15天左右,过熟果亦不软、不溶、不烂,尤其无烂顶现象.一般情况下,苗圃内的"三当苗"即可大量成花,栽后第二年株产可达3.20千克,早果性极强,大树高接换头,第二年即可获得可观的产量.丰产稳产.适合露地高密度栽培,尤其适合大棚温室保护地栽培,是一般大棚油桃的更新换代品种.在山东枣庄,3月底芽开始萌动,4月初开花,果实5月底成熟,较同园的曙光油桃早熟3～5天,较同园的丽春、五月阳光、极早红、东方红等油桃早熟2～3天.为目前国内成熟期最早的油桃品种.是极具开发潜力的极早熟耐贮运油桃优良品种.

紫杉醇微球、多柔比星微球联合应用的细胞毒性评价

目的制备紫杉醇(PTX)、多柔比星(DOX)微球,并考察PTX微球、DOX微球联合(PTX微球&DOX微球)抑制乳腺癌细胞的增殖与转移作用,探讨其促细胞凋亡的机制。方法首先采用CCK-8法评价PTX微球&DOX微球是否具有协同作用。以小鼠乳腺癌4T1-luc细胞为模型,考察PTX微球&DOX微球的细胞毒作用。采用划痕实验考察二者对4T1-luc细胞的迁移抑制作用;采用流式细胞术考察二者促进4T1-luc细胞凋亡作用;通过细胞吞噬实验考察4T1-luc细胞对PTX和DOX微球的吞噬作用。结果与原料药组相比,PTX微球和、DOX微球对4T1-luc细胞抑制作用更为明显(P<0.01),二者对4T1-luc的IC50值分别为261.3和331.3 nmol/L,抑制作用呈剂量依赖性。PTX微球&DOX微球组对4T1-luc细胞迁移的抑制效果优于PTX&DOX组(P<0.01);DOX微球比游离DOX更易被4T1-luc细胞摄取而发挥细胞毒作用;PTX微球&DOX微球组促进4T1-luc细胞凋亡效果优于PTX&DOX组(P<0.01)。结论与PTX&DOX相比,PTX微球&DOX微球对4T1-luc细胞增殖抑制作用显著,能有效抑制乳腺癌细胞的迁移,促细胞凋亡作用明显。

超早红樱桃主要特性及栽培技术

山东省枣庄市市中区是著名的中国樱桃之乡，盛产的大窝娄叶、大尖叶等品种均为国内珍稀的地方种质资源，齐村镇莲汪、前良、郭村一带20世纪90年代末期尚有百年以上树龄中国樱桃大树数千株，是大窝娄叶老树资源分布最为集中的区域，自2000年起，枣庄市果树科学研究所等单位开展了中国樱桃资源的收集整理保护和利用研究，选育出具有果个大、成熟早、品质优、易丰产特点的樱桃品种超早红。现将其品种特点及栽培技术简介如下。

星天牛对山东枣庄地区悬铃木的危害调查及防治研究

2002-2009年,对危害三球悬铃木（platanus orientalis Linn.）的星天牛（Anoplophora chinensis Forster）进行调查研究。结果表明,星天牛在枣庄地区主要危害三球悬铃木树干地面以上20-80 cm处,危害程度呈逐年上升趋势,产卵部位亦呈逐年升高趋势,给人工捕捉和毒签防治带来困难。3月上中旬,根施80%敌百虫晶体50 g、3%甲拌辛颗粒剂75 g,可有效控制其危害。

‘枣庄红石榴’四抗栽培配套技术研究

对制约北方石榴产业发展的主要问题进行试验研究,通过栽培措施的改进和创新,改善石榴树对根结线虫、裂果和寒害、旱害等自然灾害的抗御能力。