人脐带间充质干细胞对大鼠早发性卵巢功能不全的影响

目的探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)尾静脉移植和卵巢原位移植对化疗诱导早发性卵巢功能不全(POI)大鼠的影响及机制。方法将32只性成熟雌性SD大鼠随机均分为4组,空白对照组不给予特殊处理,模型组、hUCMSCs尾静脉移植组(hUCMSCs-iv组)和hUCMSCs卵巢原位移植组(hUCMSCs-oi组)先通过连续腹腔注射环磷酰胺15 d建立POI模型。成模后模型组大鼠尾静脉注射500μl生理盐水,hUCMSCs-iv组一次性尾静脉注射1×10^(6)个hUCMSCs(重悬于500μl生理盐水),hUCMSCs-oi组从卵巢系膜侧一次性多点注射25μl hUCMSCs悬液(重悬于生理盐水,浓度为4×10^(7)/ml)。治疗14 d后取材检测。统计各组大鼠体重、卵巢指数、动情周期变化,HE染色观察卵巢病理形态变化,酶联免疫吸附法统计大鼠血清雌二醇(E_(2))、卵泡刺激素(FSH)和抗苗勒管激素(AMH)水平,实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测卵巢组织凋亡相关基因和蛋白表达水平,TUNEL染色观察卵巢细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测卵巢组织卵泡刺激素受体(FSHR)表达水平。结果(1)与对照组比较,模型组大鼠多数(87.5%)动情周期紊乱,体重、卵巢湿重和卵巢指数均显著降低(P<0.05),卵泡数减少;血清FSH水平显著升高而E_(2)和AMH水平显著降低(P<0.05);卵巢组织Bax mRNA表达水平显著升高(P<0.05)而Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05);TUNEL染色阳性率显著增加、FSHR阳性表达显著减少(P<0.05)。(2)与模型组比较,两个hUCMSCs治疗组(hUCMSCs-iv组和hUCMSCs-oi组)动情周期异常率(分别为37.5%、25.0%)均明显降低,卵巢组织结构及各级卵泡数量均有不同程度的恢复,大鼠体重和卵巢指数均显著增加(P<0.05);血清FSH水平均显著降低(P<0.05)而E_(2)和AMH水平均显著升高(P<0.05);卵巢组织Bax mRNA表达水平均显著降低(P<0.05)而Bcl-2 mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);卵巢组织Bax蛋白和cleaved caspase-3/caspase-3蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)而Bcl-2蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);卵巢组织细胞TUNEL染色阳性率均显著降低(P<0.05);卵巢颗粒细胞膜上的FSHR蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。结论本研究通过尾静脉和卵巢原位移植hUCMSCs两种途径,均可有效改善化疗诱导的POI大鼠卵巢功能和卵泡结构,这种治疗作用可能与hUCMSCs的抗凋亡效应有关。