透明颤菌血红蛋白基因在链霉菌中的克隆和表达

以质粒ｐＩＪ７０２和ｐＩＪ６９９为载体，构建了两个带有透明颤菌（Ｖｉｔｒｅｏｓｃｉｌａ）血红蛋白（ＶＨｂ）基因（Ｖｇｂ）的大肠杆菌－链霉菌穿梭质粒并转化Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１、变青链霉菌（Ｓ．ｌｉｖｉｄａｎｓ）ＴＫ６４及蒽环类抗生素阿柔比星（阿克拉菌素）产生菌——加利利链霉菌（Ｓ．ｇａｌｉｌａｅｕｓ）ＡＴＣＣ３１１３３，经ＣＯ结合差光谱法、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳分析表明Ｖｇｂ在大肠杆菌和链霉菌中得到表达。通过改变培养条件研究溶氧对Ｖｇｂ表达的影响，结果表明在低溶氧的情况下，ＶＨｂ表达量增加。同时发现，在低氧浓度时，ＶＨｂ的表达有利于链霉菌菌体的生长，其菌体生长量高于同样条件下的对照菌株（Ｖｇｂ－）１７％～２９％。

外源基因在链霉菌中的表达

链霉菌是一类好氧、丝状的革兰阳性菌,广泛存在于土壤中.在业已发现的7000多种抗生素中,有60%以上是由链霉菌产生的.此外,它还产生了一些重要的工业用酶,例如纤维素酶、半纤维素酶、蛋白酶、木质素酶、木聚糖酶、淀粉酶、胰蛋白酶等.这些酶可以将一些无用的森林、农业废物转化为有用的石油、动物饲料或工业原料,并被应用于一些工业生产过程中(如造纸工业).所以,链霉菌是一个非常重要的工业微生物.链霉菌在其土壤生存环境中,必须大量地分泌各种胞外酶,以便将土壤中的多种有机物质分解成可以被自己吸收利用的小分子营养物质,以利于自己的生存.这说明链霉菌中存在着一种高效分泌蛋白质的机制.近年来,链霉菌作为基因工程的宿主菌已得到了广泛的研究,并建立了卓有成效的导入外源基因的方法.由于链霉菌具有很强的蛋白质分泌能力,它作为蛋白质分泌的宿主菌有着大肠杆菌无可比拟的优点,即可使蛋白质的分离纯化过程较为简化和经济,因此,它引起了人们的兴趣并对此进行了深入的研究.目前,已在与蛋白质的分泌有关的诸方面取得了一些可喜的研究进展.本文将从宿主载体系统、启动子、信号肽、密码便向、终止于、分泌机制及目前已成功地表达分泌的外源蛋白等几个方面加以描述.