甲强龙冲击治疗小于25%新月体且非肾病综合征的IgA肾病的回顾性分析

目的探讨甲强龙冲击治疗肾脏病理为小于25%新月体(牛津分型:C1)且非肾病综合征的IgA肾病的疗效及安全性。方法回顾分析本中心2012年7月-2015年12月行肾穿刺活检确诊为C1且非肾病综合征的IgA肾病,选取其中联合ACEI(ARB)和甲强龙冲击治疗的患者33例,并随机选取其中单纯使用ACEI(ARB)的31例患者作为对照组,观察24-48个月,分析两组患者24h尿蛋白定量,肌酐清除率(eGFR)年平均下降速率,进入终末期肾病(ESRD)的发生率以及不良事件发生率。结果在48个月的观察期间,甲强龙组有0人进入ESRD,而对照组有3人(9.68%)进入ESRD。Kaplan-Meier生存分析提示两组ESRD发生率没有统计学差异(P=0.171)。甲强龙组eGFR年平均下降速率(-1.67 8.07mL/min/1.73m^2),明显低于对照组(3.82 7.84mL/min/1.73m^2)(P=0.008)。随访6个月、12个月时,甲强龙组尿蛋白完全缓解率及部分缓解率均高于对照组,有显著性差异。随访24个月时,甲强龙组尿蛋白部分缓解率高于对照组,但两组完全缓解率无统计学差异。随访36个月、48个月时两组完全缓解率及部分缓解率均无统计学差异。随访期间两组感染发生率(χ~2=3.355,P=0.067)及严重感染发生率(χ~2=3.226,P=0.072)无显著性差异,但甲强龙冲击治疗与感染有关联(OR=2.971,95%CI,0.903-9.780),与严重感染有较强关联(OR=8.077,95%CI,0.931-70.043)。随访期间,两组均无新发糖尿病、骨折、消化道出血、死亡病例。结论对于肾穿刺活检确诊为C1(>=1并<25%肾小球有新月体)且表现为非肾病综合征的IgA肾病患者,甲强龙冲击治疗对蛋白尿的早期缓解有益,且对蛋白尿的持续缓解及延缓eGFR下降有潜在获益。但同时因甲强龙冲击治疗与较高的感染率相关,进行治疗决策时需充分考虑其感染相关风险。

miR-222调控PARP-1在高糖致人肾脏系膜细胞tPA/PAI-1紊乱中的作用

目的探讨微小RNA-222(miR-222)调控多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1(PARP-1)在高糖诱导人肾脏系膜细胞(HMC)组织型纤溶酶原激活物/纤溶酶原激活物抑制物-1(tPA/PAI-1)紊乱中的作用。方法体外培养HMC,实时定量PCR分别检测正常糖(5 mmol/L)及高糖(25 mmol/L)刺激下miR-222表达;另将体外培养的HMC分为正常糖组、25 mmol/L高糖组、高糖+miR-222 mimics阴性对照组、高糖+miR-222 mimics组4组,运用蛋白免疫印迹法检测PARP-1蛋白表达,ELISA法测定细胞上清液tPA、PAI-1的分泌蛋白。结果实时定量PCR显示,高糖组HMC在24 h时miR-222mRNA表达水平是正常糖组的2.537倍。高糖组HMC中PARP-1蛋白表达高于正常糖组(P<0.05),高糖+miR-222 mimics组HMC中PARP-1蛋白表达低于高糖组(P<0.05),而高糖+miR-222 mimics阴性对照组与高糖组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常糖组比较,高糖组的tPA和tPA/PAI-1降低、PAI-1升高(P均<0.05);与高糖组比较,高糖+mimics组的tPA和tPA/PAI-1升高、PAI-1降低(P均<0.05)。高糖+miR-222 mimics阴性对照组与高糖组tPA、PAI-1及tPA/PAI-1比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论高糖可增强HMC PARP-1及分泌型PAI-1的蛋白表达、减弱分泌型tPA的蛋白表达,下调tPA/PAI-1比值。miR-222可有效下调靶蛋白PARP-1的表达,并有效改善高糖诱导的tPA/PAI-1紊乱。

康肾颗粒对透析前慢性肾功能衰竭患者肾功能和蛋白尿的影响

目的:观察康肾颗粒对透析前慢性肾功能衰竭患者肾功能和蛋白尿、血清白蛋白水平的影响。方法:对2007年1月～2010年10月在我院肾内科住院及门诊就诊的慢性肾功能衰竭未透析患者96例进行临床观察。按数字随机表法将入选患者随机分为治疗组(64例)和对照组(32例);对照组按慢性肾功能衰竭综合治疗方案处理,治疗组在综合治疗基础上,加用康肾颗粒12 g,每日3次,冲服,治疗时间为12周;观察治疗前后患者肾功能及24 h尿蛋白排泄量、血清白蛋白水平的变化。结果:治疗12周后,治疗组血清尿素氮、肌酐水平分别为(11.6±5.0)mmol/L、(274.8±158.3)μmol/L,较治疗前的(13.6±6.4)mmol/L、(316.7±167.3)μmol/L明显下降,治疗组治疗前后血尿素氮、血肌酐比较差异有统计学意义(P=0.015、P=0.004);估算肾小球滤过率上升到(25.9±17.0)ml/(min.1.73 m2),与治疗前比较差异有统计学意义(P=0.003)。与对照组治疗后上述指标相比差异有统计学意义[血尿素氮,(11.6±5.0)mmol/Lvs(12.7±5.8)mmol/L,P=0.040;血肌酐,(274.8±158.3)μmol/L vs(295.0±139.9)μmol/L,P=0.013;肾小球滤过率,(25.9±17.0)ml/(min.1.73 m2)vs(24.4±15.7)ml/(min.1.73 m2),P=0.033]。两组治疗后24 h尿蛋白定量均较治疗前明显下降[治疗组,(1 177±971)mg/24 h vs(1 824±1 973)mg/24 h,P=0.006;对照组,(1 339±710)mg/24 h vs(1 702±1506)mg/24 h,P=0.012]。治疗组24 h尿蛋白定量治疗后与对照组比较差异有统计学意义[(1 177±971)mg/24 h vs(1 339±710)mg/24 h,P=0.030]。治疗组治疗后血清白蛋白水平上升[(36.8±5.7)g/L vs(34.6±6.1)g/L,P=0.020)],但与对照组治疗后比较差异无统计学意义(P=0.637)。结论:康肾颗粒明显改善透析前慢性肾功能衰竭患者肾功能,减少慢性肾功能衰竭患者蛋白尿,从而延缓慢性肾脏病进展。

中性粒细胞/淋巴细胞比值在预测维持性血液透析患者生存预后中的价值

目的探讨中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)与维持性血液透析(MHD)患者死亡风险之间的关系。方法选择83例在我院肾内科接受MHD治疗的患者,收集了患者首次透析时的人口统计学资料、临床资料、实验室检查结果。所有患者随访时间到2011年10月。应用Cox比例风险模型对影响患者预后的危险因素进行分析。结果多因素Cox回归因子筛选结果显示,NLR与死亡风险呈正相关[HR=0.452(0.223～0.916);P=0.027];中性粒细胞数目与死亡风险呈正相关[HR=3.981(1.443～10.984);P=0.008];其他风险因素还包括高龄、低白蛋白水平,而未发现淋巴细胞数目与患者死亡风险存在相关性。结论在接受MHD的终末期肾脏病患者中,NLR及中性粒细胞数目是预测患者生存预后的指标。本研究提示对具有较高的NLR值(≥3.88)及中性粒细胞数目(≥4.37×109/L)的首次进入血液透析的患者需要给予更密切的观察监护,以及投入更多的精力纠正可改善的心血管危险因素。

NADPH氧化酶在TGF-β_1诱导大鼠小管上皮细胞表达炎症因子中的作用

【目的】观察转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠肾小管上皮细胞单核细胞趋化因子-1(MCP-1)及白细胞介素-6(IL-6)表达的影响,并探讨NADPH氧化酶在其中的作用。【方法】以大鼠肾小管上皮细胞株(NRK-52E)为研究对象,采用TGF-β1(10ng/mL)刺激0h,2h,4h,8h,12h,24h分别收取RNA;刺激0h,12h,24h,48h,72h分别收取细胞上清液;部分实验中培养的细胞在刺激前用NADPH氧化酶抑制剂DPI(0.1,1,5,10μmol/L)预处理1h,然后含10ng的TGF-β1无血清DMEM/F12培养液分别培养12h(收集RNA)和24h(收集细胞上清液)。所有实验重复3次。细胞内活性氧(ROS)的产生采用激光共聚焦显微镜观察。NADPH氧化酶p22phox、gp91phox、p47phox和p67phox亚单位以及MCP-1和IL-6mRNA的表达采用RT-PCR检测。细胞上清液中MCP-1的含量采用ELISA检测。【结果】TGF-β1可显著上调NADPH氧化酶p67phox亚单位mRNA的表达,8h为对照的2.43倍(P<0.01),24h达3.59倍(P<0.01)。但对p22phox、gp91phox和p47phox亚单位mRNA表达无显著影响。TGF-β1可显著增加细胞内ROS产生,DPI预处理后ROS产生较TGF-β1刺激组降低了43.69%(P<0.05)。TGF-β1可显著上调MCP-1和IL-6mRNA及蛋白的表达。DPI预处理可明显逆转TGF-β1诱导的MCP-1和IL-6的上调表达。【结论】TGF-β1可促使细胞ROS产生增加。TGF-β1可能通过NADPH氧化酶依赖的ROS介导了大鼠肾小管上皮细胞MCP-1及IL-6的上调表达。

维持性血液透析患者血尿酸水平与死亡率的关系

目的:探讨血尿酸水平与维持性血液透析患者的死亡风险之间的关系。方法:选择80例在广东医学院附属深圳南山医院肾内科接受维持性血液透析治疗的患者,收集了患者首次透析时的人口统计学资料、临床资料、实验室检查结果。所有患者随访时间到2012年7月。应用Cox比例风险模型对影响患者预后的危险因素进行分析。结果:多因素Cox回归因子筛选结果显示,血尿酸水平与死亡风险呈负相关(HR0.992,95%CI 0.985-0.999,P=0.035);血白蛋白水平与死亡风险呈负相关(HR0.844,95%CI0.732-0.974,P=0.021);其它风险因素还包括高龄、既往吸烟史、既往脑血管病史。结论:在接受维持性血液透析的终末期肾脏病患者中,低血尿酸水平、低蛋白血症是死亡的危险因素。对具有较低的血尿酸水平(小于440μmol/L)的首次进入血液透析的患者需要给予更密切的观察,以及积极改善其营养状态。

转化生长因子β1对大鼠腹膜间皮细胞IL-8表达的影响

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)IL-8表达的影响及机制。方法 10μg.L-1 TGF-β1刺激体外培养的RPMCs,RT-PCR法检测IL-8的表达;体外转染Smad7和pcDNA3空载体至RPMCs后,观察10μg.L-1 TGF-β1刺激RPMCs对IL-8和p38表达的影响。采用p38抑制剂SB203580(10μmol.L-1)预处理RPMCs后,加入10μg.L-1 TGF-β1,观察阻断p38信号通路对IL-8表达的影响。结果与0h刺激组相比,3、6、12hTGF-β1刺激组IL-8表达明显增加(P<0.05或P<0.01),其中3h达高峰。上调表达Smad7以及SB203580均能显著抑制TGF-β1刺激RPMCs产生IL-8(P<0.01)。与正常对照组比较,TGF-β1刺激磷酸化p38(p-p38)的表达显著增加(P<0.05),与TGF-β1刺激组比较,外源性Smad7转染组p-p38的表达显著减弱(P<0.05)。结论 TGF-β1促进RPMCs IL-8的表达,其机制可能是TGF-β1通过活化p38磷酸化来实现的。

虫草素通过下调TGF-β抑制高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化

目的:探讨虫草素对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响。方法:体外培养大鼠近端肾小管上皮细胞株(NRK52E细胞株),分为正常对照组(葡萄糖5.5 mmol/L,NG组)、高糖组(葡萄糖30 mmol/L,HG组)、高糖+虫草素组(葡萄糖30 mmol/L+虫草素10μg/ml,HG+C组)。分别于刺激12 h,24 h,48 h后收集细胞。应用定量RT-PCR测定NRK52E TGF-β,E-cadherin,α-SMA mRNA的表达;Western印迹方法检测TGF-β、E-cadherin、α-SMA蛋白的表达。结果:高糖刺激后NRK52E细胞的TGF-β和α-SMA mRNA及蛋白表达明显高于正常糖组(P<0.01),而虫草素组TGF-β和α-SMA mRNA及蛋白表达显著低于高糖组(P<0.05);高糖诱导的NRK52E细胞E-cadherin mRNA及蛋白水平明显降低(P<0.01);而虫草素组NRK52E细胞E-cadherin mRNA及蛋白水平显著高于高糖组(P<0.05)。结论:虫草素可以明显抑制高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化,其机制可能是通过下调TGF-β实现。

1α,25-二羟基维生素D3对高糖刺激下大鼠肾小管上皮细胞CTGF表达的影响及其机制

目的探讨1α,25-二羟基维生素D3对高糖刺激下大鼠肾小管上皮细胞中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响及其机制。方法将大鼠肾小管上皮细胞NRK52E传代培养。将传代培养后的细胞按是否加入干预剂分为3组:正常对照(A)组(D-葡萄糖6μmol·L^(-1))、高糖(B)组(D-葡萄糖30μmol·L^(-1))和1α,25-二羟基维生素D3干预(C)组(1α,25-二羟基维生素D3 5nmol·L^(-1),预处理1h,再给予D-葡萄糖30μmol·L^(-1))。3组干预后再进行培养。将培养后的3组细胞按培养时间的不同分为3个亚组:Aa 12、24、48h3组,Bb 12、24、48h3组和Cc 12、24、48h3组。采用Real-time PCR检测各组CTGF mRNA的表达水平,采用Western blot检测各组CTGF蛋白、β-catenin蛋白的表达水平。结果与Aa 24h组比较,Bb 24h组CTGF mRNA、CTGF蛋白、β-catenin蛋白表达水平均升高(均P<0.01);与Bb 24h组比较,Cc 24h组CTGF mRNA、CTGF蛋白、β-catenin蛋白表达水平均降低(均P<0.01)。结论在高糖体外培养的大鼠肾小管上皮细胞中1α,25-二羟维生素D3能够显著降低高糖刺激的CTGF表达水平,其机制可能是阻断Wnt/β-catenin信号通路来实现的。

多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶-1(PARP-1)在高糖致大鼠肾脏系膜细胞细胞外基质沉积中的作用

目的探讨多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶-1(PARP-1)在高糖(25 mM)致大鼠肾脏系膜细胞细胞外基质沉积中的作用。方法①体外培养大鼠肾脏系膜细胞株(MCs 1097),使用高糖(25 mM)处理大鼠肾脏系膜细胞,部分实验组中应用PARP-1抑制剂PJ34(3×10-6M)进行干预处理。②RT-PCR和Western blot检测PARP-1、纤维粘连蛋白(FN)、胶原Ⅳ(COLⅣ)的mRNA及蛋白表达。③高通量比色测定法检测PARP-1的活性。结果①高糖显著诱导大鼠肾脏系膜细胞PARP-1 mRNA和蛋白的表达,分别较低糖对照组增加72.3%和68.4%(P<0.05),PJ34可明显抑制高糖诱导的PARP-1 mRNA和蛋白的过度表达,mRNA和蛋白分别为高糖组的31.8%和55.5%(P<0.05)。同时,高糖显著诱导大鼠肾脏系膜细胞PARP-1激活,高糖组为低糖对照组活性的1.77倍(P<0.05),PJ34可显著抑制高糖诱导的PARP激活,活性降低为高糖组的67.8%(P<0.05)。②高糖显著增加COLⅣ和FN表达,PJ34显著抑制高糖诱导的COLⅣ和FN mRNA过度表达(分别为高糖组的68.2%和54.7%(P<0.05);COLⅣ和FN蛋白水平的变化与RNA水平变化相一致,PJ34可显著抑制高糖诱导的COLⅣ和FN蛋白表达(分别为高糖组的54.0%及66.6%(P<0.05)。结论高糖可以诱导培养的大鼠肾脏系膜细胞内PARP激活,PARP-1表达增加,PJ-34预处理可以明显降低高糖诱导的大鼠肾脏系膜细胞内PARP的激活以及下游FN及COLⅣ的高表达,提示PARP1参与了肾脏系膜细胞细胞外基质沉积的发生发展过程。

多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶-1介导高糖致大鼠肾脏系膜细胞tPA/PAI-1的紊乱

目的探讨多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶-1(PARP-1)在高糖(25mmol/L)作用下大鼠肾脏系膜细胞tPA/PAI-1纤溶系统紊乱中的作用。方法 (1)体外培养大鼠肾脏系膜细胞株(MCs1097),使用高糖(25mmol/L)处理大鼠肾脏系膜细胞,部分实验组中应用PARP-1特异性抑制剂PJ34(3×10-6mol/L)进行干预处理。(2)RT-PCR及Western blot检测PARP-1的mRNA及蛋白表达。(3)高通量比色测定法检测PARP-1的活性。(4)ELISA法测定细胞上清液tPA、PAI-1的分泌蛋白。结果 (1)高糖显著诱导大鼠肾脏系膜细胞PARP-1mRNA和蛋白的表达,PJ-34可明显抑制高糖诱导的PARP-1mRNA和蛋白的过度表达。同时,高糖显著诱导大鼠肾脏系膜细胞PARP-1激活,PJ-34可显著抑制高糖诱导的PARP激活。(2)高糖轻度减少大鼠肾脏系膜细胞分泌型tPA的蛋白表达,显著增加大鼠肾脏系膜细胞分泌型PAI-1的蛋白表达,导致tPA/PAI-1比值降低,PJ-34显著预防高糖诱导的上述改变。结论高糖可以诱导培养的大鼠肾脏系膜细胞内PARP激活,PARP1表达增加,PJ-34预处理可以明显降低高糖诱导的大鼠肾脏系膜细胞内PARP的激活以及下游tPA/PAI-1纤溶系统紊乱,提示高糖可能通过过度激活PARP来诱导tPA/PAI-1功能紊乱。

康肾颗粒对透析前慢性肾功能衰竭患者超敏C反应蛋白及纤维蛋白原的影响

目的观察康肾颗粒对透析前慢性肾功能衰竭患者血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血浆纤维蛋白原(Fbg)水平的影响。方法对2007年1月至2010年10月在深圳第六人民医院肾内科住院及门诊就诊的慢性肾功能衰竭未透析患者96例进行临床观察。按数字随机表法将入选患者随机分为两组,对照组32例按慢性肾功能衰竭综合治疗方案处理,试验组64例在综合治疗基础上,加用康肾颗粒12 g每日3次冲服,治疗时间为12周。观察治疗前后患者血清hs-CRP、Fbg及空腹血糖(FPG)、血红蛋白(Hb)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)的变化。结果治疗12周后治疗组hs-CRP、Fbg水平较治疗前均明显下降(P<0.05),与对照组治疗后相比,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗后血清TC水平较治疗前下降(P<0.05),但与对照组治疗后血清TC水平相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论康肾颗粒可减轻透析前慢性肾功能衰竭患者微炎症状态及血液高凝状态,改善脂质代谢紊乱。

活性维生素D3对透析前慢性肾脏病患者肾脏保护作用研究

目的:探讨活性维生素D3对透析前慢性肾脏病(CKD)患者的肾保护作用及安全性。方法:选择透析前3～4期慢性肾脏病患者200例,随机分为治疗组和对照组各100例。对照组给予优质低蛋白饮食、α-酮酸、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)和(或)血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)和(或)钙通道拮抗剂以及抗血小板集聚等常规治疗,治疗组在常规治疗的基础上加用骨化三醇(0.5μg/d,疗程1年)。分别在治疗前和治疗后3,6,9和12月检测患者肾功能、血清白蛋白、甲状旁腺素、血钙、磷及24h尿蛋白定量等指标,并观察其副作用。结果:两组治疗后3月血肌酐、尿素氮、血尿酸和24h尿蛋白均明显下降(P<0.05),估算肾小球滤过率和血清白蛋白显著上升(P<0.05)。治疗组治疗12月后肾功能进一步改善(P<0.05),尿蛋白进一步减少(P<0.05),而对照组治疗12月后肾功能和尿蛋白与治疗3月相比无明显改变。对照组患者血钙降低,血磷升高,甲状旁腺素水平明显升高(P<0.05)。治疗组患者血钙升高,血磷降低,甲状旁腺素水平明显下降(P<0.05),但无明显高钙血症等副作用。结论:骨化三醇能显著改善透析前CKD患者的肾功能,减少蛋白尿,抑制继发性甲状旁腺素分泌,具有明显的肾脏保护作用,且无明显副作用。

尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶对原发性肾病综合征并发急性肾损伤的诊断价值

目的探讨原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,PNS)并发急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的危险因素及尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)在PNS并发AKI中的预测价值。方法 PNS患者78例,其中PNS并发AKI患者(AKI组)21例,PNS未并发AKI(非AKI组)患者57例。对2组患者记录年龄、性别、有无感染、有无使用血管紧张素转换酶抑制剂和(或)血管紧张素受体拮抗剂(ACEI/ARB)及非甾体类抗炎药(NSAIDS),记录入院后的血压[收缩压(SBP)、舒张压(DBP)],测定2组患者血尿素氮(BUN)、血尿酸(BUA)、血肌酐(SCr)、外周血白细胞计数(WBC计数)、血红蛋白(Hb)、血总胆固醇(TC)、血三酰甘油(TG)、血纤维蛋白原(Fbg)和血清C-反应蛋白(CRP)、血浆白蛋白(Alb)及NAG、尿β2-微球蛋白(β2-MG)、24h尿蛋白定量的水平。结果 PNS并AKI的发生率为26.9%(21/78),AKI组男性发病率较非AKI组高,差异有统计学意义(P<0.05)。AKI组患者血BuN、血BUA、血Fbg、尿NAG、尿β2-MG、24h尿蛋白定量水平均明显高于非AKI组(P<0.05或P<0.01),AKI组患者血浆Alb水平明显低于非AKI组(P<0.05)。单因素Logistic回归分析结果显示:男性、血BUA、血浆Fbg、尿NAG、24h尿蛋白定量水平高是PNS并发AKI的危险因素。多因素Logistic回归分析结果显示:尿NAG升高是PNS并发AKI的独立危险因素[OR1.059、OR(95%CI)1.005～1.115、P<0.01]。尿NAG升高诊断PNS并发AKI特征曲线下面积(AUCROC)为0.903(95%CI 0.826～0.979);尿NAG诊断PNS并发AKI的阳性参考值为>83U.L-1,敏感性为0.789,特异性为0.936。结论尿NAG是早期发现、早期诊断PNS并发AKI的理想生物学标记物。

蛋白质非酶糖基化终产物对足细胞自噬与凋亡的影响

目的:探讨蛋白质非酶糖基化终产物(AGEs)作用下人足细胞自噬和凋亡发生情况及可能的信号转导通路。方法:体外培养永生化人足细胞,以AGEs 100 mg/L分别不同时间(0、4、8、12、24 h)刺激足细胞。Western blotting检测足细胞自噬标记性蛋白微管相关蛋白1B轻链3-II/I(LC3-II/I)、自噬相关基因Atg5、哺乳动物雷帕霉素靶点受体(m TOR)信号通路相关蛋白p70 S6激酶1(p-p70 S6 Kinase,p70 S6Kinase)表达水平;荧光显微镜观察自噬溶酶体形成标志蛋白溶酶体膜蛋白(LAMP2a);AnnexinⅤ/7-AAD双染流式细胞术检测足细胞早期和晚期凋亡。结果:(1)与0 h相比,100 mg/L AGEs刺激后足细胞LC3BII/I表达水平在4、8、12、24 h均明显下降(P<0.05);Atg5蛋白表达水平在8、12、24 h均明显下降(P<0.05),在12 h下降达到最高峰;p-p70 S6 Kinase水平在4、8、12 h升高(P<0.05),在12 h达峰,在24 h再次下降;(2)免疫荧光染色结果显示,与0 h相比,100 mg/L AGEs刺激足细胞12 h LAMP2a表达明显减少;(3)与0 h相比,100 mg/L AGEs刺激后足细胞发生早期凋亡+晚期凋亡比例在4、8、12、24 h逐渐增加(P<0.05),在12 h达峰(14.07%)。结论:AGEs刺激下人足细胞自噬减少,凋亡增加,伴随着m TOR/p70S6 Kinase信号通路激活。AGEs可能通过m TOR/p70 S6 Kinase信号通路途径调节足细胞自噬与凋亡,从而导致足细胞损伤。

小剂量螺内酯对透析前慢性肾脏病患者蛋白尿的影响

目的观察小剂量螺内酯在非糖尿病慢性肾脏病(CKD)1～3期患者中的降蛋白尿的作用及其应用的安全性。方法对2010年1月～2011年10月在深圳市第六人民医院肾内科住院及门诊就诊的非糖尿病CKD 1～3期患者55例进行临床观察。按数字随机表法将入选患者随机分为两组。入选者均按慢性肾脏病综合治疗方案处理,并加用贝那普利(10 mg/d)治疗,对照组27例,治疗组28例在原治疗基础上,加用螺内酯(20 mg/d)口服,观察时间为6个月,观察治疗0、3、6个月后患者24 h尿蛋白排泄量、肾功能及血清钾离子水平的变化。结果治疗组中有1例患者在治疗1个月后出现高钾血症(血清K+浓度为6.31 mmol/L)而退出试验;治疗组和对照组治疗3、6个月后24 h尿蛋白定量水平较治疗前均明显下降[治疗组3个月:(1 314±302)mg/24 h vs(2 005±571)mg/24 h,P=0.006;6个月:(1 295±426)mg/24 h vs(2005±571)mg/24 h,P=0.001。对照组3个月:(1 689±603)mg/24 h vs(2 087±636)mg/24 h,P=0.026;6个月:(1 503±598)/24 h vs(2 087±636)mg/24 h,P=0.012];两组治疗6个月后24 h尿蛋白定量水平较同一组治疗3个月后水平无明显下降(P>0.05);治疗组治疗3、6个月后与对照组治疗3、6个月后相比,24 h尿蛋白定量水平低,差异有统计学意义[3个月:(1 314±302)mg/24 h vs(1 689±603)mg/24 h,P=0.033;6个月:(1 295±426)mg/24 h vs(1 503±598)mg/24 h,P=0.027];治疗组治疗3、6个月后血清尿素氮、肌酐水平较治疗前略有上升,估算肾小球滤过率略下降,但与治疗前及对照组治疗3、6个月后上述指标相比差异无统计学意义;治疗组治疗后3、6个月血清钾离子水平略上升[3个月:(4.23±0.41)mmol/L;6个月:(4.27±0.50)mmol/L)],但与治疗前[(4.01±0.44)mmol/L]及对照组治疗3个月[(4.11±0.46)mmol/L]、6个月[(4.16±0.43)mmol/L]后水平相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论小剂量螺内酯能降低非糖尿病慢性肾脏病1～3期患者蛋白尿,且其作用独立于其降压及ACEI作用之外,其对血清钾的影响有待进一步的观察。

妊娠期糖尿病患者并发尿路感染的临床特点和危险因素分析

目的探讨妊娠期糖尿病（Gestational diabetes mellitus，GDM）患者并发尿路感染的临床特点和相关危险因素。方法收集2014年1月至12月在深圳市南山区人民医院确诊为GDM患者1068例，回顾性分析GDM并发尿路感染的发生率、菌群分布特点和耐药情况，采用Logistic回归分析GDM并发尿路感染的相关危险因素。结果GDM并发尿路感染130例，感染发生率为12．17％（130／1068），中段尿培养共检出142株致病菌，其中以大肠埃希菌（67．61％，96／142）和肺炎克雷伯菌（11．97％，17／142）为主。大肠埃希菌对半合成青霉素类、喹诺酮类、磺胺类抗菌药物的耐药性较高，而对碳青霉烯类、氨基糖苷类抗生素及呋喃妥因的耐药性相对较低；肺炎克雷伯菌对氨苄西林完全耐药，对碳青霉烯类、氨基糖苷类抗生素、哌拉西林／他唑巴坦、氨曲南则完全敏感。Logistic回归分析显示，糖化血红蛋白〉6．5％[OR=8．631，95％可信区间（CI）2．969—25．090，P〈0．01]、空腹血糖〉5．3mmol／L（OR=3．116，95％C／2．040～4．761，P〈0．01），低密度脂蛋白〉2．6mmol／L（OR=1．649，95％CI 1．083～2．511，P〈0．05）、三酰甘油〉1．7mmol／L（OR=2．986，95％CI 1．256～7．112，P〈0．05）、有既往尿路感染史（OR=5．561，95％CI 1．315—23．519，P〈0．05）及分娩史（OR=1．631，95％CI1．018—2．614，P〈0．05）是GDM并发尿路感染的独立危险因素。结论GDM患者并发尿路感染发生率较高，积极控制血糖、血脂，对有既往尿路感染史及分娩史的孕妇加强健康教育可减少GDM并发尿路感染的发生。

常规降糖与联合N-乙酰半胱氨酸对糖尿病慢性肾脏疾病患者PARP-1及GAPDH活性影响的研究

目的观察采用常规降糖治疗与联合N-乙酰半胱氨酸(NAC)治疗对糖尿病慢性肾脏病(CKD)患者多聚ADP核糖聚合酶(PARP)、3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)活性的影响。方法将60例CKDⅢ期患者随机分为常规治疗组(A组)30例;联合NAC治疗组(B组)30例;另选取同期健康体检者30名为正常对照(NC)组,治疗12周。观察治疗前后外周单核细胞PARP活性、全血GAPDH活性的变化。结果 A、B组治疗后PARP活性下降[A组(3.70±0.06)vs(3.02±0.07)U/mg;B组(3.74±0.11)vs(2.66±0.04)U/mg],GAPDH活性升高[A组(4430.8±279.4)vs(5136.6±321.6)U/ml,B组(4495.2±324.7)vs(6104.4±275.3)U/ml],且B组治疗后PARP及GAPDH活性改变与A组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论联合NAC治疗与常规治疗相比,可更有效地逆转CKD患者PARP、GAPDH活性的异常。

miR-222调控多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1在高糖致人肾系膜细胞外基质沉积中作用

目的探讨miR-222调控多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶-1(PARP-1)在高糖致人肾系膜细胞外基质沉积中的作用。方法体外培养人肾系膜细胞株(HMC),使用高糖(25 m M)处理人肾系膜细胞,部分细胞应用miR-222抑制物或miR-222模拟物进行干预处理,Western blot检测PARP-1及FN蛋白表达。结果高糖培养组HMC在24 h时miR-222的表达上调,较对照组上调2.53倍,两组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。高糖+miR-222模拟物组HMC转染miR-222模拟物,可有效下调其靶蛋白PARP-1的表达,是高糖培养组的52.2%;高糖+miR-222抑制物组HMC转染miR-222抑制物,可有效上调其靶蛋白PARP-1的表达,较高糖培养组升高17.3%,两组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。HMC细胞转染miR-222模拟物,可有效下调FN的表达,是高糖培养组的60.9%;而转染miR-222抑制物可有效上调纤维连接蛋白(FN)的表达,较高糖培养组升高18.8%,两组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-222可通过调控PARP-1促进HMC基质增生。