CRISPR/Cas9介导的adeG基因敲除大肠杆菌细菌模型的建立

【目的】鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)是引起医院内感染的重要条件致病菌之一,耐药性AB是目前防治的棘手问题。细菌外排泵是引起耐药性的重要原因之一,拟通过PCR检测鲍曼不动杆菌耐药结节分化家族(resistance-nodulation-division,RND)外排泵基因adeLFGH的分布,探索其与耐药性的关系;建立adeG耐药基因模型,利用CRISPR/Cas9系统对其进行靶向敲除的初步研究。【方法】运用肉汤微量稀释法检测耐药性分布;PCR筛查13株临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌adeLFGH外排泵基因并分析其分布;扩增RND外排泵关键基因adeG并构建耐药细菌模型;设计特异性sgRNA,利用CRISPR/Cas9系统进行靶向敲除,药敏实验检测其敲除效果。【结果】13株临床鲍曼不动杆菌对多黏菌素E敏感,对左氧氟沙星耐药率较低,仅为38.5%,对头孢他啶的耐药率为92.3%,对妥布霉素耐药率为84.6%,对其他临床常见药物耐药率均为100%。13株多重耐药鲍曼不动杆菌adeLFGH携带率为100%。药敏实验结果显示adeG模型耐药菌株的哌拉西林、替卡西林/克拉维酸以及哌拉西林/他唑巴坦由敏感转为耐药,氯霉素、美罗培南、米诺环素由敏感转为中介。特异性sgRNA介导CRISPR/Cas9系统靶向敲除效率不同。pCas9-sgRNA1(adeG)靶向后哌拉西林/他唑巴坦的耐药性得到了逆转,对妥布霉素、四环素、多西环素、米诺环素的耐药性也有不同程度的降低;pCas9-sgRNA2(adeG)和pCas9-sgRNA3(adeG)使哌拉西林/他唑巴坦由耐药恢复到了中介,但对其他药物的耐药性逆转效果并不显著。【结论】特异性CRISPR/Cas9系统可以特异性敲除耐药基因,提示可为耐药菌的治疗提供新的思路和方法。

年龄调整D-二聚体水平在预测老年股骨粗隆间骨折术前下肢深静脉血栓中的临床价值

目的评估年龄调整D-二聚体水平在预测老年股骨粗隆间骨折术前下肢深静脉血栓中的临床价值。方法收集2020年1月至2021年12月河北医科大学第三医院收治的427例老年股骨粗隆间骨折患者的临床资料,根据是否术前存在下肢深静脉血栓将患者分为血栓组和非血栓组。收集所有患者的一般人口学资料、入院时血液检测指标、合并疾病及受伤相关资料。以年龄调整D-二聚体水平作为主变量,其他变量作为协变量,采用多因素Logistic回归模型分析年龄调整D-二聚体水平在预测老年股骨粗隆间骨折术前下肢深静脉血栓中的临床价值。结果427例老年股骨粗隆间骨折患者中,63例患者术前发生了深静脉血栓,364例患者术前未发生深静脉血栓。以传统的0.5 mg/L为截断值时,两组D-二聚体水平﹥0.5 mg/L的患者比例比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);以年龄调整的D-二聚体为截断值时,血栓组中D-二聚体水平大于截断值的患者比例明显高于非血栓组,差异有统计学意义(P﹤0.01)。多因素分析结果显示,年龄调整的D-二聚体是老年股骨粗隆间骨折患者术前发生下肢深静脉血栓的独立危险因素(P﹤0.05),而传统截断值(0.5 mg/L)下的D-二聚体不是老年股骨粗隆间骨折患者术前发生下肢深静脉血栓的独立危险因素(P﹥0.05)。另外,年龄、超声监测时间间隔亦均是老年股骨粗隆间骨折患者术前发生下肢深静脉血栓的独立危险因素(P﹤0.05)。拟合优度检验结果显示,最终模型的拟合度良好(Nagelkerke R2=0.224,P﹥0.05)。结论年龄调整D-二聚体较传统截断值(0.5 mg/L)能够更好地预测下肢深静脉血栓的发生,可考虑作为构建风险预测模型的常规因子,有助于临床对老年股骨粗隆间骨折患者术前下肢深静脉血栓的预防和管理进行优化。

不同回收组套回收超长期时间窗OptEase下腔静脉滤器效果

目的观察Cook回收组套回收超长期时间窗OptEase下腔静脉滤器的效果。方法回顾性分析289例接受OptEase可回收下腔静脉滤器取出术患者,242例于正常时间窗(置入滤器14天内)回收滤器,其中127例(A组)使用OptEase回收组套、115例(B组)使用Cook回收组套;47例于超长期时间窗(滤器置入>28天)回收,其中22例使用OptEase回收组套(C组)、25例使用Cook回收组套(D组)。比较A组与B组、C组与D组滤器回收成功率、回收时间及并发症发生率。结果A、B组均成功回收滤器,2组间滤器回收时间、并发症发生率差异均无统计学意义(P均>0.05)。D组滤器回收成功率高于C组(P<0.05),回收时间及并发症发生率均低于C组(P均<0.05)。各组均未见严重并发症。结论Cook滤器回收组套用于回收超长期时间窗OptEase下腔静脉滤器效果较好。

标准化操作在下肢深静脉血栓形成经导管接触溶栓治疗中的临床意义

目的评价标准化操作在下肢深静脉血栓形成经导管接触溶栓治疗过程中,对预防问题发生、降低并发症及改善临床治疗效果的意义。方法回顾性分析276例下肢深静脉血栓患者经导管溶栓治疗治疗的临床资料。将实施标准化操作前治疗的患者归为A组(124例),将实施标准化操作后治疗的患者归为B组(152例),比较2组出现问题及并发症的发生率。结果A组问题发生率32.26%(40/124)显著高于B组问题发生率5.26%(8/152)(P<0.05)。经导管接触溶栓治疗过程中最常见的问题表现为溶栓导管移位,A组有21例(16.94%),B组有3例(3.29%)。最严重错误操作的问题表现为A组1例溶栓导管、抗凝微泵、血管鞘三通、尿激酶微泵错误连接,直接导致血栓沿导管生长,延长溶栓时间。B组未发生明显的出血并发症(0/152),显著低于A组并发症发生率8.06%(10/124),其中最严重的并发症问题表现为A组1例未及时发现头痛头晕等脑出血早期征象。结论下肢深静脉血栓形成经导管接触溶栓治疗时,标准化操作可以降低问题的发生并可以提高临床治疗效果。

大鼠骨骼肌缺血再灌注致肺损伤的实验研究

目的观察大鼠骨骼肌不同缺血时间再灌注造成肺损伤的变化。方法将雄性Wistar大鼠24只随机分为4组,Ⅰ组为对照组,仅进行常规麻醉,不阻断后肢血流;Ⅱ组为阻断后肢血流2 h再灌注6 h;Ⅲ组为阻断后肢血流4 h后再灌注6 h;Ⅳ组为缺血8 h后继续再灌注6 h;检测大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)、肺组织丙二醛(MDA)含量、肌肉组织及肺组织的病理变化。结果(1)LDH水平:实验后,Ⅰ组变化不明显,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组呈上升趋势,与Ⅰ组比较,差异有统计学意义(P<0.05),且Ⅳ组>Ⅲ组>Ⅱ组(P<0.05)。(2)MDA水平:实验后,Ⅰ、Ⅱ组变化不明显,Ⅲ、Ⅳ组呈上升趋势,且Ⅳ组>Ⅲ组>Ⅱ、Ⅰ组(P<0.05)。(3)肌肉组织光镜结果随缺血时间的延长损伤依次加重,Ⅳ组骨骼肌组织细胞大片坏死。而肺组织损伤仅见在Ⅲ、Ⅳ组,且程度逐渐加重。结论大鼠骨骼肌缺血再灌注后组织细胞损伤依缺血时间的延长而加重,缺血4 h再灌注6 h时可继发肺损伤。

下腔静脉滤器植入术后出现腰痛的原因分析及治疗效果

目的探讨下腔静脉滤器植入术患者不同类型滤器植入后出现腰痛的原因及其临床治疗效果。方法回顾性分析2002年1月至2018年6月河北医科大学第三医院339例下腔静脉滤器植入患者的临床资料,根据植入滤器的类型,将患者分为永久滤器组(153例)及回收滤器组(186例)。滤器植入术后患者均行下腔静脉造影,根据下腔静脉造影异常与否,永久滤器组/回收滤器组又各分为2个亚组(共4个亚组):(1)下腔静脉造影异常组(永久异常亚组,28例);(2)下腔静脉造影正常组(永久正常亚组,125例)/(1)下腔静脉造影异常组(回收异常亚组,46例);(2)下腔静脉造影正常组(回收正常亚组,140例)。观察并记录各组及亚组患者腰痛发生率、腰痛程度,下腔静脉造影异常情况;并分析比较两组患者腰痛程度及治疗效果。结果(1)腰痛发生率:与永久滤器组比较,回收滤器组腰痛发生率更高,两组比较差异有统计学意义(10.22%比2.61%,P<0.05)。与永久正常亚组比较,永久异常亚组腰痛发生率更高,两组比较差异有统计学意义(10.71%比0.80%,P<0.05);与回收正常亚组比较,回收异常亚组腰痛发生率更高,两组比较差异有统计学意义(34.78%比2.14%,P<0.05);与永久异常亚组比较,回收异常亚组腰痛发生率更高,两组比较差异有统计学意义(34.78%比10.71%,P<0.05)。(2)腰痛程度及治疗结果:永久滤器组4例出现腰痛,均为Ⅰ度,疼痛自行缓解。回收滤器组19例患者出现腰痛:15例为Ⅰ度,其中13例疼痛自行缓解,2例需口服镇痛药缓解;3例为Ⅱ度,使用注射镇痛药后2例缓解,1例滤器取出后缓解;1例为Ⅲ度,使用注射镇痛药至滤器回收后缓解。结论下腔静脉滤器体内植入术后引起腰痛的原因与滤器损伤血管壁有关,不同结构滤器对血管壁损伤不同,腰痛程度以Ⅰ度为主,大多可耐受并自行缓解,不耐受及不缓解者镇痛治疗效果较好。

硬化剂介入治疗精索静脉曲张外科术后复发的临床效果

目的分析左侧精索静脉曲张外科术后复发的原因及聚桂醇泡沫硬化剂介入治疗效果。方法选择精索静脉曲张外科术后复发,在我院行聚桂醇泡沫硬化剂介入治疗的患者23例,术中行精索静脉造影,根据不同的造影特征,分析精索静脉曲张外科术后复发原因并进行介入治疗;分别于术后3天、10天、30天观察临床症状及体征的改善情况;术后12个月随访观察复发情况;对介入治疗术前(术前组)与术后精液质量进行对比性分析,术后3个月(术后3个月组)、6个月(术后6个月组)、9个月(术后9个月组)、12个月(术后12个月组)精液质量各检测1次。结果左侧腹股沟高位精索静脉结扎位置过低16例,静脉造影表现为精索精脉远端静脉呈多发的、大小不等的团块状囊状扩张,主干表现为明显扩张、迂曲;术中漏扎精索血管5例,其中包括1例迷走供血性精索静脉,漏扎精索血管静脉造影表现为精索静脉分支仍有部分显示,迷走供血性精索静脉造影表现为在正常精索静脉走形区外可见一较粗大迂曲静脉,与精索精脉远端团状曲张的静脉相连接,并参与供血;右精索静脉通过盆底静脉丛交通支供应左侧已经结扎的精索静脉2例,静脉造影表现为左侧精索精脉未显影,右侧精索精脉显影,右侧精索精脉通过盆底静脉丛交通支,进入左侧精索静脉,参与曲张精索静脉供血;23例患者复发的曲张精索静脉,术中经导管注入聚桂醇泡沫硬化剂栓塞,造影表现为精索静脉下段及远端未见显影;介入治疗术后3天阴囊坠胀症状消失10例,减轻9例,无变化4例,阴囊内曲张精索静脉萎缩8例,无变化15例;术后10天阴囊坠胀症状消失19例,减轻3例,无变化1例,阴囊内曲张精索静脉萎缩18例,无变化5例;术后30天23例患者阴囊坠胀症状均消失,阴囊内曲张静脉均萎缩;随访12个月无复发。术后3个月组与术前组精液质量比较,有不同程度的改善,术后6个月组、术后9个月组、12个月组与术前组精液质量比较均有改善(P<0.05)。术后6个月组、术后9个月组、12个月组精液质量分析参数变化不大,治疗效果相对稳定。结论聚桂醇泡沫硬化剂介入治疗左侧精索静脉曲张外科术后复发,可明确复发原因,改善临床症状及精液质量,具有较好的临床治疗效果。