短程免疫法制备高效价抗血清研究

目的:探索快速制备免疫血清的方法和效果。方法:采用短程免疫法,分别以伤寒沙门菌O抗原和卵黄抗原分组小剂量连续多次免疫家兔后,收集抗血清,用ELISA间接法测定抗体效价。结果:ELISA结果显示伤寒沙门菌O抗原和卵黄抗原抗血清最终分别达到1∶20 480和1∶10 240的高效价。结论:短程免疫法所制备抗血清效价高,亲和力强。

噬菌体抗体库淘筛方法的比较研究

目的:比较噬菌体抗体库的淘筛方法,从而为得到亲和力高、特异性强的抗体克隆打下基础。方法:在包被好抗原的2个细胞培养瓶中加入噬菌体抗体库,一个采用先直接加入宿主菌感染后,再将培养瓶内残留结合物洗脱中和后感染的方法,另一个则采用先洗脱并中和的噬菌体感染宿主菌,与抗原结合的剩余的噬菌体再行直接感染,将2种方法所得到的感染菌和援救所得的噬菌体进行CFU和PFU测定。结果:从实验的数据中可以发现,采用第一种方法所得次级库的容量要大于后一种方法所得的初级库。结论:噬菌体抗体库的淘筛方法必须按照实验的具体情况进行选择,如果要求严谨度适中,则可以采用直接感染的方法淘筛。

抗体库构建中影响库容量的因素探讨

目的:探讨在噬菌体抗体库的构建过程中,提高转化效率的最优条件。方法:通过改变感受态细菌的浓度、电击时间的长短以及连接产物的纯化方法,从而找出最佳条件。结果:实验证明:在仪器的电压、电阻、电容等条件设定不变的情况下,感受态细菌的OD600在0.4左右,电击时间为2 s,转化效率最高。结论:连接产物进行酚-氯仿抽提后转化效率也会大大提高。