麻杏石甘汤通过调节肺组织糖酵解干预病毒性肺炎的实验研究

目的探索麻杏石甘汤通过影响肺组织糖酵解而治疗病毒性肺炎的作用机制。方法通过鼻腔接种法建立甲型H1N1流感病毒株A/PR/8/34感染小鼠模型,给药6天后,计算小鼠体质量变化、肺指数和肺指数抑制率,苏木素—伊红(hemotaxylin-eosin staining,HE)染色观察肺组织病理变化;生化检测小鼠肺组织糖酵解代谢物丙酮酸、乳酸的含量,以及糖酵解关键酶己糖激酶(hexokinase,HK)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性;ELISA法检测小鼠肺组织炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin 1 Beta,IL-1β),以及抑炎因子白细胞介素-10(interleukin 10,IL-10)的变化;免疫蛋白印迹法检测肺组织中葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,GLUT1)、调控糖酵解关键因子缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1-Alpha,HIF-1α)、促炎巨噬细胞标记物白细胞分化抗原80(cluster of differentiation 80,CD80),以及抑炎巨噬细胞标记物白细胞分化抗原206(cluster of differentiation 206,CD206)的表达变化。结果给药6天后,与正常组相比,模型组体重明显降低(P<0.01)、肺指数显著升高(P<0.01),肺部炎性细胞浸润明显,肺组织糖酵解代谢产物丙酮酸与乳酸的含量明显升高(P<0.01)、糖酵解关键酶己糖激酶、乳酸脱氢酶的活性增强(P<0.01),肺组织炎症因子TNF-α、IL-1β水平升高(P<0.01)、抑炎因子IL-10水平降低(P<0.01),葡萄糖转运蛋白GLUT1表达降低(P<0.01)、调控糖酵解关键因子HIF-1α及促炎巨噬细胞标记物CD80呈现高表达(P<0.01),抑炎巨噬细胞标记物CD206表达减少(P<0.01)。麻杏石甘汤、奥司他韦、2-脱氧葡萄糖(2-Deoxy-D-Glucose,2DG)对以上结果均有不同程度干预。结论麻杏石甘汤可能通过抑制肺组织糖酵解过程以及糖酵解驱动的促炎巨噬细胞活化,从而抑制肺组织过度炎症反应,减轻病毒性肺炎肺损伤。

银莱汤对胃肠积热合并肺炎大鼠5-HT水平及Th17/Treg细胞平衡的影响

目的探究银莱汤对胃肠积热合并肺炎大鼠5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)水平,以及辅助性T细胞17(T helper cell 17,Th17)与调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)细胞平衡的影响,阐明银莱汤治疗胃肠积热合并肺炎的相关机制。方法将30只4周龄SPF级大鼠随机分为正常组、胃肠积热组、肺炎组、胃肠积热合并肺炎组、银莱汤组治疗组,每组6只。正常组给予大鼠维持饲料、纯水灌胃、纯水雾化;胃肠积热组给予高热量饲料配合牛奶灌胃制备胃肠积热模型;肺炎组采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(0.5 mg/mL)雾化吸入制备肺炎模型;胃肠积热合并肺炎组以特制高热量饲料联合LPS雾化制备胃肠积热合并肺炎模型;银莱汤治疗组在胃肠积热合并肺炎模型的基础上给予银莱汤(每100g体重按照0.56 g/mL)灌胃。每日监测大鼠进食量、体质量、肛温等指标。采用HE染色观察肺组织病理学改变;酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组大鼠血清中5-HT及白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、IL-17A、IL-10、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等细胞因子水平;蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测肠系膜淋巴结(mesenteric lymph nodes,MLNs)中Th17细胞、Treg细胞特异性转录因子Rorγt和Foxp3的表达水平;RT-PCR和WB检测结肠组织色氨酸羟化酶(tryptophan hydroxylase,Tph)1的表达。结果与肺炎组相比,胃肠积热合并肺炎组大鼠肺部炎性损伤明显;血清5-HT、IL-10水平降低,IL-17A水平升高,TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎因子水平升高;结肠Tph1的mRNA及蛋白表达水平降低;MLNs中Rorγt蛋白表达升高、Foxp3蛋白表达降低。与胃肠积热合并肺炎组相比,银莱汤治疗组大鼠肺部炎性损伤减轻,血清5-HT水平、IL-10水平升高,IL-17A水平降低,TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎因子水平降低;结肠Tph1 mRNA及蛋白表达水平升高;MLNs中Rorγt蛋白表达降低、Foxp3蛋白表达升高。结论胃肠积热合并肺炎可导致大鼠机体炎性因子水平升高、5-HT水平降低以及Th17/Treg细胞失衡;银莱汤可以通过调节胃肠积热合并肺炎大鼠5-HT水平,调节Th17/Treg细胞平衡,进而起到治疗作用。

基于TLR4/NF-κB信号通路探讨银莱汤治疗幼龄大鼠肺炎模型的作用机制

目的基于TLR4/NF-κB信号通路探讨银莱汤治疗幼龄大鼠肺炎的作用机制。方法将40只SPF级4周龄雄性大鼠随机分为4组,分别为正常组、模型组、银莱汤组和醋酸泼尼松组,每组10只。使用LPS(0.5 mg/mL)连续雾化吸入3 d制备肺炎模型。第4天麻醉后取血及相关脏器组织,采用ELISA试剂盒检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平的变化;HE染色观察肺组织形态学变化;Western blotting法检测肺组织中TLR4、My D88、TRAF6、NF-κB p65、p-IκBα、IκBα蛋白的表达。结果与正常组相比,模型组大鼠的血清炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显升高(P<0.05),肺组织中的TLR4、MyD88、TRAF6、p-IKBα、NF-κB p65蛋白含量表达明显升高(P<0.05),IKBα蛋白含量表达明显降低(P<0.05)。与模型组相比,银莱汤组和醋酸泼尼松组大鼠的血清炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显降低(P<0.05),肺组织中的TLR4、MyD88、TRAF6、p-IKBα、NF-κB p65蛋白含量表达明显降低(P<0.05),IKBα蛋白含量表达明显升高(P<0.05)。结论银莱汤可以通过调控TLR4/NF-κB炎症信号通路中的TLR4、MyD88、TRAF6、IKBα、p-IKBα、NF-κB p65蛋白表达水平,降低血清中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平。

基于TNF-α/NF-κB信号通路探讨银莱汤治疗肺炎的作用机制

目的基于肿瘤坏死因子-α(transforming necrosis factor-α,TNF-α)/核转录因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)信号通路探讨银莱汤治疗肺炎的作用机制。方法将40只SPF级4周龄雄性大鼠随机分为4组,分别为正常组、肺炎组、银莱汤治疗组和醋酸泼尼松组,每组10只。使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(0.5 mg/mL)连续雾化吸入3天制备肺炎模型。第4天麻醉后取血及相关脏器组织。采用HE染色观察肺组织、结肠组织形态学变化;ELISA法检测各组大鼠肺组织和结肠组织中炎症因子TNF-α、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平的变化;Western blotting法检测肺组织和结肠组织中肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosis factor receptor-1,TNFR1)、TNFR1相关死亡结构域蛋白(TNFR1-associated death domain protein,TRADD)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TNF receptor associated factor2,TRAF2)、受体相互作用蛋白1(receptor interacting protein1,RIP1)、IκB激酶β(ikappaB kinaseβ,IKKβ)、细胞核因子-κBp65(nuclear factor-κBp65,NF-κBp65)蛋白的表达。结果与正常组相比,肺炎组大鼠肺、结肠组织中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显升高(P<0.05),肺、结肠组织中TNFR1、TRADD、TRAF2、RIP1、IKKβ、NF-κBp65蛋白含量表达明显升高(P<0.05)。与肺炎组相比,银莱汤治疗组和醋酸泼尼松组大鼠肺、结肠组织中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显降低(P<0.05),肺、结肠组织中TNFR1、TRADD、TRAF2、RIP1、IKKβ、NF-κBp65蛋白含量表达明显降低(P<0.05)。结论银莱汤可以调控TNF-α/NF-κB信号通路中的TNFR1、TRADD、TRAF2、RIP1、IKKβ、NF-κBp65蛋白表达水平,降低肺、结肠中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平,银莱汤通过TNF-α/NF-κB信号通路改善肺、肠组织的病理损伤,达到肺、肠同治的作用。